Tu-1菌剂替代抗生素对獭兔肠道消化酶活力、盲肠菌群及生长性能的影响

为探讨Tu-1菌剂与抗生素对獭兔肠道消化酶活力、盲肠菌群及生长性能的影响,选取60只40日龄健康断奶獭兔,随机分为对照组(全价日粮)、抗生素组(全价日粮含20 mg/kg硫酸黏杆菌素)和菌剂组(全价日粮添加1.0‰Tu-1菌剂)。预试期5 d,正试期30 d。每天观察和记录獭兔腹泻和健康状况。于正试期开始前和结束后对獭兔空腹称体质量,并结算各组剩余饲料。试验期结束后屠宰獭兔,测定十二指肠、空肠、回肠、盲肠内容物中蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶活力及内容物pH值;检测盲肠中大肠杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数量及细菌总数。结果表明,菌剂组的十二指肠、空肠、回肠和盲肠蛋白酶活力比对照组分别提高13.05%、17.95%、21.27%和31.58%(P0.05),淀粉酶活力比对照组分别提高13.93%、14.23%、45.51%和49.58%(P0.05),脂肪酶活力比对照组分别提高11.71%、18.17%、19.22%和26.84%(P0.05),纤维素酶活力比对照组分别提高69.84%、83.43%、111.06%和54.59%(P0.01);抗生素组的十二指肠、空肠、回肠和盲肠纤维素酶活力比对照组降低了16.67%、28.57%、12.90%和23.41%(P0.05),其他3种酶活力与对照组基本一致。菌剂组獭兔盲肠中大肠杆菌的数量比对照组极显著降低(P0.01),乳酸杆菌和双歧杆菌的数量比对照组均显著提高(P0.05),细菌总数基本一致;抗生素组盲肠中大肠杆菌和细菌总数均极显著低于对照组(P0.01),乳酸杆菌和双歧杆菌略低。菌剂组盲肠的pH值比对照组降低0.72(P0.05),其他各肠段的pH值稍低于对照组(P0.05);抗生素组各肠段pH值与对照组相比无显著变化。菌剂组和抗生素组的日增体质量比对照组分别提高16.61%和13.74%(P0.05);菌剂组的料重比、腹泻率与对照组相比分别降低了9.51%、68.11%(P0.05);抗生素组的料重比、腹泻率比对照组分别降低了8.29%、64.03%(P0.05)。因此,Tu-1菌剂在提高獭兔生产性能和肠道消化酶活力,维护肠道微生态平衡和降低腹泻率方面优于硫酸黏杆菌素。     

Bacillus subtilis Z-27制剂对仔猪肠道酶活及消化性能的影响

试验目的在于研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Z-27制剂对断奶仔猪肠道消化酶活力、常规营养成分、生长性能的影响,为该菌剂的益生机理的研究提供参考。将供试仔猪分为试验组和对照组,试验组饲喂添加0.1%Z-27菌剂的T2饲料,对照组饲喂T2饲料。采用GB/T 23527—2009、GB/T8275—2009等方法测定仔猪粪便中蛋白酶、α-淀粉酶等消化酶活力;利用GB/T 6435—2006、GB/T6432—94等方法测定粪便中水分、粗蛋白质等常规养分的含量;记录采食量并称取始重和末重。试验表明,与对照组相比,试验组仔猪的粪便中蛋白酶、α-淀粉酶、纤维素酶的平均活力和脂肪酶水解液酸价分别提高了62.99%、34.56%、133.10%和66.57%;粪便中残留的粗蛋白质、淀粉、粗脂肪和粗纤维等有机成分含量分别下降了30.51%、52.13%、18.44%和26.73%,而无机成分的含量基本无变化;平均日增重提高了9.38%,料重比降低了4.94%。研究表明,枯草芽孢杆菌Z-27制剂具有提高仔猪肠道消化酶活力、提高饲料转化率、改善仔猪生长性能的作用。     

