核盘菌γ-谷氨酰磷酸还原酶基因SsGPR1的功能分析

【目的】γ-谷氨酰磷酸还原酶是真菌脯氨酸合成途径中的一个关键性酶,本研究旨在对核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)γ-谷氨酰磷酸还原酶编码基因SsGPR1进行沉默,并对沉默转化子菌丝生长、菌核形成和致病力等表型进行研究,为揭示核盘菌的生长发育与致病机理打下基础,并为作物菌核病的绿色防控提供线索。【方法】通过BLAST进行蛋白同源比对分析,并利用MEGA 5.0软件构建蛋白进化树。通过实时荧光RT-PCR检测SsGPR1在核盘菌菌丝生长、菌核发育和萌发的各个阶段以及致病不同时期的表达模式。根据RNA干扰原理构建SsGPR1的沉默载体,通过PEG介导原生质体转化的方法将沉默载体转入到野生型核盘菌菌株1980中。利用实时荧光RT-PCR鉴定基因沉默转化子,对沉默转化子的菌丝形态、生长速度和菌核形成等表型进行观察,并测定沉默转化子在氧化胁迫条件下的菌丝生长。将沉默转化子分别接种至活体油菜叶片和拟南芥植株,观察并测量病斑大小。通过酸性茚三酮法对沉默转化子中的游离脯氨酸进行测定。【结果】核盘菌SsGPR1全长1 454 bp,编码449个氨基酸,在氨基酸H~(10)-N~(426)处含有谷氨酰磷酸还原酶结构域。同源比对发现SsGPR1蛋白与灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的BC1G_13183蛋白和白霉病菌(Sclerotinia borealis)的SBOR_2215蛋白相似性最高,氨基酸序列一致性分别达95%和94%,系统进化树结果表明三者聚为一个小的分支。SsGPR1在核盘菌菌丝生长时期的表达量较高,在菌核不同发育阶段表达量相近,但均低于菌丝生长时期。SsGPR1在致病时期表达量不断升高,在接种后9 h表达量最高。将SsGPR1基因沉默载体pSIGPR1导入到核盘菌野生型菌株中,并通过实时荧光RT-PCR检测不同转化子中SsGPR1的表达水平,结果表明SiGPR1-104和SiGPR1-149为SsGPR1基因沉默转化子。沉默转化子在PDA培养基上形成的菌核数量及均重与野生型菌株无显著性差异,且菌核均能萌发形成子囊盘,但菌丝生长稠密,生长速度显著下降。在含有H_2O_2的培养基中,SsGPR1基因沉默转化子菌丝生长受到更强的抑制,表明沉默转化子对氧化胁迫更加敏感。SsGPR1基因沉默转化子在活体油菜叶片和拟南芥植株上能引起发病,但病斑面积减小,表明沉默转化子致病力减弱。SsGPR1基因沉默转化子菌丝中的游离脯氨酸含量与野生型菌株相比无显著差异。【结论】SsGPR1与核盘菌的生长和菌丝形态相关,且参与核盘菌对氧化胁迫的抵御及致病过程。     

莲藕常见害虫的为害特点及综合防治措施

基于中国莲藕害虫发生情况,介绍了莲缢管蚜、斜纹夜蛾、莲潜叶摇蚊、食根金花虫等7种主要害虫的为害特点,并针对这些主要害虫总结了相应的综防措施。     

三唑磷降解菌的分离鉴定及降解特性

[目的]筛选高效降解三唑磷的降解菌,为三唑磷残留的微生物修复提供降解菌资源.[方法]采用富集培养、划线分离筛选降解菌;根据形态学、生理生化结合16S rDNA基因序列分析,鉴定降解菌;液—液萃取结合气相色谱法(LLE-GC)测定三唑磷残留量.[结果]筛选出一株三唑磷降解菌TDB-2.通过形态特征、生理生化特征及16SrDNA基因序列鉴定,确定TDB-2属巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium);该菌株能以三唑磷为唯一碳源,生长最佳条件为pH 7.0和35 c;在最佳生长条件下培养9h对50 mg/L三唑磷的降解效率为69.71％.[结论]菌株TDB-2能高效降解三唑磷农药,具有开发成环境兼容性好的三唑磷降解菌剂的潜力.     

啶氧菌酯降解菌的分离鉴定及其降解特性

通过富集培养法筛选分离到1株能以啶氧菌酯为唯一碳源的降解菌株PID-1,采用形态学、生理生化方法,并结合16S rDNA序列系统发育分析,将菌株PID-1初步鉴定为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)。菌株PID-1降解啶氧菌酯的最佳条件为pH 7和35 ℃。在该降解条件下,培养5 d,菌株PID-1对100 mg·L^-1啶氧菌酯的降解率可达83.54%。将啶氧菌酯经PID-1降解后的物质经质谱扫描,通过谱库检索,发现其降解中间产物包括1-(1,5-dimethylhexyl-)-4-methyl-benzene、2,5-bis (1,1-dimethylethyl)-phenol、butyl 2-methyoxyethyl ester、bis (tert-butyldimethylsilyl) ester、1-(3-n-propoxyphenyl)-2-propanone oxime和2-nitro-4-(trifluoromethyl) phenol。     

