玉米组蛋白H_3和H_4基因的克隆

本文以λEMBL3为克隆栽体,构建了玉米(Zea mays)基因组文库,通过人工合成的探针进行原位杂交和斑点杂交,从文库中筛选到4个含有组蛋白H_3基因的阳性克隆。另外,通过多聚酶链式反应(PCR),从玉米核DNA中扩增了组蛋白H_4基因。这些基因可以在转基因植物研究中作为辅助序列提高外源基因的整合频率。     

谷子f103基因的克隆及其特性分析

本文首次报道从谷子(Setaria italica)未成熟种子cDNA文库中克隆到一个新基因f103。序列分析表明．该基因由819个核苷酸组成，推测其编码的蛋白质有130个氨基酸，分子质量为14113u。Southern杂交结果显示f103基因以单拷贝存在于谷子基因组中，并且在玉米基因组中存在同源基因。Northern杂交表明f103基因在谷子茎、幼穗及未成熟种子中表达，在叶片组织中未检测到其表达活性。生物学软件分析结果显示，F103蛋白是亲水蛋白，定位于核内，肽链上有多个可以被磷酸化修饰的位点。这些特点可能是F103蛋白生理功能的结构基础。     

高赖氨到基因导入玉米自交系的研究

通过对18个玉米自交系的组织培养，筛选到8个可以正常分化的自交系。用基因枪的方法对其中的4个自交系进行了遗传转化，将高赖氨酸基因导入玉米的胚性愈伤组织，以减少潮霉素筛选次数和筛选浓度的方法，得到分化再生植株，经分子检测，证明外源基因已成功整合到玉米基因组中。部分T0代植株正常结实，通过对T1代植株的分子检测，表明外源基因可以稳定遗传，对其中的转化植株所结的种子进行了赖氨酸含量的检测，发现赖氨酸含量最高提高了16％。     

用基因枪将高赖氨酸基因导入玉米及转基因植株的检测

构建了两个含高赖氨酸蛋白质基因ｃＤＮＡ的表达载体,用基因枪法将其导入玉米不同杂交组合的胚性愈伤组织,经潮霉素抗性筛选,得到了可育的再生植株,经ＰＣＲ扩增分析。点杂交,及Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交检测,表明该基因已整合到玉米的基因组中。测定１３株Ｔ１代种子中赖氨酸的含量,其中有３株赖氨酸含量提高１０％以上。     

改变天冬氨酸激酶和二氢吡啶二羧酸合成酶调控活性提高玉米中游离赖氨酸含量

以烟草(Nicotiana tabacum var．samsum)叶片为材料，提取RNA，分离mRNA，进行RT-PCR扩增编码二氢吡啶二羧酸合成酶(DHDPS)的cDNA片段。序列分析表明，得到971个核苷酸的片段。与发表的序列相比，成熟蛋白N-端编码区缺失了21个核苷酸，且第627位核苷酸发生了C到T的改变，但没有引起氨基酸的变化。将ahaps cDNA编码区的第410和411位核苷酸由AC突变为TT，这一突变使DHDPS成熟蛋白的第104位氨基酸由天冬酰胺变为异亮氨酸。以玉米(Zea mays L．)总DNA为模板，PCR扩增DHDPS叶绿体转运肽的编码序列，序列分析结果显示，扩增片段中含有DHDPS转运肽完整编码区162个核苷酸及成熟蛋白N-端编码区21个核苷酸。将突变后的础(天冬氨酸激酶)基因和dhdps cDNA与CaMV35S启动子、转运肽序列及潮霉素抗性基因连接，构建表达载体pRHAK和pRHDH，用基因枪轰击法将pRHAK和pRTDH转入玉米胚性愈伤组织，得到再生植株。经分子检测证明，目的片段已整合到玉米基因组中。T1代植株的游离氨基酸含量测定显示，部分转入础基因的植株中，叶片和种子中游离苏氨酸的含量提高3～5倍。部分转入dhdps cDNA的植株中，叶片和种子中游离赖氨酸含量分别提高了4倍和1倍。     

高赖氨酸蛋白质基因和bar基因导入水稻及转基因植株的检测

构建了1个含高赖氨酸蛋白质基因和bar基因的植物表达载体，用基因枪法将其分别导入籼稻(Oryza sativa ssp．indica)中优早5号幼胚和龙特甫B成熟胚诱导的愈伤组织中，筛选后得到16株可育的再生植株。PCR和Southern blot检测结果表明，外源基因已整合到水稻的基因组中。T1代植株表现出对PPT的抗性。对部分T1代转基因水稻种子进行分析表明，中优早5号种子中蛋白质含量(12．07％～16．2％)和赖氨酸含量(0．52％-0．67％)分别提高了35．18％和45．09％，龙特甫B种子中蛋白质含量(11．92％，12．87％)和赖氨酸含量(0．51％-0．57％)分别提高了27．69％和16．15％。     

外源高赖氨酸蛋白质基因对转基因玉米种子中蛋白质和氨基酸组分的影响

分析了将高赖氨酸蛋白质基因导入玉米后,转基因玉米种子中水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白和碱溶蛋白组分的变化。结果表明,醇溶蛋白和盐溶蛋白总量发生了增加,水溶蛋白总量保持稳定,而碱溶蛋白量有所下降。免疫印迹结果表明,外源高赖氨酸蛋白的表达量与转基因种子中赖氨酸含量呈正相关性。推测外源高赖氨酸蛋白的表达及富含赖氨酸的水溶蛋白和盐溶蛋白组成的改变是转基因玉米种子中赖氨酸提高的主要原因;转基因玉米种子蛋白质可能是外源基因通过非直接的方式导致的结果。     

我国农业生物技术的研究进展(综述)

高技术是推动生产力发展最富有活力的因素,也是当前科学技术发展的重要标志,它显示着一个国家的技术实力和先进程度,决定着一个国家在世界上的国际地位。因此,世界各国对高技术的发展都十分重视,制定了高技术的发展计划。如美国的星球大战计划、西欧的尤里卡计划、日本的人类新领域研究计划等。生物技术是高技术的重要内容之一,无论是发达国家或发展中国家都非常重视生物技术的发展,目前世界上至少有近30个国家、上千个公     

天然彩色棉的研究进展及其有待解决的问题

天然彩色棉已成为棉花生产及纺织业中一个越来越受到人们重视的问题。本文就天然彩色棉受到人们重视的原因、国内外的研究进展、彩色纤维的遗传控制、市场前景以及目前存在的问题和可能解决的途径进行了基本的综述。     

一种简捷的同时提取植物总DNA和总RNA的方法

 在热酚法的基础上 ,经多次实践改进 ,得出一种简单、快速的可以从绿色植物组织和种子中同时提取植物总 DNA和总 RNA的方法 ,所提取的总 DNA和总 RNA质量好 ,不降解 ,简化了热酚法的许多步骤 ,简单易行 ,试材少至 6 0 m g,多达 5 g以上都适用 ,是一种简单、方便、快速的提取方法