猪霍乱沙门氏菌LAMP检测方法的建立与应用

利用猪霍乱沙门氏菌lacZ基因设计特异性引物,通过优化各种反应条件,建立了检测猪霍乱沙门氏菌的环介导等温扩增（LAMP）快速检测方法。此方法特异性好,灵敏度高,将细菌DNA稀释到10-8仍可检出,是PCR方法的1000倍。本研究建立的LAMP方法操作简便、灵敏度高、特异性强,为临床检测猪霍乱沙门氏菌和预防人猪霍乱沙门氏菌病提供了技术保障。     

PCV2 Rep蛋白N-糖基化位点突变对病毒复制的影响

N-糖基化对病毒的感染与增殖均具有重要作用,与PCV2复制相关的Rep蛋白含有三个N-糖基化位点。为了分析PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变对病毒复制的影响,本试验构建了三个双拷贝突变体感染性克隆2M23、2M256、2M286,并成功拯救病毒。通过间接免疫荧光检测病毒的拯救效果,TCID50测定病毒的感染力,荧光定量PCR检测细胞病毒的载量。结果显示,PCV2Rep蛋白的23~25aa、256~258aa N-糖基化位点突变后降低病毒的复制能力,而286~288aa突变后增强病毒的复制能力,为进一步阐明PCV2的复制及致病机制提供参考。     

PCV2Rep蛋白N-糖基化位点突变及其真核表达载体的构建

根据GenBank发表的猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列设计并合成引物,通过点突变的方法对其进行单点、两点和3点突变,成功获得含单点、两点和3点的突变体。设计引物扩增突变体的ORF1片段,将目的片段分别经KpnI和XbaI双酶切进而将其连接到真核表达载体pVAX1中,成功构建PCV2-pVAX1-Rep真核表达载体。此重组表达载体的成功构建为进一步研究PCV2 ORF1编码蛋白的生物学活性打下了基础。     

猪流行性腹泻病毒LAMP检测方法的建立及初步应用

猪流行性腹泻病毒是引起仔猪腹泻死亡的主要病原。为实现对猪流行性腹泻病毒(PEDV)的快速检测,利用PEDV S基因设计特异性引物,通过优化各种反应条件,建立了检测PEDV的环介导等温扩增快速检测方法(LAMP)。此方法特异性好,敏感度强,将反转录后的病毒c DNA稀释到108倍仍可检出,是PCR方法的100倍。本研究建立的LAMP方法操作简便、灵敏度高、特异性强,为临床PEDV的快速检测和预防奠定基础。     

国外葡萄酒旅游对我国茶旅游的启示

我国茶旅游与国外葡萄酒旅游相比尚处于起步阶段,需要借鉴和学习的内容有很多。本文从产业集群效益、政府与行业同力合作、借助节庆活动三个方面分析了国外葡萄酒旅游的发展经验,而后从建立联动机制、形成产业链条、提升参与程度、打造品牌形象、拓宽营销思路、利用节事活动等七个方面探讨了国外葡萄酒旅游对我国茶旅游的启示。     

LAMP-LFD技术在检测猪圆环病毒3型中的应用研究

为快速了解猪群中猪圆环病毒Ⅲ型(PCV3)的感染状况,本研究将环介导等温扩增技术(LAMP)与侧向流动试纸条(LFD)相结合,建立了快速检测PCV3 LAMP-LFD方法,并对该方法的特异性、灵敏性以及临床初步应用进行了验证分析.试验结果显示:常规PCR能检测到0.2 pg/μL的病毒,而本研究建立的LAMP-LFD能...     

茶园规划设计中茶文化旅游的应用研究

我国茶叶种植基地主要分布在各个少数民族地区。因此,茶园的规划具有民族特色。随着经济的快速发展,人们的生活压力不断的增加,为了缓解压力,通过旅游的方式来释放心中的压抑。茶文化旅游是最为一种新型的生态旅游形式,深得人们的青睐。茶园作为茶文化旅游的基地,茶园的规划直接影响这茶文化旅游的发展,所以我们要重视茶园的规划。     

PCV2感染后JAK-STAT信号通路的基因差异表达分析

JAK-STAT信号通路是阐明细胞因子生物学功能及病毒如何发挥作用的分子基础，但对于猪圆环病毒2型（PCV2）感染及病毒复制的作用机制，目前尚无报道。本研究采用PCR列阵方法，建立PK-15细胞JAK-STAT信号通路的功能分类芯片，分析JAK-STAT信号通路中所有已知的Jak和Stat家族成员、激活JAK-STAT信号通路的受体，以及与Stat蛋白相关的核辅助因子及共同活化因子、Stat诱导蛋白及该通路的负反馈调节蛋白等基因在PCV2感染后的差异表达情况，为进一步明确PK-15细胞JAK-STAT信号通路对病毒复制力和复制机制奠定基础。     

RNA病毒重组及发生机制

重组在RNA病毒中很常见,但有关重组的许多关键问题目前尚无法解释。本文主要针对RNA重组的发生机制及其影响因素,解释重组频率发生变化的原因,阐述RNA重组未来仍需解决的问题。RNA重组是RNA病毒特殊的遗传信息交换方式,其频率在不同的RNA病毒中显著不同。目前,研究者普遍认为重组发生的机制可分为复制型、非复制型重组以及重配,并且借助新方法和新技术,逐渐了解了影响该过程的病毒和细胞因子。有研究表明,RNA病毒中RNA的重组和重配率非常高,这与RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)的保真性相关。因此,深入了解病毒重组机制并发现其中的规律,可实现对新型病毒以及新疫情的预警预报,从而有预见性地控制疫病的发生和流行。