苜蓿根瘤菌聚羟丁酸解聚酶基因(phbD )突变体的构建及其特性

摘要: 根据苜蓿根瘤菌(Sinorhizobium meliloti ) Rm1021基因组中与Ralstonia eutropha phaZ基因同源部分序列设计1对引物，从S. meliloti基因组中用PCR扩增出835 bp phbD 基因片段并克隆到载体pGEM?襆-T Easy上；通过在phbD基因内插入ΩSmSp和基因置换构建了phbD突变体。该突变体可积累比野生型菌株多1.0~2.6倍的聚羟丁酶（PHB）。在YMA和TY平板上形成非粘液型菌落，而在以乙酰乙酸或3-羟丁酸为唯一碳源的M9基本培养基（M9-AA，M9-HB）上形成粘液型菌落。碱性磷酸酶测定结果表明，通过接合引入phbD突变体菌株中的exoF-phoA融合基因在YMB培养基中低量表达，而在M9-AA和M9-HB中高量表达。     

苜蓿根瘤菌聚羟丁酸代谢突变体的竞争生长和结瘤能力以及外源生物素的影响

对苜蓿根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)聚羟丁酸(PHB)代谢突变体与野生型菌株之间，以及不同突变体之间的竞争生长和竞争结瘤能力在不同培养条件下进行了测定，并研究了外源生物素对各突变体竞争生长和竞争结瘤能力的影响。结果表明：①phbC突变体菌株与野生型菌株共培养，不论培养基中添加、不添加外源生物素，phbC突变体均表现出生长竞争能力的严重缺陷；竞争结瘤实验也显示，该突变体同野生型菌株竞争结瘤能力大幅下降；说明PHB合成能力的缺陷影响了菌株的竞争生长和竞争结瘤能力。②bdhA突变体与野生型菌株共培养，在不添加外源生物素的情况下，bdhA突变体同野生型菌株竞争生长的能力有明显缺陷，但在添加外源生物素的情况下，其竞争生长能力有明显提高；bdhA::Tn5突变体与phbC::Tn5-233突变体共培养。如培养基中不添加外源生物素，二者间的竞争生长能力无大的差异；但若添加外源生物素，则bdhA突变体的竞争生长能力明显高于phbC突变体；表明外源生物素对bdhA突变体的竞争生长能力有重要作用。     

苏云金杆菌SD—5菌剂防治大豆银纹夜蛾的研究

试验结果表明ＢｔＳＤ－５对银纹夜蛾幼虫具有高毒力、纯化晶体的毒力比孢昌混合物高，毒杀速度也较快；ＳＤ－５对银纹蛾化蛹和羽化均有明显影响；田间小区药效试验表明ＳＤ－５ ０．２×１０＾８、０．５×１０＾８、１×１０＾８活芽孢／ｍＬ６天的防效分别为９０．１％、９６．９％和９７．８％；示范推广１２３．６ｈｍ＾２，平均防效为９１．８５％；ＳＤ－５处理区天敌种类和数量明显高于化防区；ＳＤ－５田间喷施后第８天毒     

慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiurm japonicurm)USDA110菌株3-羟丁酸脱氢酶基因(bdhA)的克隆、序列及特性

通过功能互补试验，从慢性型大豆根瘤菌USDA110菌株基因文库中筛选到能互补广宿主根瘤菌NGR234的bdhA突变体菌株NGRPA2和苜蓿根瘤菌的bdhA突变体菌株Rm11107，使之恢复Hbu^ 表型的克隆；经酶活测定的Southern杂交证明该克隆含有bdhA基因。测定了bdhA基因全序列，并在GenBank登记（登记号为：AY077581）。该基因由789个碱基对组成，编码分子量为27.59ku，含262个氨基酸残基的3-羟基丁酸脱氢酶，在该基因的开放阅读框内插入interposonΩKm，并通过同源重组构建了Bradyrhizobium japonicum bdhA突变体（bdhA::ΩKm)。植株试验未显示bdhA基因的突变对结瘤，固痰有明显影响。     

噬菌体vB＿SalS＿DZ的生物学特性及对鸡沙门氏菌病的疗效

抗药性沙门氏菌的出现,严重影响了抗生素对沙门氏菌病的治疗效果,而噬菌体治疗是一种可能的替代方法。本试验研究了沙门氏菌噬菌体vB_SalS_DZ的基本生物学特性及其对沙门氏菌SM86的治疗效果。噬菌体vB_SalS_DZ的生物学特性分析显示其效价可达109pfu/m L,透射电镜结果显示该噬菌体属于有尾目T4噬菌体。对p H值的适应范围宽,在p H值4~12内能保持较高的裂解活性;该噬菌体的最适p H值在5.0左右。最佳感染复数为10-6,感染宿主菌的潜伏期和爆发期均为60 min;基因组中不携带抗性基因和毒力基因。噬菌体vB_SalS_DZ可以使感染沙门氏菌病的SPF鸡死亡率降低50个百分点,这表明该噬菌体在治疗特定的沙门氏菌感染中具有较大的应用潜能。     

