云南的松针红斑病病原菌形态鉴定

本文报道在云南寄生于云南松ＰｉｎｕｓｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈ．、加勒比松Ｐ．ｃａｒｉｂａｅａＭｏｒｅｌｅｔ、湿地松Ｐ．ｅｌｌｉｏｔｔｉｉＥｎｇｅｌｍ．和火松Ｐ．ｔａｅｄａＬ．上的松褥盘孢菌Ｄｏｔｈ－ｉｓｔｒｏｍａｐｉｎｉＨｕｌｂａｒｙ形态鉴定。该菌侵染导致松针的衰弱死亡后，进行死体分解的菌是乔松散斑壳Ｌｏｐｈｏｄｅｒｍｉｕｍｐｉｎｉ－ｅｘｃｅｌｓａｅＡｈｍａｄ、星状拟盘多毛孢菌ＰｅｓｔａｌｏｔｉＯｐｓｉｓｓｔｅｌｌａ－ｔａ（Ｂｅｌｋ．＆Ｃｕｒｔ．）Ｈ．Ｔ．ＳｕｍｅｔＣａｏ、污斑拟盘多毛孢菌Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓｆｏｅｄａｎｓ（Ｓａｃｃ．＆Ｅｌｌ．）Ｓｔｅｙ．，它们加速了死亡部分的分解而使症状更加显得严重。     

飞蝗β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的表达及酶学特性分析

【目的】β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(β-N-acetylglucosaminidase,NAG)是昆虫几丁质降解过程中的重要酶类。研究旨在利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统获得高纯度LmNAG1蛋白并对其酶学特性进行分析,探究该酶在飞蝗(Locusta migratoria)生长发育过程中的生物学功能,为飞蝗绿色防控分子靶标研发提供理论与实践依据。【方法】根据Lm NAG1的cDNA全长序列(Gen Bank:JX888720.1)设计包含酶切位点Bam H Ⅰ、Hind Ⅲ和6×His标签的引物。采用PCR技术扩增包含开放阅读框的目标片段,双酶切后连接至pFast Bac~(TM)-Dual载体上。将重组质粒转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,通过Tn7转座子把目的基因转座到杆状病毒基因组上,用蓝白斑结合抗生素筛选。挑取白斑用pUC/M13引物来扩增目的条带,挑选带目的基因全长的重组杆状病毒质粒(baculovirus plasmid,Bacmid)。用转染试剂将重组Bacmid转染至草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞系Sf9中,72 h内连续观察细胞形态,当出现感染迹象后收集细胞,离心,取上清得到P1代重组病毒粒子。用P1代病毒粒子去感染Sf9细胞,裂解并提取蛋白,Western blot检测目的蛋白是否成功表达。之后大量感染Sf9细胞,提取蛋白,利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱和阴离子交换柱Q对重组蛋白进行纯化,取最纯的馏分用Bradford法测定蛋白浓度。采用4MU-GlcNAc为底物对重组目的蛋白LmNAG1的动力学参数、最适温度和最适pH进行测定。【结果】克隆得到包含1 845 bp LmNAG1全长的pFast Bac-LmNAG1重组质粒,酶切验证与目标条带一致。将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞中,PCR扩增挑选出纯白斑,成功将LmNAG1全长序列构建到杆状病毒基因组上。将重组Bacmid转染至Sf9细胞,72 h后在显微镜下观察可见细胞膨大,边缘不规则等感染迹象。离心收集重组病毒粒子感染新的Sf9细胞,72 h后收集细胞,Western blot检测发现在67 kD附近有明显条带,与LmNAG1的理论分子量一致,获得带6×His标签的融合蛋白。大量感染收集细胞提取蛋白,经Ni-NTA琼脂糖层析纯化,进一步透析除盐后用阴离子交换柱Q二次纯化,得到了高纯度的目的蛋白。用Bradford法测定最纯的E3组分的蛋白浓度为0.057μg·μL~(-1)。体外活性测定结果表明LmNAG1的最适pH为8.0,且在pH 6.0—8.0范围内具有较高的稳定性;LmNAG1的最适温度为40℃,在40℃以下具有很高的稳定性,当温度高于45℃时热稳定性迅速下降;采用4MU-GlcNAc为底物测得LmNAG1具有水解β-1,4糖苷键的活性,可以释放出4MU,它的动力学参数K_m值为(0.28±0.02)mmol·L~(-1),K_(cat)值为(902.88±38.15)s~(-1)。【结论】成功获得高纯度且具活性的LmNAG1蛋白,其可水解β-1,4糖苷键连接的几丁质寡糖,与已知昆虫NAG1具有相似的生物学功能,即参与几丁质的降解。     

碘酒溶液治疗奶牛放线菌病

牛放线菌主要侵害骨组织,主要通过消化道传染,粗糙的饲草料刺伤口腔,容易诱发本病,呈零星发生,慢性传染。我场2至5月龄犊牛发生本病的较多,成年牛个别发生。几年来,我们在临床治疗中曾遇到本病34例,其中,犊牛28例,成年牛6例。我们采用7％碘酒溶液试治,一般一次即治愈,效果满意,费用低廉,方法简单。     

叶面喷施多效唑对苦荞产量株型及结实率的影响

在高水平施肥条件下，于苦荞二片真叶出现期喷施４００ｐｐｍ的多效唑能较大幅度提高产量，获得理想株型，提高结实率。     

6BK-42E型板栗苞剥离机

6BK-42E型板栗苞剥离机由安徽省蚌埠市淮丰农业机械有限责任公司研制生产,以单相电动机为动力,带动转子锤顺时针旋转,板栗苞从喂料斗送入,经转子锤片及定子之间设施多次撞击而破碎,落入筛体,筛体在偏心轴的作用下上下抖动,将苞壳、板栗和碎屑分检清选后,从三个出料口流出,达到分检、清选、收集的目的。主要技术参数:外型尺寸为106厘米×51厘米×106.5厘米,整机重量为90公斤,配套动力为1.1千瓦(单相)电动机,锤片速度为280转/分,生产率为≥500公斤/小时,破碎率为≤0.47%,未脱净率为≤0.95%。6BK-42E型板栗苞剥离机!安徽@李应龙…     

沼气池启动六注意

一、要有足量的接种物新池装料前．要收集老沼气池里的沼渣、沼液．粪坑的底脚黑色沉渣、塘泥、城镇污水沟的污泥．以及食品厂、酒厂、屠宰场的污水、污泥，其中都含有丰富的沼气细菌．是良好的接种物。收集以上某一种接种物的数量．要达到发酵原料的10％-30％．把接种物和发酵原料均匀混合，一同加入池内，     

三樟黄贡椒科学施肥技术规程

三樟黄贡椒是湖南省衡东县三樟镇的特色农产品,2019年获得中国地理标志产品称号。为指导椒农科学施肥,提高三樟黄贡椒的种植水平,作者按照绿色食品产地标准和农产品质量安全的要求,制定了三樟黄贡椒施肥技术规程,以促进地方特色蔬菜产业持续快速发展。