SC1(pluripotin)对昆明小鼠胚胎干细胞分离培养的影响

比较了在无血清培养体系中分别添加小分子化学物质pluripotin(SCl)和白血病抑制因子(LIF)对昆明小鼠ES细胞未分化状态的维持作用,并探讨了SC1在培养液中的最佳浓度.以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)为饲养层,以含LIF的添加血清替代品(KSR)的培养基(ESC-SR)为对照,分别用SC1浓度为0.3、1、3μmol/L的ESC-SR培养液对昆明小鼠胚胎进行分离培养.结果显示:胚胎在添加3 μmol/L SC1的ESC-SR培养液中ICM形成率显著高于对照组(P＜0.05),形成的ES集落与对照组形态差异不明显,最高传至第7代,并且在无饲养层条件下可以传至第6代而保持未分化状态.不同浓度SC1培养液中,胚胎在SC1浓度为0.3 μmol/L组的F2代形成率显著高于1 μmol/L组和3μmol/L组(P＜0.05),所分离的细胞AKP染色呈阳性,Oct4、Nanog和Sox2的免疫荧光染色均显阳性,具有ES细胞的特点.结果表明,ESC-SR培养液中SC1可以替代LIF用于小鼠ES细胞未分化状态的维持,并且可以在无饲养层条件下进行昆明小鼠ES细胞的培养.     

犊牛腹泻的病因分析与治疗对策

犊牛腹泻是犊牛常见的疾病,导致犊牛大量死亡和发育受阻,给养牛业带来了巨大的经济损失。笔者分析了犊牛腹泻的发病原因,提出了治疗对策,并对其临床症状,诊断和预防进行了论述,以期提高养殖效益。     

成熟培养时间对家猫卵母细胞孤雌激活胚发育的影响

为筛选出最佳体外成熟时间,以乙醇联合6-DMAP激活验证成熟时间对家猫卵母细胞成熟的影响.将家猫卵母细胞分别体外成熟28h,32h和36h后,采用10%无水乙醇激活3min,6-DMAP培养4h,再移入胚胎体外培养液中培养;第二天观察卵裂率,第六天结束培养并用H33342染色,观察不同成熟时间的激活胚胎发育情况.结果表明:成熟32h组的卵母细胞激活率最高,显著高于28h组(60.42%vs 43.16%,0.010.05);经孤雌激活的卵母细胞没有发育至囊胚的,32h组桑椹胚率最高达到15.63%,与其他两组差异不具有统计学意义(7.36%和10.78%,p>0.05).结论:家猫卵母细胞体外成熟培养32h,成熟效果最好.     

绵羊类胚胎干细胞的分离与克隆

从胚胎发育阶段、饲养层和培养体系等方面对影响绵羊类ES细胞分离、克隆效率的因素进行探讨。结果显示：致密桑葚胚和囊胚的ICM增殖率高于囊胚和孵化囊胚。绵羊类ES细胞在同源绵羊胎儿成纤维细胞（SEF）上生长比较缓慢,最终传代次数也低于小鼠胎儿成纤维细胞（MEF）组。培养液中同时添加胎牛血清（FBS）和Knock-out血清替代品（KSR）,绵羊类ES传至7代,添加了碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）后,最高可传至8代,而单纯添加KSR或FBS,分别传至4代和5代。对类ES细胞进行AKP染色、核型分析、体外分化试验,证实分离的类ES细胞符合ES细胞的主要特征,而且表达多潜能性细胞因子Nanog。由此认为,致密桑葚胚和囊胚更适合绵羊类ES细胞的体外分离和培养,而且MEF更适合于绵羊类ES细胞的分离传代,培养液中添加5%FBS和15%KSR,比较适合类ES细胞的分离传代,bFGF对绵羊类ES细胞的增殖具有促进作用。     

兔骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究

旨在研究5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导兔骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)向心肌细胞分化的作用及适宜浓度.取兔股骨骨髓,分离并培养骨髓间充质干细胞,用5-Aza定向诱导向心肌样细胞分化.用倒置显微镜、免疫细胞化学法鉴定诱导后的细胞是否能表达心肌特异性蛋白α-横纹肌肌动蛋白(α-actin)和肌钙蛋白T(Cardiac troponin T,cTnT),计算各组细胞向心肌样细胞的诱导分化率.结果,5-Aza诱导MSCs后,细胞明显变宽,诱导1个月后的MSCs呈长杆状,走向趋于一致,相邻细胞间连接较紧密,相互融合.心肌细胞特异性蛋白α-actin和cTnT呈阳性表达,不同浓度的5-Aza诱导的MSCs心肌细胞特异性蛋白的表达率不一样,其中以10 μmol·L-1组表达率最高.5-Aza作用兔MSCs体外培养可以诱导其向心肌样细胞分化,最佳浓度为10μmol· L-1.     

