两株不同J亚群禽白血病毒株诱发组织增生病变和细胞因子表达的比较

旨在比较ALV-J-SD1005毒株和ALV-J-NX0101毒株感染鸡只致病性、诱发先天性免疫因子和致肿瘤因子表达的差异,用感染剂量为10³TCID50的两株病毒分别颈部皮下接种75只1日龄海兰褐鸡,感染后7、14、21 d检测体重、肿瘤病变、死亡率、血液和皮下纤维组织中病毒含量以及肝中鸡TRIM25、MDA5、IRF7、IFN-α/β、14-3-3σ、P53、STAT1等免疫因子或肿瘤因子的mRNA表达量。结果显示,雏鸡感染ALV-J-SD1005毒株后最早于第10天出现纤维组织增生,14 d致纤维组织增生率为100%(18/18),死亡率为5.2%(1/19);随着感染日龄的增加,增生组织指数和死亡率不断升高,21 d时分别达34.4%(74.5/209.5)和58.3%(7/12)。血液和皮下纤维组织的病毒载量显著升高;同时,显著上调鸡肝中MDA5、IRF7、P53等基因的表达量,下调IFN-α/β和14-3-3σ基因的表达量;而鸡TRIM25基因呈现感染早期(7 d)表达显著下调,后期(14~21 d)表达显著上调。ALV-J-NX0101毒株感染后21 d未检测到肿瘤发生,也没有鸡只死亡,但见鸡血液等组织中病毒载量显著增多,鸡TRIM25、MDA5、IRF7、IFN-β、IFN-α基因表达显著下降,STAT1基因表达显著上调。上述结果可以看出,ALV-J-SD1005毒株与ALV-J-NX0101毒株在感染鸡体内诱发不同的抗病毒反应和抗肿瘤反应,导致产生明显不同的病毒增殖和致病特点。本研究为深入理解两株ALV-J病毒致肿瘤机制、探索新诊断标识提供重要科学依据。     

牛MEN1基因真核表达载体的构建及其表达分析

多发性内分泌腺瘤致病因子1 (multiple endocrine neoplasia Ⅰ,MEN1)参与乳腺发育与泌乳行为的调控.本研究克隆了牛(Bos taurus) MEN1基因(bMEN1)的全长cDNA,并在不同细胞中检测bMEN1mRNA及其编码蛋白menin的表达情况.根据GenBank中bMEN1基因序列,设计特异性引物,用qRT-PCR方法得到附带EcoR Ⅰ和HindⅢ酶切位点的bMEN1片段,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(A)中.体外转染物种同源性细胞牛乳腺上皮细胞(bovine mammary gland epithelial cell,MAC-T)和异源性细胞中国仓鼠(Cricetulus barabensis)卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO)、小鼠(Mus musculus)成肌细胞(mouse myoblast cells,C2C12),利用qRT-PCR和Westem blot技术检测转染前后bMEN1 mRNA和蛋白menin的表达.双酶切和基因测序结果表明,成功构建了bMEN1基因的真核表达载体pcDNA3.1-myc-his-bMEN1.所建立的转染体系可以使目的基因bMEN1在3种不同细胞中成功表达mRNA和目的蛋白,转染后24 h都达到最高表达量,并达到极显著水平(P＜0.01),之后逐渐降低.其中,CHO细胞中的转染24 h后bMEN1 mRNA和menin蛋白的表达量分别是对照的28 415倍和5.65倍.本研究建立了bMEN1基因的真核表达载体及其转染体系,能够在不同细胞中成功表达,为体外研究MEN1基因对于乳腺的调节功能及其对于机体代谢的调节机制提供了一种工具和技术体系.     

全混合日粮粗饲料水平对奶牛的挑食行为、瘤胃内容物及血清指标的影响

本试验旨在研究全混合日粮粗饲料水平对奶牛挑食行为、瘤胃内环境及血清指标的影响。选用12头泌乳中期[泌乳天数(119±26)d]经产荷斯坦奶牛[体重(629±46)kg],随机分为4组,每组中1头安装瘤胃瘘管,按4×4拉丁方设计,饲喂粗饲料水平分别为40%、50%、60%和70%(干物质基础)的4种全混合日粮。共进行4期动物试验,每期试验21 d。结果表明:饲粮粗饲料水平对奶牛挑食行为有显著(P0.05)或极显著(P0.01)影响。饲粮粗饲料水平为40%时,奶牛喜食粒度≥4 mm饲粮,厌食粒度4 mm饲粮,但饲粮粗饲料水平40%时,奶牛喜食粒度4 mm饲粮,厌食粒度≥4 mm饲粮。饲粮粗饲料水平对瘤胃内容物各层粒度分布无显著影响(P0.05)。随饲粮粗饲料水平的增加,瘤胃液外流速度和瘤胃固相外流速度呈显著线性增加(P0.05),瘤胃内容物重量和瘤胃液体积无显著变化(P0.05);血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)含量呈显著线性增加(P0.01),瘦素(LEP)和非酯化脂肪酸(NEFA)含量有线性增加趋势(0.05≤P0.10),血清生长激素(GH)和胰岛素(INS)含量有线性降低的趋势(0.05≤P0.10)。综上所述,饲粮粗饲料水平是影响奶牛挑食行为、瘤胃内容物及血清指标的重要因素。     

