| 猪肠激酶催化亚基基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 刘龙飞,李秀锦,仲飞,李巍,潘素敏,张峰,潘宏丽,芦山. 猪肠激酶催化亚基基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[J]. 中国兽医学报, 2011, 31(5) |
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| 作者姓名： | 刘龙飞 李秀锦 仲飞 李巍 潘素敏 张峰 潘宏丽 芦山 |
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| 作者单位： | 1. 河北农业大学动物科技学院,河北保定,071001
2. 燕山大学环境与化学工程学院,河北秦皇岛,066004 |
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| 基金项目： | 河北省科技支撑计划资助项目，河北农业大学校长基金资助项目 |
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| 摘 要： | 依据GenBank猪肠激酶催化亚基(EKL)基因的编码序列设计引物,通过RT-PCR方法从猪小肠黏膜组织中扩增EKL cDNA基因,利用SnaBⅠ和Not Ⅰ酶切位点,将该EKL片段插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K质粒中,并与载体中的α因子信号肽序列融合,构建EKL基因分泌型酵母重组质粒载体pPIC9K/EKL.重组质粒载体经Sal Ⅰ线性化后,以电转化的方法将其转移到组氨酸缺陷型的酵母宿主菌GS115中.然后利用以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His+型和甲醇利用正型(Mut+)酵母重组体,再经G418加压筛选获得高拷贝猪EKL基因的重组酵母.经PCR检测证明EKL基因已整合到毕赤酵母的染色体中.重组酵母经摇瓶发酵培养和甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE及酶促活性检测,结果显示在酵母菌培养基中检测到相对分子质量为35 000的重组蛋白.经过对制备的胰蛋白酶原进行酶促水解检测,证明该重组蛋白具有激活胰蛋白酶原的活性,表明制备的重组猪EKL具有生物活性.
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| 关 键 词： | 肠激酶催化亚基 基因克隆 毕赤酵母 分泌表达 |
Cloning and expression of porcine catalytic subunit of enterokinase gene in Pichia astoris |
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| LIU Long-fei,LI Xiu-jin,ZHONG Fei,LI Wei,PAN Su-min,ZHANG Feng,PAN Hong-li,LU Shan. Cloning and expression of porcine catalytic subunit of enterokinase gene in Pichia astoris[J]. Chinese Journal of Veterinary Science, 2011, 31(5) |
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| Authors: | LIU Long-fei LI Xiu-jin ZHONG Fei LI Wei PAN Su-min ZHANG Feng PAN Hong-li LU Shan |
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