进境种猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速检测

采用ELISA方法对812头份进境种猪血清进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体检测,结果发现编号213的血清呈阳性反应,其余呈阴性反应。对213号血样进行实时荧光RT-PCR扩增和凝胶RT-PCR扩增,结果显示荧光RT-PCR扩增呈阳性,凝胶RT-PCR扩增获得374 bp大小特异性片段,与已知的美洲株片段大小相符。该研究建立的先采用ELISA法检测血样,对可疑或阳性样本提取总RNA后进行荧光RT-PCR和凝胶RT-PCR的检疫模式,为PRRSV的快速检测和鉴定提供了新的技术手段,可满足大批量进境种猪快速检疫的需要,同时,该模式的建立,也为其他疫病的检疫提供了借鉴。     

鳕鱼物种特异性鉴定的PCR方法研究

为了建立可对鳕鱼DNA进行特异性检测的PCR方法,应用在出口贸易中的鳕鱼疑似样品和保护执法工作中难以检查辨认的鳕鱼产品的物种鉴定,从GenBank数据库下载7个鳕属及其他5种鱼类的mtDNA细胞氧化酶Ⅱ(COXⅡ)基因序列,并用DNA Star7.0软件对上述不同鳕鱼的该基因碱基序列进行比较.在此基础上,综合考虑了设计...     

半巢式反转录实时荧光PCR检测马铃薯黑环斑病毒

本研究根据基因组中RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)保守序列,设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针,建立了半巢式反转录实时荧光PCR检测PBRSV的新方法.该方法采用E.Z.N.A TM快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR和TaqMAN探针检测技术.第二步半巢式反转录实时荧光PCR既是对第一步信号的进一步放大,也是对第一步PCR产物的确认,因此,检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、单重Realtime PCR等方法高.实验结果表明,该方法检测灵敏度可达300fg/μL植物总RNA.     

应用抗原捕捉ELISA快速检测牛病毒性腹泻病毒

在96孔微量板中包被BVDV(Erns)单克隆抗体,加入被检血清,血清中的病毒特异性地与抗体结合,形成抗原抗体复合物.洗涤去除未结合的物质,加入酶标抗体连接物.再洗去未结合的酶连接物,加入底物后显色,加入终止液终止反应.用装有450 nm滤光片的酶标仪进行检测,通过计算S-N值,判定血清中BVDV抗原阴性、阳性.此法具有特异、快速、灵敏的特点.     

生鲜乳中微生物控制浅析

生鲜乳中微生物含量是影响生鲜乳新鲜度和成品货架期的重要因素,随着消费者乳品质量安全意识的进一步增强,对生鲜乳的第一生产车间——牧场的管理提出了更高的要求.本文从牧场环境建设、奶牛管理、消毒防疫、奶厅管理、生鲜乳储运管理等方面,论述了牧场管理对生鲜乳中微生物繁殖的影响,并提出了加强牧场管理,从源头上降低生鲜乳中微生物数量的方法.     

半巢式反转录实时荧光PCR检测马铃薯黑环斑病毒

本研究根据基因组中RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)保守序列,设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针,建立了半巢式反转录实时荧光PCR检测PBRSV的新方法.该方法采用E.Z.N.A TM快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR和TaqMAN探针检测技术.第二步半巢式反转录实时荧光PCR既是对第一步信号的进一步放大,也是对第一步PCR产物的确认,因此,检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、单重Realtime PCR等方法高.实验结果表明,该方法检测灵敏度可达300fg/μL植物总RNA.     

鲤春病毒血症病毒新型液相芯片检测技术的建立

为建立检测鲤春病毒血症病毒（SVCV）的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中SVCV的G基因进行序列分析,设计SVCV特异性引物和探针并标记生物素,偶联荧光编码微球后与SVCV病毒RT—PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号。结果表明液相芯片检测体系能够正确的检测出SVCV。病毒核酸的最低检出量为10pg,检测特异性高,初步建立了检测SVCV的液相芯片技术,为进一步构建其他水生动物病原体全新快速高通量检测平台奠定基础。     

中国鲎物种特异性鉴定的荧光PCR方法研究

为建立我国特有的珍稀水生动物中国鲎的分子保护方法,根据GenBank中中国鲎及其他17种节肢动物门动物的mtDNA细胞氧化酶Ⅲ(COXⅢ)基因序列,应用DNA Star 7.0软件设计特异性引物,建立了中国鲎SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR鉴定方法.结果表明,所设计的引物对中国鲎DNA具有特异性,为保护我国珍稀动...     

基于热红外图像的奶牛乳区温度分布与乳房炎识别方法

乳房炎是影响奶牛健康与牛奶品质的主要疾病之一，是健康养殖的监控重点，该研究提出了一种基于热红外图像的奶牛乳区温度分布测量与乳房炎识别方法。通过现场采集的健康与患病共189头荷斯坦奶牛挤奶前后的后乳区热红外图像样本，提出了左右后乳区自动识别方法，确定了后乳区的特征区域及识别乳房炎的数据最佳采集时间为挤奶前。通过线剖法获取奶牛特征区域内的温度值点，建立乳区温度分布拟合方程，经分析发现91.9%的健康奶牛乳区温度拟合线的斜率小于0，斜率范围为-0.083～-0.001；92.1%的患病奶牛乳区温度拟合线的斜率大于0，斜率范围为0.001～0.093，可根据温度拟合线斜率的正负实现奶牛乳房炎的自动识别。与加州乳房炎检测法（California Mastitis Test，CMT）对比试验，结果表明：健康奶牛左右后乳区的识别准确率均值为76%，患病奶牛的左右后乳区识别准确率均值为75%。该研究提出的方法为牧场奶牛健康管理与乳房炎的快速在线识别提供了参考。