动物乳腺干细胞研究进展

乳腺是一个高度活跃的器官,在青春期和生殖周期中,其上皮细胞发生了极大的变化。这些变化是由专门的干细胞和祖细胞推动的。研究乳腺干细胞对动物乳腺发育、哺乳和乳腺癌等方面都有着重大意义。如今,在乳腺干细胞生物学研究方面已经取得了显著进步。乳腺干细胞是组织学上未分化的上皮细胞,可以对称分裂产生两个相同的干细胞,或不对称地产生一个干细胞和一个腔上皮祖细胞或基底/肌上皮祖细胞。通过标记滞留细胞、染料排斥法、干细胞抗原-1标记、细胞表面标记物标记以及谱系示踪等方法可以鉴定出多种不同类型的乳腺干/祖细胞,应用多种不同方法分离鉴定乳腺干细胞有助于深入了解其异质性。乳腺的研究主要分为6个阶段：胚胎期、青春期、性成熟期、妊娠期、泌乳期和退化期。在乳腺不同发育阶段,乳腺干/祖细胞的类型及特性不同。有研究表明,在胚胎期就有基底和管腔谱系的祖细胞产生,静止的乳腺干细胞也可能来自于胚胎期,出生后,静止干细胞可以在卵巢激素的刺激作用下重新进入细胞周期,产生乳腺细胞谱系和自我更新。作者介绍了乳腺干细胞和祖细胞的存在、形态特征、鉴定方法,简述了乳腺干细胞在胚胎期、青春期和妊娠期的特征,分析了目前该领域研究的不足之处以及对未来应用的展望。     

全混合日粮粗饲料水平对奶牛的挑食行为、瘤胃内容物及血清指标的影响北大核心CSCD

本试验旨在研究全混合日粮粗饲料水平对奶牛挑食行为、瘤胃内环境及血清指标的影响。选用12头泌乳中期[泌乳天数(119±26)d]经产荷斯坦奶牛[体重(629±46)kg],随机分为4组,每组中1头安装瘤胃瘘管,按4×4拉丁方设计,饲喂粗饲料水平分别为40%、50%、60%和70%(干物质基础)的4种全混合日粮。共进行4期动物试验,每期试验21 d。结果表明:饲粮粗饲料水平对奶牛挑食行为有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)影响。饲粮粗饲料水平为40%时,奶牛喜食粒度≥4 mm饲粮,厌食粒度<4 mm饲粮,但饲粮粗饲料水平>40%时,奶牛喜食粒度<4 mm饲粮,厌食粒度≥4 mm饲粮。饲粮粗饲料水平对瘤胃内容物各层粒度分布无显著影响(P>0.05)。随饲粮粗饲料水平的增加,瘤胃液外流速度和瘤胃固相外流速度呈显著线性增加(P<0.05),瘤胃内容物重量和瘤胃液体积无显著变化(P>0.05);血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)含量呈显著线性增加(P<0.01),瘦素(LEP)和非酯化脂肪酸(NEFA)含量有线性增加趋势(0.05≤P<0.10),血清生长激素(GH)和胰岛素(INS)含量有线性降低的趋势(0.05≤P<0.10)。综上所述,饲粮粗饲料水平是影响奶牛挑食行为、瘤胃内容物及血清指标的重要因素。     

围产期奶牛脂肪肝生物标志物受试者工作特征曲线分析

[目的] 通过受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线筛选诊断脂肪肝生物标志物的最佳临界值。[方法] 随机采集77头产后7 d中国荷斯坦奶牛血清，测定生理生化指标。根据Reid方程计算的Y值将奶牛分为正常组（Y>1）和脂肪肝组（Y<1），比较两组奶牛血清指标的差异，并与Y值进行相关性分析，筛选组间差异与相关性显著的指标作为生物标志物，用ROC曲线评估生物标志物的AUC值、诊断敏感性与特异性和最佳临界值。将Reid方程诊断脂肪肝的准确率作为标准，用非酯化脂肪酸（NEFA）、谷草转氨酶（AST）的最佳临界值检测461头奶牛患脂肪肝的情况。[结果] 生理生化检测结果表明NEFA、葡萄糖（Glu）、AST、谷丙转氨酶（ALT）在2组间差异极显著（P<0.01），总蛋白（TP）组间差异显著（P<0.05），其他指标两组间无显著差异（P>0.05）；NEFA、Glu、AST、ALT、TP、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、胰岛素（Ins）、胰高血糖素（Gln）与Y值显著相关（P<0.05），可作为生物标志物；NEFA、AST、ALT和Gln的AUC值>0.5能准确诊断脂肪肝，诊断敏感性分别为81.8%、72.7%、63.6%和54.5%，特异性分别为92.8%、89.4%、84.8%和69.7%，最佳临界值分别为471.74 μmol/L、95.50 U/L、46.50 U/L和64.60 ng/mL。用NEFA、AST和NEFA+AST最佳临界值诊断脂肪肝的准确率分别高达89.96%、73.49%和69.08%。Y值诊断发病率为54.01%，NEFA、AST、NEFA+AST诊断出的发病率分别为48.59%、39.70%和37.31%。[结论] NEFA、AST、ALT和Gln可用于快速、准确地诊断脂肪肝。