利用响应面法优化全蚀病生防菌YB-81的发酵条件

为了优化全蚀病生防菌株YB-81的发酵培养基及培养条件,提高其对全蚀病的抑制效果,在单因素试验的基础上,利用响应面法(Response surface methodology)对小麦全蚀病生防菌株YB-81的发酵条件进行优化。生防菌株YB-81的最优发酵条件为:时间36h,温度36℃,初始pH值8.0,转速200 r·min-1,牛肉膏+葡萄糖(1∶1)0.53%,蛋白胨0.99%,氯化钠0.20%。在此培养条件下试验,其菌落总数为18.8亿个·mL-1,较基础培养基提高了72%,对全蚀病菌抑制率达到87.2%,较优化前提高了32.5%。生防菌YB-81的最优发酵培养条件的确定,可为该菌大规模生产应用提供理论基础。     

高职酒店管理专业国际化人才培养的探索

经济全球化促进了旅游全球化的发展,酒店业作为旅游业的支柱产业也顺势发展。拥有良好的外语和跨文化交流能力、宽广的国际化视野和熟练酒店一线岗位技能的国际化酒店人才供不应求。文章从人才培养目标、课程体系设置、实践教学等方面对酒店国际化人才培养方法做研究,以满足未来全球国际旅游市场对国际化人才的需求和迎接旅游高等教育全球化的挑战。     

4种杀菌剂防治小麦纹枯病药效研究

进行4种不同杀菌剂对小麦纹枯病的田间防治试验,结果表明:在小麦纹枯病发病初期,间隔10 d分2次喷施井冈霉素·枯草芽孢杆菌可湿性粉剂6 000 g/hm2时,防效最好,对小麦纹枯病和白穗率的防效分别达到31.12%和79.41%,并能增产7.05%;喷施20%井冈霉素水溶粉剂500倍液,对小麦纹枯病和白穗率的防效分别达到26.05%和52.94%,增产效果为1.10%。     

高质量建设国家生物育种产业创新中心

一、生物育种中心基本情况 (一)建设背景 河南是农业大省,在保障国家粮食安全和农产品有效供给方面具有举足轻重的作用.生物育种是国家战略性、基础性核心产业,对粮食安全起着根本性保障作用.习近平总书记对加快民族种业发展、保障国家粮食安全多次作出重要指示.河南省委、省政府牢记总书记嘱托,高度重视生物育种产业的发展.2017年...     

河南省小麦全蚀病菌的分离及变种类型鉴定

 从河南省10个地市采集的小麦病根样品中分离得到82株病原分离株, 通过形态特征观察、回接致病性测定、以及分子生物学的方法对所分离菌株进行鉴定。其中47个菌株菌丝分支处都形成典型的“∧”状;子囊壳埋生或半埋生, 子囊棍棒状, 子囊孢子线形, 稍弯曲, 无色, 具有5~10个分隔, 大小为68~94 μm×2~4 μm;对82个分离株rDNA-ITS区进行PCR扩增和序列测定, BLAST序列比对结果表明, 47株菌株与小麦全蚀病菌的ITS序列同源性达97%～99%, 据此确定47株菌株为小麦全蚀病菌。应用小麦全蚀病菌4个变种的特异性引物进行PCR扩增都得到禾顶囊壳小麦变种(870 bp)的特异性片段, 鉴定47株菌株均为禾顶囊壳小麦变种 (Gaeumannomyces graminis var.tritici)。     

降解赤霉病菌毒素Tri101基因的原核表达及抗体制备

采用RT-PCR方法克隆了编码禾谷镰刀菌单端孢酶烯3-O-乙酰转移酶Tri101基因的cDNA序列,并连接到原核表达载体pGEX-4T2上,将获得的重组载体pGEX-4T2/Tri101转化大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,经IPTG诱导后,Tri101基因在大肠杆菌BL21中获得了高效表达,融合蛋白GST-Tri101分子量为75.45 kDa。将该融合蛋白切胶纯化后免疫家兔,制备兔抗GST-Tri101多克隆抗体。经ELISA法测定抗体效价大于1∶256 000。Western blot分析表明制备的抗体与原核细胞体外表达的Tri101蛋白可以特异性结合,表明该抗体的特异性良好。应用该抗体验证了感赤霉病小麦中Tri101基因的表达。兔抗GST-Tri101抗体的成功制备,为进一步研究Tri101的生物学功能、细胞定位以及在其它植物中的表达等奠定了基础。     

