猪圆环病毒3型Cap蛋白序列的生物信息学研究

猪圆环病毒3型(PCV3)是一种在世界范围内分布较广泛的新型猪病毒,其发病机制尚不清楚。为系统分析PCV3 Capsid(Cap)蛋白序列和结构特点,收集Gen Bank登录的来自不同国家和地区的210条PCV3全基因组和Cap蛋白基因序列,筛选获得46株PCV3代表序列;采用生物信息学(Bio Edit和MAGE 6.0等)技术分析PCV3 Cap序列同源性、结构特点、系统进化和热点突变位点情况。结果表明:46株PCV3 Cap序列同源性为97.66%～100%,PCV3 Cap预测的8个B细胞和10个T细胞表位中均存在序列突变,其中B细胞抗原表位E (109～146位氨基酸)和T细胞抗原表位D(72～81位氨基酸)存在的突变位点数最多。研究发现26株属于PCV3a,20株属于PCV3b。PCV3与PCV2 Cap序列比较分析发现,PCV3 Cap在NLS区域内有6处突变(R11K、R12K、H26M、R27K、V31A和R34K); PCV3 Cap序列间比对分析发现,PCV3b Cap序列出现突变的几率(17/20,85%)高于PCV3a (19/26,73%)。而从临床表现有繁殖障碍和死胎的样品中检测出的PCV3序列均存在S77T和I150L突变位点;从伴有发热、肺炎的仔猪以及肺匀浆样本检测出的PCV3序列中均有R10K突变位点,这些特定的突变位点与临床症状的关系需后续深入研究。本研究结果为PCV3基因功能、进化、预防和控制等研究提供重要序列信息。     

猪圆环病毒2型病毒样颗粒研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病的主要病原体,给养殖业造成重大经济损失。一直以来,对于PCV2的防控主要通过疫苗接种。目前使用的疫苗可大致分为全病毒灭活疫苗、嵌合病毒疫苗、重组亚单位疫苗三大类。病毒样颗粒(VLPs)作为一种伪病毒,以其高免疫原性、高安全性成为新型疫苗的研究热点。本文综述了VLPs在国内外的最新研究动态、研究和开发的意义,提出了VLPs作为一种基因转载工具,其研究为疫苗研发开拓了新的方向。     

非洲猪瘟的流行与防控

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种急性烈性传染病,猪只感染病毒后的发病率和死亡率可高达100%,对生猪养殖生产造成不可估量的损失。现阶段还没有有效的药物和疫苗来防控非洲猪瘟,对于养殖场来说,目前最有效的措施是做好生物安全防控。本文就非洲猪瘟的病原特性、流行病学及生物安全防控措施等方面进行阐述,加强养殖户对非洲猪瘟的了解,做好生物安全防控措施,为切断非洲猪瘟的传播扩散奠定基础。     

非洲猪瘟生物安全防控要点

目前,非洲猪瘟疫情在我国呈点状散发,并未出现区域性流行,说明疫情在我国整体可控。但防控非洲猪瘟仍将是一场严峻而持久的挑战。对广大养殖户来说,当前的首要工作就是做好生物安全,在防控非洲猪瘟疫情的同时也要做好其他疫情的防治。本文从完善猪群管理、严格养殖人员管理和规范猪场车辆通行管理等3方面展开对非洲猪瘟防控工作的论述,以期为养猪企业防控非洲猪瘟的部署工作提供参考。     

猪圆环病毒2型衣壳蛋白Loops结构及病毒样颗粒制备的研究进展

病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)是某种病毒的1种或几种结构蛋白在体外组装而成,由于VLPs不包含病毒基因组,在宿主细胞中不能自我复制,因此VLPs在亚单位疫苗应用中具有较高的生物安全性。自猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)在世界范围内流行以来,已经给全球养猪业带来巨大经济损失,因此PCV2的致病机理和疫苗研究具有重要现实意义。PCV2Cap蛋白(capsid protein)是病毒唯一的衣壳蛋白,也是主要的免疫原性蛋白,60个Cap蛋白亚基在体外能自行组装成PCV2VLPs,该VLPs因与天然病毒粒子形态相似并保留了病毒完整的构象表位,已经在PCV2组装和侵染机理研究、亚单位疫苗的研发及其相关性系统疾病(PCV2-systemic disease,PCV2-SD)的预防研究中得到广泛应用。本文主要对PCV2Cap蛋白的Loops结构及其VLPs的制备研究进展进行阐述,为PCV2侵染机理与亚单位疫苗的研发等提供参考。     

猪圆环病毒2a型和2b型Cap蛋白的原核表达及鉴定

为制备猪圆环病毒2a型（PCV2a）和2b型（PCV2b）Cap蛋白，用生物信息学软件优化PCV2a Cap基因和PCV2b Cap基因密码子、克隆至p ET28a载体中、转化BL21(DE3)、构建重组蛋白表达菌株，通过优化原核表达的温度、IPTG浓度等条件进行蛋白表达，采用SDS-PAGE和Western blot进行蛋白鉴定。结果显示：重组PCV2a-Cap蛋白和PCV2b-Cap蛋白的分子量约为30 k Da，在不同温度下都以包涵体形式存在，在37℃下以终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达的Cap蛋白表达量最高。试验成功制备了PCV2a-Cap蛋白和PCV2b-Cap蛋白，为制备PCV2二价疫苗及其诊断方法的研究提供了基础材料。