原生质体融合选育耐高温耐盐红螺菌的研究

为选育耐高温耐盐红螺菌用于其粉状制剂研制,以降解水产养殖水体亚硝基氮功能达90%以上的耐盐红螺菌与能在60～70℃下生长的嗜热脂肪芽孢杆菌为出发菌株,通过正交试验探讨2种菌株的原生质体融合条件。分别对融合子进行温度、生长盐度和净化水质等功能测定,检出性能较优的融合子,同时采用电镜、细胞色素吸收光谱等方法,将融合子优良株与2种亲株进行比较鉴别。实验结果表明,2种菌株原生质体融合的最优条件为温度37℃,作用时间3 h,聚乙二醇(PEG)浓度为40%。在该优化条件下原生质体融合率为1.536%,筛选获得3株能在30～50℃良好生长的融合子(a、b、c)。融合子生长耐受温度较耐盐红螺菌亲株提高66%,但耐受盐度、降解养殖水体氨氮与亚硝基氮功能均与耐盐红螺菌亲株相近。其中融合子a菌株具有生长更快、性能更稳定的特点,其细胞形态特征、革兰氏染色属性、色素吸收峰等均与耐盐红螺菌相似。     

环境因子对3种微生态制剂净化总氨氮、亚硝酸盐氮作用的影响

研究了不同盐度、pH和温度条件下荚膜红假单胞菌Rhodopseudomonas capsulata C12、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis及假丝酵母菌Candida sp．对高浓度总氨氮（9～10mg／L）和亚硝酸盐氮（1～2mg／L）净化作用的影响。结果表明：荚膜红假单胞菌C12可在盐度为0～40、pH为7～9、温度为25—37℃条件下的淡水、海水养殖中发挥高效净化亚硝酸盐氮的作用;枯草芽孢杆菌较适宜在盐度为0～20、pH为5．5-8．5、温度为20-57℃条件下的水体中发挥净化总氨氮的作用;而假丝酵母菌净化总氨氮的较适宜条件为淡水、pH5．5～7．0、温度20～30℃。     

豆粕的微生物发酵降解

【研究目的】以脱脂豆粕粉为原料,具产蛋白酶能力的菌株CHD21为生产菌种进行发酵。菌株所产蛋白酶作用于豆粕粉中的大豆蛋白将其水解为大豆多肽。【方法】以水解度作为指标,对菌株CHD21发酵降解豆粕的条件进行了优化。通过液体发酵探讨菌株CHD21适宜的培养基组成、接种时间、接种量与发酵时间。【结论】结果表明：在豆粕含量8％,麸皮含量2％的液体发酵培养基中接种4％的菌龄为19h的液体种子,于温度40℃,转速120r／min条件下发酵48h,豆粕蛋白的水解度可达42％,比条件优化前的水解度提高了40％。     

地衣芽孢杆菌降解水产养殖中残余饵料的特性研究

从土壤及饲料添加剂中筛选获得了一株能较高效降解水产养殖中残余饵料蛋白、淀粉的功能菌,经鉴定为地衣芽孢杆菌.通过研究养殖水体中饲料浓度、pH值、温度等因素对地衣芽孢杆菌降解饲料中蛋白质、淀粉的影响.结果表明,该菌降解饲料中蛋白质、淀粉的适宜条件为:饲料浓度≤5g/L,pH值6～7,温度25～30℃,盐浓度0～1%,溶氧浓度约4mg/L.地衣芽孢杆菌在这种水体生态条件下接种5%,饲料中的蛋白质与淀粉降解率约为60%.     

