不同胁迫博落回根中生物碱含量变化及相关基因表达量分析

本研究通过对PEG6000模拟干旱以及机械受损等方法胁迫博落回,采用HPLC方法检测博其根中原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱的含量,结果 30%PEG6000模拟干旱以及机械受损均可使博落回根中终产物生物碱血根碱、白屈菜红碱含量上升,中间产物原阿片碱、别隐品碱含量下降;且血根碱、白屈菜红碱合成基因DBOX、P6H表达量上调;用实时荧光定量RT-PCR检测生物碱合成相关基因的表达量,血根碱、白屈菜红碱合成基因DBOX、P6H表达量上调。适当干旱以及机械受损有利于博落回根中血根碱、白屈菜红碱积累,为其在干旱、石漠化地区种植以及在种植过程中结合家畜喂养提供理论依据。     

博落回愈伤抗除草剂Bar基因的转化以及抗性功能的检测

本研究成功建立了一个全新的以博落回愈伤为外植体的遗传转化体系。该遗传体系将抗草丁膦的Bar基因整合到pcambia2301质粒,构建植物载体,通过农杆菌介导转染博落回愈伤,选用Bar基因为筛选标记,采用PPT进行筛选,对转染的愈伤和组培苗用PCR、RT-PCR、GUS染色等方法验证为阳性,获得了抗除草剂的博落回植株。该遗传体系相比以叶片为外植体、抗生素为筛选标记的遗传体系,更能加快转化时间,缩短转化周期,而且假阳性更低,对于博落回生物学研究具有一定帮助。