猪肠激酶催化亚基基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

依据GenBank猪肠激酶催化亚基(EKL)基因的编码序列设计引物,通过RT-PCR方法从猪小肠黏膜组织中扩增EKL cDNA基因,利用SnaBⅠ和Not Ⅰ酶切位点,将该EKL片段插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K质粒中,并与载体中的α因子信号肽序列融合,构建EKL基因分泌型酵母重组质粒载体pPIC9K/EKL.重组质粒载体经Sal Ⅰ线性化后,以电转化的方法将其转移到组氨酸缺陷型的酵母宿主菌GS115中.然后利用以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His+型和甲醇利用正型(Mut+)酵母重组体,再经G418加压筛选获得高拷贝猪EKL基因的重组酵母.经PCR检测证明EKL基因已整合到毕赤酵母的染色体中.重组酵母经摇瓶发酵培养和甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE及酶促活性检测,结果显示在酵母菌培养基中检测到相对分子质量为35 000的重组蛋白.经过对制备的胰蛋白酶原进行酶促水解检测,证明该重组蛋白具有激活胰蛋白酶原的活性,表明制备的重组猪EKL具有生物活性.     

紫衫醇对小鼠不同组织巨噬细胞功能的影响

为了探讨紫杉醇(Paclitaxel,PA)对小鼠不同组织巨噬细胞增殖和功能的影响。无菌操作制备小鼠腹腔、骨髓和脾脏巨噬细胞,在体外细胞培养体系中分别加入不同浓度40、80、160 ng/mL的PA和脂多糖(LPS)共培养,采用MTT法检测细胞增殖,ELISA和Griess法分别检测细胞分泌TNF-α和NO量,瑞氏-吉姆萨染色法测定腹腔巨噬细胞吞噬能力。结果表明： PA促进腹腔巨噬细胞和LPS诱导的腹腔和骨髓巨噬细胞增殖,但抑制脾脏和骨髓巨噬细胞以及LPS诱导的脾脏巨噬细胞增殖;PA抑制不同组织巨噬细胞分泌TNF-α,但促进腹腔和脾脏巨噬细胞分泌NO;PA提高了腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力。PA对小鼠不同组织巨噬细胞的免疫功能均有影响,这为进一步阐明PA的免疫调节机理提供了新的理论依据。     

连翘酯苷对内毒素作用下RAW264.7细胞功能的影响

为探讨连翘酯苷(FS)对内毒素(LPS)作用下RAW264.7细胞增殖、分泌NO和TNF-α、吞噬功能的影响。收集处于对数生长期细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640培养细胞,在培养液中分别加入脂多糖(LPS)以及不同浓度40、80、160 μg/mL的FS共培养。采用MTT法检测细胞增殖,Griess和ELISA法分别检测RAW 264.7细胞分泌NO和TNF-α量,染色法检测细胞吞噬能力。结果表明：低、中剂量FS可显著促进细胞增殖,而中和高剂量FS可缓解LPS对细胞的刺激作用;与LPS组比较,FS对LPS刺激的RAW 264.7细胞分泌NO影响不明显,但中、高剂量FS明显促进RAW 264.7细胞分泌;LPS与FS均能提高巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力。FS对RAW264.7细胞增殖、分泌NO和TNF-α以及吞噬功能都有影响,结果提示这可能是连翘酯苷调节细胞免疫功能的机制之一。     

猪传染性胃肠炎预防和治疗的研究进展

猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的一种以猪的严重腹泻、呕吐和脱水为临床特征的高度接触性传染病。现已成为一种世界性猪的疾病,随着分子生物学的发展,对TGEV的研究取得了较大的进展,就TGEV的预防和治疗的研究进展做一阐述,旨在为探索对该病的更为有效的预防和治疗方法奠定基础。     

连翘酯苷对小鼠不同组织巨噬细胞功能的影响

目的 探讨连翘酯苷(FS)对小鼠不同组织巨噬细胞增殖和功能的影响。方法 取56只昆明系小鼠颈椎脱臼致死,无菌操作制备腹腔、骨髓和脾脏巨噬细胞,在体外细胞培养体系中分别加入不同浓度连翘酯苷（40、80、160mg.L-1）和脂多糖(LPS),通过MTT法检测细胞增殖,ELISA和Griess法分别检测细胞分泌TNF-α 和NO量,瑞氏-吉姆萨染色法测定腹腔巨噬细胞吞噬能力。结果 与LPS组比较,FS组腹腔巨噬细胞和LPS+FS组骨髓巨噬细胞吸光度A值极显著提高,但FS组脾脏和骨髓巨噬细胞以及LPS+FS组腹腔和脾脏巨噬细胞A值明显降低;此外,FS极显著提高环磷酰胺注射的小鼠脾脏和骨髓巨噬细胞增值但明显抑制腹腔巨噬细胞增殖。FS组不同组织巨噬细胞分泌TNF-α 量显著低于对照组和LPS组;FS明显增加LPS刺激的腹腔巨噬细胞NO分泌量,而脾脏巨噬细胞NO分泌量明显减少,且有显著剂量依赖性,骨髓巨噬细胞NO分泌量变化不明显;FS明显抑制环磷酰胺处理的小鼠脾脏和骨髓巨噬细胞分泌NO但不影响腹腔巨噬细胞分泌NO。FS提高了LPS刺激的腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力。 结论 连翘酯苷对小鼠不同组织巨噬细胞增殖、TNF-α和NO分泌以及吞噬能力都有影响,这可能是连翘酯苷调节细胞免疫功能的机制之一。