连续热裂解法大规模提取质粒DNA

选择质粒保有率高及最适合发酵的TOP10菌株,在传统的煮沸裂解法提取质粒的基础上进行了提取方法的改进,使用恒流泵和热交换螺旋管,使菌体在流动过程中完成热裂解,释放质粒DNA。改进后的方法裂解温度可降到70",提取工艺流程简单,缩短了提取时间,提高了质粒DNA的提取效率。利用本方法提取的质粒大小正确、纯度合格,每升发酵液得率平均为100mg质粒DNA。     

壳聚糖对口蹄疫DNA疫苗黏膜免疫的影响

以寻求有效DNA疫苗黏膜免疫途径为目的，利用带有负电荷的具有黏膜粘附性多糖-壳聚糖来包裹口蹄疫DNA疫苗pcD～VP1形成纳米级颗粒，用此颗粒经滴鼻、口服、直肠和生殖道4种黏膜免疫小鼠，检测小鼠的针对口蹄疫的体液和细胞免疫水平。结果显示：壳聚糖／pcD-VP1滴鼻免疫小鼠，抗体的高峰来临比只免疫pcD-VP1提前2周。直肠免疫处理中也呈现如此效果；经口服和生殖道途径的免疫，均没有呈现比pcD-VP1免疫组更好的抗体水平。但壳聚糖／pcD-VP1在生殖道和直肠免疫途径里均比pcD-VP1免疫组P．P．结的T细胞增殖水平高。所以。除口服途径以外，在滴鼻、直肠和生殖道免疫中，壳聚糖对质粒的包裹均一定程度上提高了DNA疫苗黏膜免疫的效果。