枸橼种质对柑橘溃疡病的抗性鉴定

柑橘溃疡病(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)是严重阻碍柑橘产业发展的世界性检疫病害,防控困难,选育抗病品种为防治溃疡病的唯一有效办法。枸橼C-05是柑橘属独特的抗溃疡病种质,为抗性机理和抗病育种提供了种质基础。为了进一步评价枸橼C-05的抗性,另外收集了13份枸橼种质,对其进行溃疡病的离体和活体抗性评价。叶片形态学观察表明,14份枸橼种质存在较大的形态学差异。采用离体与活体注射接种不同浓度的柑橘溃疡病菌,根据叶片的感病症状、病斑周围黄色晕圈大小等典型溃疡病症状,综合评价枸橼类种质的抗病性。结果表明:枸橼种质之间对溃疡病的抗性存在极大差异,溃疡病的抗性评价综合病情指数显示枸橼C-05、园香橼、矮果香橼、美国枸橼、普通枸橼和印度大果综合病情指数较小,表现为极抗病或抗病,其他枸橼种质表现不同程度的感病性;枸橼种质的抗病或感病性与其叶片形态特征无关。枸橼C-05和5个抗病枸橼种质对柑橘溃疡病具有针对性的抗性,这对进一步研究抗病机理和抗病育种具有重要意义。     

红花檵木实时荧光定量PCR分析内参基因的选择

实时荧光定量PCR(qRT-PCR)是目前基因定量表达分析的重要方法,而适宜内参基因的选择对目的基因表达特征的准确分析至关重要。本研究以红花檵木‘大叶红’（ L. chinense var．Rubrum ‘Dayehong’）的芽、嫩茎、叶、花瓣、种子和愈伤组织为材料,采用qRT-PCR 技术比较了4个常用看家基因微管蛋白基因(α-tubulin)、肌动蛋白基因(β-actin)、18S 核糖体 RNA(18S rRNA)与甘油醛-3-磷酸-脱氢酶基因(GAPDH)的表达情况,结果表明：（1）4个看家基因均能特异扩增并显示较高的扩增效率;（2）经 geNorm 和 NormFinder 程序综合分析,当采用qRT-PCR分析红花檵木不同器官和组织中的基因表达差异时,以GAPDH表达最为稳定,可选择作为校正内参基因;在比较不同发育阶段的叶片及明暗处理的愈伤组织中的基因表达差异时,β-actin表达最为稳定,可以选择作为校正内参基因。     

月季组培苗微嫁接技术规程

针对许多月季优良品种难以繁殖的问题,结合国家和行业标准,制定了月季微嫁接的相关技术规程,包括砧木和接穗的选择与繁殖、嫁接技术方法和后期管理。以期为月季微嫁接苗的生产提供参考。     

光质影响植物离体再生培养的研究进展

综述了植物离体再生培养中光质调控技术的研究现状,重点介绍了光质对植物愈伤组织的生长和诱导分化、组培苗生长发育方面的影响,并对今后的研究进行了展望。     

红花檵木叶片再生不定芽的研究

为了建立红花檵木叶片高效的离体再生体系,解决其基因工程育种的问题,以红花檵木叶片为外植体,探讨了品种、光照条件、激素等因素对叶片离体再生的影响。结果表明：不同品种叶片再生不定芽能力不同,‘玫红细叶青’再生能力最强,其次是‘长叶玫红’,‘花叶2号’叶片再生最难。白光和红光有利于叶片再生,70天后都有不定芽出现。其中白光下的诱导率达50%,红光下诱导率达25%。叶片近轴面接触培养基,再生效率高。适合诱导‘玫红细叶青’再生不定芽适宜培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L其不定芽分化率为41.6%,适合‘长叶玫红’不定芽分化的组合是MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L其不定芽分化率为33.3%。     

枸橼C-05抗柑橘溃疡病相关PRR基因LYK5的初步鉴定

为筛选出抗溃疡病病菌相关PRR(Pattern Recognition Receptors)基因,本研究以接种了溃疡病菌Xcc的抗病种质枸橼C-05(JY C-05)和感病种质冰糖橙(BTC)、酸橙(SC)及早蜜椪柑(ZM)为研究对象,利用荧光定量PCR分析PRR基因的表达,结果显示PRR基因中的LYK5(LYSIN MOTIF-CONTAINING RECEPTOR-LIKE KINASE5)基因在枸橼C-05中表达上调而在其它感病种质中表达下调,表明LYK5基因可能与枸橼C-05抗溃疡病相关;对枸橼C-05和感病种质LYK5核酸序列及氨基酸序列进行差异分析,发现枸橼C-05 LYK5基因与冰糖橙、来檬(LM)有差异,但是与大香橼(DXY)和爪哇柠檬(ZWNM)LYK5基因相似度为100%,说明基因结构差异不是枸橼C-05的LYK5基因参与抗溃疡病的原因;进一步对其蛋白关键结构域进行比较分析,显示LYK5蛋白质信号肽第16位氨基酸、LysM基序区域(第203号氨基酸,第209号氨基酸)和蛋白激酶结构域(第394位,第449位,第468位,第492位,第647位氨基酸)存在差异;同时,对其三级结构进行比对发现枸橼C-05 LYK5蛋白结构与感病种质冰糖橙、来檬、爪哇柠檬和大香橼并无差异,进一步表明LYK5基因参与枸橼C-05抗溃疡病的过程不是由其蛋白结构差异所致。分析枸橼C-05和其他柑橘种质的LYK5启动子,大多数元件的差异不能区分抗病和感病柑橘种质,只有枸橼C-05缺失激活分生组织特异性调控元件,其他柑橘种质均有该元件,这是不是LYK5在接种Xcc的不同柑橘中表达差异的原因还有待进一步探究。     