Z-27菌剂对猪舍空气NH3、H2S浓度及排泄物含氮量的影响

为验证微生态制剂Z-27(以下简称Z-27菌剂)对猪舍空气中有害气体减排的效果,选取400头50 kg左右健康杜长白三元杂交育肥猪,随机平均分为对照组和试验组,每组1栋猪舍,每栋20栏,每栏10头猪。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加0.1%Z-27菌剂。试验共15 d,期间检测猪舍空气中NH_3、H_2S浓度及细菌、大肠杆菌数量,测定猪粪和尿中总氮含量、氨态氮含量和pH值,检测粪尿混合物NH_3、H_2S的48 h排放量;观察每组腹泻情况,计算腹泻率;每组分出3栏(30头)分别于试验开始和结束时空腹12 h称体质量并结算剩余料,计算均增质量和料质量比。试验结果表明,试验前期试验组各参数有一个渐变过程,7 d后方能达到稳定,故以第8天(含)后的数据将试验组和对照组进行比较。试验组猪舍空气中NH_3、H_2S含量比对照组分别下降63.27%、54.61%,细菌、大肠杆菌总数比对照组分别下降46.68%、59.89%;试验组猪粪总氮含量和氨氮含量比对照组分别下降46.32%、65.83%,猪粪的pH值比对照组降低0.54;试验组猪尿总氮含量和氨氮含量分别降低26.47%、27.59%,尿液pH值比对照组降低0.86;试验组新鲜猪粪尿混合物的NH_3、H_2S的48 h释放量比对照组分别下降32.76%、35.69%;同时试验组均增质量比对照组提高10.38%,料质量比降低9.05%,腹泻率降低60.06%。表明该菌剂具有降低育肥猪氮素排泄的作用,可从源头降低猪排泄物NH_3、H_2S等有害气体排放,还能够显著提高育肥猪的生长性能,防治腹泻。     

枯草芽孢杆菌J-4菌株产抑菌物质发酵条件优化

为了提高枯草芽孢杆菌J-4菌株发酵液中抑菌物质的含量,采用单因素试验和正交试验相结合的方法,对基础发酵培养基的组成(碳源、氮源、无机盐含量)和发酵条件(发酵时间、装液量、发酵温度、接种量)进行优化。优化后的培养基组成为葡萄糖1.00%、黄豆饼粉1.00%、MgSO_40.15%、Na_2HPO_40.10%、NaH_2PO_40.10%;发酵条件为发酵时间36 h、装液量100 mL(250 mL)、发酵温度37℃、摇瓶接种量5%。在此条件下,枯草芽孢杆菌J-4菌株抑菌圈面积提高50.25%。     

草莓根腐病生防芽孢杆菌的筛选鉴定与盆栽防效试验

为了获得草莓根腐病病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的拮抗芽孢杆菌,对本实验室筛选保存的各类植物病原菌的拮抗芽孢杆菌进行初筛和复筛;对复筛获得的菌株进行形态特征、生理生化试验和16SrDNA序列分析,以确定其种属;采用盆栽试验检测了其生防效果。通过试验获得了一株对尖孢镰刀菌具有较好拮抗活性的芽孢杆菌菌株HD-5,并鉴定其为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),盆栽防治效果达到77.78%,具有较好的草莓根腐病防治潜力。     

棉花黄萎病生防芽孢杆菌Z-5菌株发酵培养基的优化

在农用微生物菌剂中芽孢杆菌菌剂产品多采用芽孢作为有效成分,因此产芽孢条件的优化对棉花黄萎病生防细菌的工业生产有着重要意义。本文通过单因素试验分析了8种碳源、8种氮源和6种无机盐对Bacillus malacitensis Z-5菌株芽孢产量的影响,采用Plackett-Burman试验设计确定了影响芽孢产量的主要因素,用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法确定主要影响因素的最佳条件。结果表明,单因素试验筛选出3种碳源(玉米粉、麸皮、葡萄糖)、3种氮源(豆饼粉、花生饼粉、酵母粉)和2种无机盐(MnSO4·H2O、CaCl2);Plackett-Burman试验确定Z-5菌株生产芽孢最适碳源、无机盐和氮源分别为玉米粉、MnSO4·H2O和豆饼粉,最陡爬坡路径法获得此3种因子的最适浓度范围为:玉米粉1.0%~2.0%、MnSO4·H2O 0.05%~0.09%、豆饼粉为1.0%~2.0%。响应面法得到芽孢产量与玉米粉、MnSO4·H2O和豆饼粉含量的回归方程。最终确定优化培养基组合为玉米粉1.66%、豆饼粉1.30%、MnSO4·H2O 0.07%、NaH2PO4·2H2O0.2%、Na2HPO4·2H2O 0.4%,优化后芽孢产量达到1.97×109 mL-1,与理论值基本相符。     

番茄灰霉病拮抗菌TB-12菌株发酵条件优化及其生防效果

以灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea Pers.)为指示菌,采用单因素试验与正交实验相结合的方式,对TB-12菌株发酵培养基组成及培养条件进行优化,以提高番茄灰霉病拮抗菌Bacillus velezensis TB-12菌株的抑菌效果,并通过盆栽试验考察了TB-12菌株对番茄灰霉病的防治效果,为今后该菌剂生产工艺条件的进一步确定及其防治应用的开展奠定相应的基础。结果表明:TB-12菌株的最佳发酵培养基组合为乳糖2%,酪蛋白胨4%,MgSO_4·7H_2O 0.1%,KCl 0.05%;最佳培养条件为接种量10%,装瓶量50 mL,初始pH 8,发酵时间60h,培养温度30℃,摇床转速180r·min~(-1)。与采用基础发酵培养基相比,优化后TB-12菌株对灰葡萄孢菌的抑制效果增加了69.4%。盆栽试验表明,优化后TB-12菌株发酵上清液对番茄灰霉病的预防效果达到69.2%,治疗效果达到58.2%,分别提高了32.6%和19.5%。TB-12菌株对番茄灰霉病有良好的防治效果。     