绿色木霉几丁质酶基因Tvchi cDNA的克隆、原核表达与活性分析

 利用RT PCR方法从绿木霉ZBS 6中扩增了几丁质酶基因Tvchi,序列分析表明Tvchi 开放阅读框为1 293 bp,编码430个氨基酸残基,Blast 分析表明,与多种木霉18家族内切几丁质酶具有较高的同源性。将该基因克隆到原核表达载体pET 28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS PAGE和Western印迹分析表明成功的获得了47 kD 的融合蛋白。该融合蛋白经Ni NTA柱亲和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白Tvchi。Tvchi最适酶活温度为37℃,最适酶活pH值为6.8。表达产物对小麦全蚀病、赤霉病、纹枯病病原菌显示出较好的抑菌活性。本研究结果将为进一步研究木霉几丁质酶的应用提供了基础。     

农杆菌介导球孢白僵菌转化体系的建立及突变体筛选

以球孢白僵菌(Beauveria bassiana)YB-06为受体菌株, 采用农杆菌介导的遗传转化方法,实现了农杆菌AGL1(pATMT1)介导的球孢白僵菌的遗传转化,并研究了转化介质和pH对转化效率的影响。结果表明:在采用28℃、200μmol/L的乙酰丁香酮(AS)、农杆菌浓度OD₆₀₀=0.8、孢子浓度为1×106个/ml、pH5.1~5.8时可实现T-DNA的插入转化。当转化体系pH5.3时,转化效率最高,达586个转化子/106分生孢子;不同共转化介质对转化效率影响明显, 玻璃纸和硝酸纤维素膜转化效率较高。对3000个转化子生长速度和产孢量等性状分析获得46个性状特异突变体。本文结果为进一步研究球孢白僵菌的生长发育、致病机理和毒力相关基因功能奠定了基础。     

颉颃细菌GXG-2-2的菌株鉴定及其对植物病原菌的颉颃作用

从枯草中分离筛选获得的颉颃细菌GXG-2-2被鉴定为枯草芽孢杆菌。该菌有很强的分泌胞外蛋白酶的能力。于发酵液中加入60%饱和度的（NH4）2SO4沉淀所得的蛋白粗液对多种植物病原菌有强烈的抑制作用。例如稻瘟病菌（Pyricularia grisea）、小麦赤霉病菌（Fusarium graminearum）、烟草赤星病菌（Alter-naria alternata）、大白菜软腐病菌（Erwinia carotovora subsp.carotovora）等。     

黄瓜枯萎病拮抗放线菌S24的分离、鉴定及发酵条件优化

为了筛选黄瓜枯萎病拮抗放线菌,从蔬菜温室大棚及附近土壤中分离了59株菌落形态有差异的放线菌,通过平板对峙筛选试验,获得2株对黄瓜枯萎病菌抑菌率在60％以上的放线菌,分别是S21和S24,其中 S24的抑菌率达到74％。根据形态特征、生理生化特性和分子分类测定结果,初步将S24鉴定为黄麻链霉菌（Streptomyces corchorusii）。选用7种常用的放线菌发酵培养基对S24进行发酵,7 d后测定发现,5号培养基发酵上清液对黄瓜枯萎病菌的抑制活性最强,抑菌率达到59.44％,其细胞破碎液对黄瓜枯萎病菌的抑菌率为39.76％。通过比较发现,75 mL为放线菌S24的最适发酵装液量（250 mL三角瓶）。采用正交试验优化后的培养基进行发酵,获得的上清液及细胞破碎液对黄瓜枯萎病菌的抑菌率分别达到76.14％、52.27％,较优化前分别提高了14.64、10.11个百分点。