柠檬合子胚自交实生苗的鉴定及其对柑橘溃疡病的抗性初步评价

枸橼C-05是抗溃疡病的柑橘种质资源,柠檬是枸橼的后代,其自交后代可能继承枸橼的抗性基因。为分析柠檬自交群体对柑橘溃疡病的抗感性规律,本研究建立了433株的‘尤力克’柠檬自交后代群体,并利用SSR分子标记对合子胚实生苗进行了鉴定,观察合子胚实生苗和珠心胚实生苗叶片形态学的差异,对所有自交后代离体注射接种柑橘溃疡病菌,初步评价了实生后代对柑橘溃疡病的抗病性差异。结果表明‘尤力克’柠檬存在多胚性,从300对SSR引物中筛选到8对可用于‘尤力克’柠檬合子胚鉴定的引物,共鉴定出合子胚实生苗57株,确定珠心胚实生苗4株。叶形指数、叶尖指数、翼叶长、翼叶宽和叶柄长均不能作为区分‘尤力克’柠檬合子胚实生苗与珠心胚实生苗的形态学标记,但合子胚实生苗的翼叶长度变异幅度大于珠心胚。57株合子胚实生苗离体接种柑橘溃疡病菌后,5株表现为抗病,52株表现为感病;4株珠心胚实生苗均表现为感病;在372株未鉴定清楚的自交后代中,8株表现为抗病,364株表现为感病。本研究表明利用SSR分子标记还不能完全鉴定出‘尤力克’柠檬合子胚植株,可能需要更多的引物或更灵敏的分子标记才能把全部实生后代鉴定出来。利用合子胚自交后代接种鉴定,更有利于分析‘尤力克’柠檬对柑橘溃疡病的抗感性遗传规律,挖掘抗性基因,为柠檬的抗病育种提供种质资源。     

湖南省宽皮柑橘主产区土壤及柑橘叶片和果实营养元素状况分析

[目的]对湖南省宽皮柑橘主产区部分果园土壤和柑橘树体的营养元素进行丰缺性分析,为湖南省宽皮柑橘合理施肥提供科学依据.[方法]采用定点采样分析方法,采集湖南泸溪、石门和永顺3个宽皮柑橘主产区207个样点的土壤、柑橘叶片和果实,测定其营养元素含量,同时分析土壤有机质、pH和养分状况,并与柑橘营养诊断标准进行比较,确定宽皮柑橘主产区各橘园的土壤、柑橘叶片和果实养分丰缺情况.[结果]湖南省宽皮柑橘主产区土壤状况表现为:土壤pH整体偏低,处于5.5~6.5适宜比例的样点仅占13.04%;26.09%的样点有机质含量偏低.不同地区、不同土壤类型的果园土壤、柑橘叶片和果实养分含量差异明显.土壤差异百分比最大为铁元素(95.14%),叶片差异百分比最大为铜元素(86.36%),果实差异百分比最大为锰元素(94.77%).潮土、红壤、紫色土3种类型土壤碱解氮含量无明显差异,其他元素差异明显;土壤大量元素主要问题在于氮肥的使用与吸收,缺乏氮比例高达100.00%,中量元素交换性钙、交换性镁均缺乏,微量元素有效铁、有效锰过量,而有效硼缺乏.叶片大量元素与土壤有效磷、速效钾丰缺情况不完全一致;中量元素钙、镁缺乏,与土壤中交换性钙、交换性镁缺乏较一致;微量元素与土壤各微量元素丰缺情况不完全一致.3个产区柑橘果实养分的氮、钾、钙、镁含量差异不明显,但微量元素含量差异明显.[结论]湖南省宽皮柑橘主产区应选择碱性有机肥改良土壤pH,注意补充氮肥和硼肥.另外,由于宽皮柑橘果实带走的钙和镁养分较多,土壤易缺乏钙、镁,应重视补充钙肥和镁肥;而土壤锰含量过高,应注意减少锰肥的用量.     

红花檵木CHS基因的克隆与序列分析

查尔酮合酶(chalcone synthase, CHS)是进入类黄酮和花色素苷次生代谢的第1个关键酶。根据植物查尔酮合成酶保守区序列设计引物,以红花檵木(Loropetalurn chinense var. rubrum)大叶红的嫩叶为材料,用RT-PCR方法,分离得到了一个查尔酮合成酶基因的cDNA（GenBank登录号为JQ609678）,将该基因命名为LcvrCHS1。该序列长927 bp,编码232个氨基酸残基。其核苷酸序列与GenBank已登录的同样来源的核桃、山茶属植物CHS序列同源性达83%,与其他科植物（绣球花、葡萄、桃、马铃薯、甘草、领春木属）CHS序列同源性也达到80%以上;其编码的氨基酸序列与山茶属、葡萄、鳄梨、洋梨、沙梨、映山红CHS基因编码的氨基酸序列同样具有高度同源性,同源性高达98%。