不同成熟培养时间对家猫卵母细胞皮质颗粒分布的影响

对家猫卵母细胞皮质颗粒染色,以检测不同成熟培养时间对猫卵母细胞胞质成熟的影响.将成熟培养24,28,32,36,43 h的家猫卵母细胞,以3.7%的多聚甲醛固定,之后分别对各组卵母细胞进行FITC-LCA和PI染料染色,在激光共聚焦显微镜下观察皮质颗粒(CGs)在卵母细胞胞质中的分布.结果表明,不同培养时间的卵母细胞处...     

昆明小鼠胚胎干细胞培养体系的优化

为了更高效地分离昆明小鼠胚胎干细胞,本研究从饲养层、胚胎发育阶段和培养液方面进行优化。将3代以内的小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)用丝裂霉素C处理后,分别按1×104、1×105、1×106·mL-1密度接种,以H-DMEM+15%KSR+LIF为培养液,观察不同密度饲养层对昆明小鼠胚胎干细胞(ES细胞)生长的影响,并研究胚胎发育阶段和培养液中分别添加干细胞生长因子(SCF)、SCF+胰岛素对昆明小鼠ES细胞分离克隆的影响。结果显示,胚胎在密度为1×105·mL-1的饲养层上,F1代和F2代ES细胞克隆形成率均显著高于其他2组(P<0.05)。囊胚的F2代ES细胞克隆形成率显著高于桑椹胚(P<0.05),培养液中添加SCF显著提高昆明小鼠胚胎贴壁率(P<0.05),同时添加SCF和胰岛素得到昆明小鼠最高胚胎贴壁率及F1、F2代ES细胞克隆形成率。所分离的ES细胞显示AKP染色强阳性,Oct-4、SSEA-1的免疫荧光检测阳性,具有ES细胞的特点。由此认为,发育至囊胚的胚胎在MEF密度为1×105·mL-1上,培养液中同时添加SCF和胰岛素更适合昆明小鼠ES细胞的分离培养。     

郏县红牛超数排卵研究

应用促卵泡素(FSH)连续4 d递减法肌肉注射郏县红牛进行超数排卵处理,重点探讨药物剂量、药物产地、季节以及重复超排等因素对郏县红牛超排的影响。结果表明,用加拿大FSH在300 mg剂量时的头均获胚总数和头均可用胚数(8.86和5.98枚)显著高于280 mg剂量组(6.32和3.05枚)和320 mg剂量组(6.56和4.12枚)(P0.05);用宁波产FSH在320 I U剂量条件下的头均获胚总数和头均可用胚数(8.12和5.46枚)显著高于280 I U组(5.55和2.76枚)和300 I U剂量组(6.32和3.77枚)(P0.05)。综合3个剂量的处理结果,进口FSH和国产FSH对郏县红牛的超排处理效果无显著差异,头均黄体数分别为13.89个和13.41个,头均获胚总数分别为6.94和6.74枚,头均可用胚数为4.42和3.95枚;在夏秋季(5-10月)超数排卵郏县红牛23头次,冬春季(11-次年4月)超数排卵郏县红牛21头次,发现超排季节对头均黄体数无显著影响(P0.05),但冬春季头均获胚总数(7.23枚)和头均可用胚数(6.51枚)显著高于夏秋季(4.57和2.90枚)(P0.05);对郏县红牛供体牛间隔70 d重复超排处理后发现,1次、2次和3次重复超排头均黄体数分别为14.30、13.12和12.23个,头均获胚总数分别为7.31、6.52和6.45枚,头均可用胚数分别为4.56、4.15和3.96枚,重复超排对上述3个指标均无显著影响(P0.05)。     

生长因子对兔骨髓间充质干细胞增殖的影响

旨在研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外生长及增殖的影响。体外培养并鉴定兔BMSCs,用不同浓度的bFGF(5、10、20、40、80和100μg.L-1)作用于兔BMSCs,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞仪观察细胞的生长及增殖情况。结果,经免疫细胞化学法和分化反推法鉴定所分离培养的细胞为兔骨髓间充质干细胞;MTT法结果显示,bFGF浓度为80μg.L-1时细胞的增殖能力最强(P<0.01),在培养第3天即出现显著的促增殖作用(P<0.01);流式细胞仪结果显示,bFGF组BMSCs的增殖指数明显高于对照组(P<0.01)。说明bFGF有促进体外培养兔BMSCs增殖的作用,浓度为80μg.L-1时促增殖能力最强,可以作为体外扩增培养兔骨髓间充质干细胞的最佳培养条件。     

郏县红牛超数排卵研究

本研究应用FSH连续4d递减法肌肉注射对郏县红牛进行超数排卵处理,共处理供体牛67头次,重点探讨了药物、剂量、季节以及重复超排等因素对郏县红牛超排的效果。