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抗菌肽CM与haFGF改构体融合基因的构建与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
构建重组改构体aFGF28-154和抗菌肽CM基因的融合基因,使其在大肠杆菌系统中融合表达,以期获得具有靶向FGFR高表达肿瘤细胞的抗肿瘤融合蛋白.利用PCR引物延伸的方法拼接得到带有G4S铰链的天蚕素-蜂毒素杂合肽CM与aFGF28-154的融合基因,插入大肠杆菌表达载体pET20b中,构建表达质粒pET-CM-aFGF28-154,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),氨苄青霉素抗性筛选重组转化子.IPTG诱导4 h后,菌液经超声破碎,以包涵体形式表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的18%.将包涵体溶解并通过差速离心除去部分杂蛋白,透析复性并用Heparin Sepharose CL-6B亲和层析,目的蛋白得到初步纯化,为进一步研究蛋白的生物学活性奠定了基础. 相似文献
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全球气候变化日益明显,极端天气条件频发。持续的高温、低湿等异常天气给森林防火工作带来极大的困难,多年的森林火灾控制、造林工作、天然林保护工作和缺乏有效的可燃物处理工作使森林可燃物大量积累,两者结合使目前的森林火灾发生情况与以往有明显的不同,突出表现在火灾发生时间的变化上。东北林区夏季火灾明显增多,而且这种变化日益稳定,两次夏季火灾高发期之间的时间间隔越来越短,夏季火发生的频率越来越高。2002年发生在内蒙古林区的“7.28”大火引起了各方面的关注。非防火期火灾已成为气候变化情景下森林防火工作应正面面对和急需研… 相似文献
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人成纤维细胞生长因子-21分泌型表达及鉴定 总被引:6,自引:1,他引:5
利用基因工程手段,将人成纤维细胞生长因子-21(hFGF21)与分泌信号肽相融合,构建得到能够分泌表达FGF21蛋白的表达载体.将该表达载体导入到Rosetta(blue)宿主细胞中,在分泌信号肽的引导下,在细胞周质中表达.经IPTG诱导表达可获得分子量为21 kD的蛋白,Western-Blotting证明该蛋白为FGF21蛋白.经SOS-PAGE证明获得了可溶性的FGF21蛋白.该方法简化了纯化工序,提高了成品率,使大规模生产重组人成纤维细胞生长因子-21(rhFGF21)成为可能. 相似文献
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猪A组轮状病毒VP4全基因在大肠杆菌中的表达与检测 总被引:1,自引:1,他引:0
以猪轮状病毒mRNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了2331bp的VP4全基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆质粒pGEM-T-VP4.以BamHⅠ和SalⅠ双酶切pGEM-T-VP4和pGEX-6P-1,并将纯化的VP4基因亚克隆至融合型表达载体pGEX-6P-1中,构建出原核表达质粒pGEX-6P-VP4.将pGEX-6P-VP4转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约111.47 ku融合蛋白带.Western blot分析发现,该蛋白具有轮状病毒抗原性,从而为进一步研究轮状病毒的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础. 相似文献
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从大连海域不同采样地点采集海泥样品,用平板稀释法,分离获得海洋放线菌95株,根据菌丝生长状态以及可溶性色素产生情况,选取其中48株进行16SrDNA序列分析,构建系统发育树并测定其生理生化特征。研究结果表明,供试48个菌株均属于链霉菌属,分属9个类群20个种。对黄瓜枯萎病尖镰孢菌(Fusarium oxysporumf.sp.cucumerinum)的抑制活性测定结果表明,链霉菌菌株M95、M108、HL9、HE16、HE66和YH91对尖镰孢菌具有一定的抑制作用,其中菌株YH91的抑菌效果明显。 相似文献