核盘菌几丁质酶基因家族分析与表达特性研究

核盘菌菌核以子实体形式萌发是作物菌核病病害循环中关键性的一环,研究菌核子实体萌发分子机理将为菌核病的安全控制提供线索.该研究通过生物信息学方法对核盘菌几丁质酶基因家族进行分析,并利用实时荧光RT-PCR对其在菌核子实体萌发阶段的表达进行探讨.生物信息学分析表明核盘菌中共有12个基因编码假定的几丁质酶,它们均具有GH18结构域,部分蛋白还具有几丁质结合结构域和纤维素结构域;除SS1G_11212外其余蛋白均为亲水性蛋白;亚细胞定位预测表明其中10个假定几丁质酶位于胞外,其余2个分别位于细胞核和细胞质中.通过构建系统发育树分析发现假定几丁质酶可以分为2大类,其中3个与酵母几丁质酶CTS1归为一类,其余9个与CTS2归为另一类.除SS1G_00773外,其余11个几丁质酶基因在核盘菌菌核子实体萌发过程中表达量均有变化,推测几丁质酶家族蛋白可能参与核盘菌菌核子实体萌发过程.     

辣椒胶孢炭疽菌遗传转化体系的建立

由辣椒胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides导致的辣椒炭疽病是辣椒生产上最为严重的真菌病害之一。本文以辣椒胶孢炭疽菌CSLL11为供试菌株,采用PEG-CaCl_2介导的原生质体转化法,将含有潮霉素B抗性基因和eGFP表达基因的DNA片段成功转入辣椒胶孢炭疽菌的原生质体中,获得了稳定表达绿色荧光的转化子,从而成功建立了辣椒胶孢炭疽菌的遗传转化体系。试验结果表明,可有效筛选阳性转化子的潮霉素B浓度为500 mg/L;PCR及Southern blot结果显示,eGFP表达基因已单拷贝整合至辣椒胶孢炭疽菌转化子的基因组中;使用荧光显微镜观察第一代及继代培养后的转化子,菌丝与分生孢子均表现出强烈的绿色荧光信号,说明GFP能在转化子中稳定遗传;将转化子与野生型菌株相比,菌落形态、生长速率及致病力水平无明显差异。本研究建立了辣椒胶孢炭疽菌遗传转化体系并获得了稳定表达绿色荧光蛋白的转化子,对辣椒炭疽菌与寄主互作的研究及病害防治具有重要意义。     

特殊群体大学生的体质健康状况及影响因素分析

自改革开放以来,我国越来越重视学生教育,教育事业飞速发展,尤其是近年来,国家大力支持教育改革,无论是资金支持还是人力支持,都达到了前所未有的水平,使得越来越多的学生进入高等学府学习深造,虽然升学率有显著的提高,但也促使不少伤、残、病等困难学生进入校园,在新时期做好特殊群体大学生体质健康的相关研究就显得尤为重要。文章运用文献资料法和逻辑分析法,对特殊群体体质健康存在问题的成因,以及学校特殊群体体育健康教育所面临的问题进行分析,进而得出结论并提出合理化建议。以期更好地开展特殊群体学生体育的全新教学,进一步为学校体育的发展提供相应的理论与实践依据。     

类枯草杆菌蛋白酶在植物和病原物互作中的研究进展

类枯草杆菌蛋白酶(subtilisin-like proteases,Subtilases)是一类在植物发育和信号级联中实现高度特异性功能的丝氨酸蛋白酶。相关研究表明,几种类枯草杆菌蛋白酶在病原物侵染后被特异性诱导并参与寄主细胞程序性死亡,同时能够在病原物识别和信号转导级联反应中发挥重要功能,但是对其参与植物-病原物互作的具体机理的了解仍然非常有限。本综述对已经成功解析功能的类枯草杆菌蛋白酶相关信息进行整合,概述了其分布、结构、功能等信息,重点突出了其在植物和病原物互作中的作用,旨在为深入理解植物对病原物的防御机制和作物抗病育种提供指导。     

关于种子基地建设的几点思考

１种子工作的重要性及基地建设的必要性种子是农业科技的载体，是不可替代的最基本最重要的生产资料，大力推广和普及农作物良种是实现农业生产高产、优质、高效的必由之路，是科技是第一生产力的充分体现。只有建立稳定的良繁基地，才能保证源源不断地为农业生产提供良种...     

新时期农田水利灌溉中存在的问题及解决对策

我国水资源分布极不均衡，尤其是在北方地区，雨水季节变化幅度很大，这对于区域农业种植工作非常不利。因此，为进一步消除气象条件因素对农业生产体系发展带来的不良影响，我国各地也在不断加快农业灌溉水利设施建设工作。近年，伴随着科学技术水平的不断发展，农田灌溉用水情况也得到一定改善，大量先进且更有效的灌溉措施进一步提高农作物的产量与质量，节水能力得到增强，水资源使用率得到提高。笔者针对新时期农田灌溉水利用率的提高策略，进行初步分析与探讨，希望借此可以对相关从业人员起到一定的借鉴作用。