植物多糖的提取及对双歧杆菌的增殖作用

采用水提法提取枸杞、红枣、甘薯、淮山4种植物原料及花菇多糖,正交设计优化提取条件,并将植物提取多糖用于双歧杆菌的增殖试验。结果表明,植物多糖提取优化条件,加水比例分别为:枸杞、红枣1∶10,花菇1∶15,甘薯1∶3,淮山1∶9;提取温度:80～95℃;提取时间1～3h。5种原料在优化条件下的多糖提取率相对于植物取样质量分别为:枸杞51.8%、红枣53.2%、花菇28.2%、甘薯18.8%、淮山18.3%。5种原料提取多糖对双歧杆菌的增殖作用:菌体在对数生长期生长速率常数(R)提高135%～85%,世代时间(G)缩短56%～44%。     

荚膜红假单胞菌应用型扩大培养液的优化试验

采用正交设计试验，探讨基础营养培育液中酯酸钠，酵母膏，蛋白胨等5种成分对荚膜红假单胞菌（Rhodopseudomona capsulata)生长繁殖的影响，优化应用型扩大培养液配方，结果表明，醋酸钠和酵膏对荚膜红假单胞菌生长繁殖具有显著的影响，荚膜红假单胞菌应用型扩大培养液可为：在1L的养殖水体中添加6g醋酸钠和0．1g酵母膏。     

洗涤厂排污口可培养中度嗜热菌的多样性

为考查洗涤厂热废水排放口土壤在常年人为热环境下的可培养嗜热菌的多样性,采集洗涤厂热废水排放口附近的湿热泥土,应用不同培养基分离纯化泥土中的可培养嗜热菌,并对获得的纯培养细菌进行16S rDNA鉴定和系统发育相关分析。结果表明：分离纯化得到的29株不同表型的纯培养菌株均属于坚壁菌门芽孢杆菌纲,归属于5个属11个种,分别是地芽孢杆菌属 Geobacillus 3个种,芽孢杆菌属 Bacillus 3个种,无氧芽孢杆菌属 Anoxybacillus 3个种,解脲芽孢杆菌属Ureibacillus 1个种和高温放线菌属 Thermoactinomyces 1个种,属种多样性丰富,菌株资源具有潜在开发应用价值。     

耐盐红螺菌拮抗物质的分离纯化及特性分析

耐盐红螺菌的无菌代谢产物经CM—Sephadex C-50弱阳离子交换色谱柱分离，获得3个蛋白吸收峰：PSB2-1’峰，PSB2—2’峰，PSB2—3’峰。其中PSB2-1’峰对病原菌具有拮抗作用。PSB2-1’峰组分样品经透析脱盐，后进行SDS—PAGE电泳检测，其冷冻干燥样品进行毛细管电泳与MALDI—TOF质谱鉴定，结果表明PSB2-1’峰的抑菌蛋白物质已达到较高纯度，其准确分子量为9290Da。耐盐红螺菌拮抗物质具有较好的热稳定性，对紫外线不敏感，但对酸碱性较敏感；用蛋白酶处理，其抑菌活性受枯草杆菌蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响。耐盐红螺菌产生的拮抗物质可初步归属于小分子热稳定肽(SHSP)。     

耐盐红螺菌对水产养殖病害细菌的拮抗作用

为探明光合理细菌对水产养殖动物病害的生物防治功能，对病鳖、鳗及南美白对虾动物体上的病原菌进行分离、纯化与鉴定，人工感染健康动物检测致病性；探讨耐盐红螺菌对病害细菌分离株的仰菌效能，和有效抑菌作用时细胞所处的生长期。试验结果表明，水产动物病害细菌分离株为孤菌属，气单胞菌属和假单胞菌属菌株；耐盐红螺菌的代谢产物对商害细菌分离株均有抑制作用，其平坂柳菌圈为1.2-1.4cm，最低抑菌浓度多为4-8倍稀释液；耐盐红螺菌的拮抗物质随细胞对数生长过程中生成，至细胞衰亡期达到最大值。     

枯草芽孢杆菌CS16发酵条件及其抑菌活性物质研究

对香蕉枯萎病病原菌有较强抑制作用的枯草芽孢杆菌CS16进行发酵条件优化,通过单因素和正交试验得到CS16抑菌活性较强的培养基配方和发酵条件。结果显示:培养基配方为玉米粉0.5%,豆粕1.5%,K2HPO40.01%;发酵条件为pH 7.5,接种量4%,装瓶量50mL/250mL,培养时间24h,发酵温度30℃时,菌量达3.3×109cfu·mL-1,与优化前相比提高了42倍,抑菌活性提高了7%。抑菌活性物质测定结果表明CS16中抑菌活性物质可分为杀死病原菌和抑制病原菌菌丝生长2类物质。