耐酸产蛋白酶芽孢杆菌SD48菌株液体发酵豆粕产大豆肽条件的优化

为了确定甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)SD48菌株液体发酵豆粕产大豆肽的最优培养基组成和最佳发酵条件,以大豆肽含量为指标,通过单因素试验确定最优碳源种类、无机盐种类和发酵温度;通过正交试验确定最适碳源、豆粕、硫酸铵和无机盐的含量,以及SD48菌株接种量、起始pH值、装瓶量和发酵时间。结果表明,最优培养基组成:可溶性淀粉含量为1.00%,豆粕含量为15.00%,硫酸铵含量为4.00%,硫酸锰含量为0.09%;最适发酵条件:起始pH值为6.00,装瓶量为40%,SD48菌株的接种量为6.00%,发酵温度为28℃,培养时间为72 h。由此获得的大豆肽含量为8.03%,相对含量为71.06%,抗氧化活性达到343.70μg AEAC/mL。综上,获得了SD48菌株液体发酵豆粕产大豆肽的最佳条件,提高了大豆肽的产量。     

兔源益生菌Tu-115菌株鉴定及其产纤维素酶固体发酵条件优化

对胞外产纤维素酶且能有效抑制大肠杆菌的优良菌株Tu-115菌株进行菌体形态和菌落形态观察、生理生化特性测定及16S rDNA序列系统发育分析以确定其种属。以羧甲基纤维素(CMC)酶和滤纸酶活力大小为指标,通过单因素试验和正交试验来确定发酵培养基的最适发酵条件。Tu-115菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);当以麸皮为碳源,豆饼粉为氮源,碳氮比4:1,麸皮粒度大于20目,料水比1:1,接种量20%,初始pH值4.0,装瓶量4 g/250 ml,在35℃静置培养144 h时,CMC酶和滤纸酶活力分别可达73.35 IU/g和64.06 IU/g。确定了Tu-115菌株的种属,获得了该菌株产纤维素酶的最适固体发酵条件,为该菌株应用于纤维素酶生产奠定了基础。     

紫外-微波诱变选育抗菌肽高产菌株及抗菌肽性质分析

以抑制大肠杆菌能力为指标,采用紫外-微波诱变的方法对Tu-569菌株进行选育,并以遗传稳定性试验评价正突变菌株的稳定性,以获得抑菌能力更强、遗传更稳定的高产菌株;通过观察高产菌株的菌落和菌体形态,以生理生化试验和API 50 CH细菌鉴定条综合评测高产菌株生理生化特性,结合16S r DNA序列分析来鉴定高产菌株的种属;通过考察硫酸铵盐析、透析处理、蛋白酶处理、加热处理、缓冲液pH值等对突变菌株胞外产抑菌物质活性的影响,探索抑菌物质的性质。结果表明,于30 cm处紫外照射240 s时,筛选出1株抑菌圈面积增大0.79倍且传代十次遗传稳定的正突变菌株T-4M-5。选取T-4M-5菌株进行微波诱变,当微波炉参数为P50,辐射共60 s和70 s时,筛选出4株抑菌圈显著增大且遗传稳定的正突变菌株,其中T-70-1菌株的活性最高(抑菌圈面积达到363.8 mm2)且遗传稳定性最好,是Tu-569菌株抑菌圈面积的2.74倍。T-70-1菌株具有与Tu-569菌株相同的菌落菌体形态;除不产接触酶、可耐受10%和15%的Na Cl、可利用D-半乳糖和D-塔格糖外,其余生理生化特性与Tu-569菌株相同;结合16S r DNA序列分析鉴定T-70-1菌株为Bacillus velezensis。T-70-1菌株胞外抑菌物质可被70%饱和度的硫酸铵盐析;该抑菌物质相对分子质量在3.5~8.0 k Da之间;抑菌物质分子结构中含有可被胰蛋白酶或胃蛋白酶酶解的肽键;在pH值3.0~9.0范围内均有较高活性;抑菌物质对40~100℃加热处理具有较强耐受性,但121℃处理后完全失活。经紫外-微波诱变获得了一株高产抗菌肽、遗传稳定的T-70-1菌株,其胞外产抗菌肽抑菌活性较强,耐受胃肠道环境,较为耐热,在畜牧养殖业极具应用潜力。