噬菌体与宿主细菌的攻防机制

噬菌体是侵袭细菌的病毒,也是病毒中最普遍、分布最广的类群。为了防止噬菌体侵染,细菌进化出多种多样的防御机制;而为了突破这些防御机制,噬菌体也进化得到了相对应的反制策略。本文即综述了这一领域的研究进展,有助于理解噬菌体与宿主细菌的共存共进化机制,合理利用噬菌体。     

苏云金杆菌SD－5菌株的生物毒力研究

本文比较了ＳＤ－５孢晶混合物、纯化芽孢及纯化晶体对菜青虫的毒力，研究了芽孢与晶体的比例对毒力的影响，表明ＳＤ－５对菜青虫的毒力以晶体为主；测定了５批中试产品的生物毒力，感染三龄菜青虫７２小时的ＬＣ５０为稀释２７４０～３６９２倍；并研究了ＳＤ－５对霜天蛾、大袋蛾及烟青虫的毒力，结果表明ＳＤ－５对这些害虫具有较强毒力。     

草莓内生细菌的分离及草莓灰霉病菌拮抗菌的筛选鉴定

本研究从健康的草莓植株内分离到54株内生细菌,其中根、茎、叶组织中分离内生细菌种群密度为2.8×101～3.95×104cfu/g鲜重不等。通过对峙试验,得到5株对草莓灰霉病菌有强拮抗作用的菌株,占所分离内生细菌总数的9.26%。来自草莓叶的SL6菌株抑菌效果最佳,抑菌半径达15mm,无菌发酵液对草莓灰霉病菌菌丝的抑制率为97.6%,具有作为生防菌的应用潜能。经形态、生理生化和16SrRNA等分析测定,并通过MEGA4方法构建其16SrDNA系统发育树,将SL6菌株鉴定为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)。     

SPF鸡粪菌移植对雏鸡肠道菌群和大肠杆菌抗药性的影响

兽用抗生素的广泛使用引起肠道细菌严重的抗药性和菌群生态紊乱,并可能导致抗药性人畜共患病原菌的传播,给公共卫生带来严峻挑战,因此通过粪菌移植从动物源头降低肠道菌群的抗药性势在必行。本试验首先通过16S rDNA高通量测序技术比较粪菌移植供体SPF蛋鸡及普通商品肉鸡的粪便菌群,然后经泄殖腔滴注方式接种1日龄SPF雏鸡,于7日龄和35日龄测定移植后受体粪便菌群的微生物组,用琼脂稀释法测定移植前后肠道指示菌株大肠杆菌的抗药性水平。结果表明,商品肉鸡粪便菌群拥有更高的多样性,而SPF蛋鸡粪便菌群组成更为均一。除了共同拥有较多的厚壁菌门细菌,商品肉鸡还含有较多的拟杆菌门细菌而SPF蛋鸡则含有较多的变形菌门细菌。在属水平上,商品肉鸡的优势菌属是粪栖杆菌属、拟杆菌属和别样杆菌属,而SPF蛋鸡的优势菌属为肠球菌属、埃希-志贺菌属以及克雷伯氏杆菌属。药敏试验结果表明,SPF蛋鸡拥有对抗生素极为敏感的菌群,商品肉鸡拥有较高的抗生素抗药性菌群。将两组粪便菌群移植给新生雏鸡后,抗药性水平得到传递。该结果说明通过SPF鸡粪菌移植雏鸡,能安全地从源头降低肠道菌群抗药性,抵抗家禽养殖环境中高抗药性病原菌的侵害,为遏制动物源细菌抗药性提供一种新的解决方法。     

灰斑古毒蛾核型多角体病毒结构多肽及核酸的研究

多角体蛋白结构多肽分析结果表明，ＯｅＮＰＶ多角体中可能有碱性蛋白酶存在；纯化病毒粒子ＳＤＳ－ＰＡＧＥ胶板用考马斯亮蓝和银染法分别检出１８和２２种多肽，分子量范围１．０８×１０４～１２．２×１０４Ｄ，其中５种主要多肽；核衣壳检出５条多肽，主要多肽分子量为３１０００±６５０Ｄ；ＰＡＳ法未检出ＯｅＮ－ＰＶ各结构多肽中有糖蛋白存在；ＯｅＮＰＶ－ＤＮＡ经ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨＩ单酶解分别产生９、１２、１０个片段，经ＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄⅢ双酶解产生２０个片段，求得ＯｅＮＰＶ－ＤＮＡ的平均分子量为６５．８×１０６Ｄ，ＯｅＮ－ＰＶ－ＤＮＡ大多呈缠绕卷曲线形分子，少数为环状分子，平均长度１９．７μｍ。