进境苹果中3种检疫性真菌三重PCR同步检测方法的建立

苹果壳色单隔孢溃疡病菌(Botryosphaeria stevensii)、美澳型核果褐腐病菌(Monilinia fructicola)和丁香疫霉病菌(Phytophthora syringae)是为害多种水果和其他植物的重要检疫性真菌,均能侵染苹果果实导致烂果,并造成严重的经济损失。本研究设计和筛选了3对特异性引物,建立了同步检测3种检疫性真菌的普通PCR和三重PCR方法。设计的引物Bs-368 F/R、M.cola 986F/R和Psy1/Psy2能分别特异性地扩增出B.stevensii、M.fructicola和P.syringae所有供试菌株的DNA,而对相应多个近似种的DNA则无扩增。灵敏度试验结果表明,上述3对引物分别检测B.stevensii、M.fructicola和P.syringae DNA的灵敏度是41.7 pg、47.4 pg和0.375 pg,三重PCR同时检测到3种病菌DNA的灵敏度是4.44 ng。该方法可以满足对进境苹果果实携带的苹果壳色单隔孢溃疡病菌、美澳型核果褐腐病菌和丁香疫霉病菌的快速初筛,加速进境新鲜水果的快检快放。     

进境玫瑰鲜切花李属坏死环斑病毒的检测鉴定

近期上海口岸连续多次从进境的玫瑰鲜切花中检出我国检疫性有害生物李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV),通过DAS-ELISA、RT-PCR、SYBR Green I实时荧光RT-PCR和序列分析等4种方法分别检测和复验该病毒,结果均为阳性,由此确定从进境玫瑰鲜切花中检出了PNRSV。同时本文分别检测玫瑰叶片、花瓣、茎干和花萼,结果均带有PNRSV,确定该病毒系统侵染玫瑰。     

玉米褪绿斑驳病毒3种PCR检测方法的建立与比较

 以带有玉米褪绿斑驳病毒(MCMV)的玉米叶片为材料,研究建立了MCMV 的普通RT-PCR、TaqMan 实时荧光RT-PCR 和SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR 检测方法,并比较了3种方法的灵敏度。结果表明:TaqMan 实时荧光RT-PCR 的检测灵敏度最高,最低检出量可达1.61 fg,SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR 略逊之,普通RT-PCR 的检测灵敏度则相对较低,与前两者相差10~100倍。     

进境动物隔离场无害化处理设施的研制与验证

为满足病畜尸体无害化处理的要求,考虑到进境动物隔离场处理病畜数量少、批次多、除害效果和环保要求高等因素,围绕尸体粉碎、处理压力、处理温度、处理时间、废气处理等技术要素,试制了一款新型的病畜尸体废弃物无害化处理系统设备。该设施中心温度≥140℃、压力≥0.4 MPa、低温真空干燥3~4 h、整个流程5 h左右,并对设计参数、除害效果进行了全面验证。结果表明:该套设施可对病畜尸体及废弃物进行破碎、化制和真空干燥等综合处理,具有除害彻底、操作自动、时间短、环保等优势,适用于动物隔离场饲养场对病畜尸体及废弃物的无害化处理。     

进境柠檬样品上柑桔溃疡病菌的检测

从进境柠檬样品上分离到一株疑似柑桔溃疡病菌的分离物X206,对分离物进行了菌落形态学特征观察、16S r RNA序列测定、PCR检测、Biolog测定及致病性测试。试验结果表明分离物X206在NA培养基上形成黄色,有光泽,圆形,全缘,微隆起,粘稠状的菌落。特异引物Xac01/Xac02扩增分离物X206的DNA得到582bp的预期产物,产物序列与柑桔溃疡病菌序列的相似性为100%。其16S r RNA序列与柑桔溃疡病菌的序列完全一致。Biolog测定将分离物X206和柑桔溃疡病菌阳性菌株FZ01均鉴定为Xanthomonas campestris pv.dieffenbachiae。致病性测试显示分离物X206能导致柑桔叶片产生明显的溃疡病斑。根据试验结果将分离物X206鉴定为柑桔溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri)。     

二溴海因复合消毒剂的研制与机理研究

[目的]研究二溴海因复合消毒剂(主要成分为二溴海因(DBDMH)和邻苯二甲醛(OPA))的消毒性能及杀菌机理,开发适合口岸使用的广谱高效消毒剂。[方法 ]用悬液定量杀菌实验,评估二溴海因复合消毒剂的杀菌效果;利用傅里叶红外光谱法和流式细胞法,研究消毒剂的杀菌机理。[结果 ]复合消毒剂对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌的作用浓度(杀灭对数值大于5)分别为:100 mg/L DBDMH+50 mg/L OPA、60 mg/L DBDMH+210 mg/L OPA、200 mg/L DBDMH+50 mg/L OPA。复合消毒剂能引起大肠杆菌外部形态变化,导致生物大分子上的羰基、亚氨基、磷酸二酯键和糖苷键不同程度断裂,使得ATP含量迅速下降,膜电位变化。[结论 ]复合消毒剂对细菌的杀灭效果较好。     

上海进境动物隔离场安全防疫HACCP体系建设

为加强隔离场管理,应对各种可能存在的安全隐患,保证动物健康安全,依据国家进境动物隔离场工作流程,在隔离场引进HACCP体系部分内容,并确定了六个关键控制点,明确了监控对象,在此基础上提出了建设项目安全防疫综合体系框架。     

大豆黄化普通花叶病毒的检测及鉴定

随着国际邮寄业务的迅速发展,外来有害生物随邮寄物入侵我国的风险与日剧增。2012年在韩国旅客携带的大豆种子中首次检出南方菜豆花叶病毒属新种大豆黄化普通花叶病毒(Soybean yellow common mosaic virus,SYCMV)后,近日在隔离种植的日本邮寄大豆种子中,通过多种方法再次检出该病毒。本文将详细分析DAS-ELISA,RT-PCR及序列测定分析的过程,以期为种子病毒的检测提供新的思路。     

进境苹果果实中苹果牛眼果腐病菌的检疫鉴定

对来自美国的苹果进行了病原菌分离,结果在果实中分离到1株疑似苹果牛眼果腐病菌的菌株Nk-2968。对其进行了病原菌形态学观察、致病性测定并结合分子生物学方法检测,实验结果表明,菌株Nk-2968在PDA培养基上生长良好,能产生大量的分生孢子;经真菌通用引物(ITS4/ITS5)及β-tubulin引物(Bt-T2m-Up/Bt-LVL-Lo)分别扩增和测序,菌株Nk-2968与Gen Bank中登录号AF281462.1、HG793110.1和HG793112.1的菌株序列同源性达到100%;病菌接种苹果8 d后开始发病。根据上述实验结果,将分离获得的菌株Nk-2968鉴定为苹果牛眼果腐病菌(Neofabraea kienholzii)。这是我国口岸首次在进境的苹果果实上截获该危险性有害生物。