牛IgG轻链的分离纯化及其多克隆抗血清的制备

实验应用凝胶过滤和盐析等方法直接从牛初乳中分离纯化IgG,并应用化学方法断裂回收IgG轻链。分离纯化获得分子量约27.66 ku的IgG轻链蛋白溶液,蛋白质含量为0.105 mg.L-1,浓缩后免疫家兔,获得抗轻链抗血清,效价>11∶6,免疫双扩散和免疫电泳均为特异性条带,表明得到了纯化的IgG轻链及其特异性抗血清。     

猪圆环病毒病及其防治策略

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是一种无囊膜的单股环状DNA病毒,呈20面体对称,病毒粒子17～20 nm,是迄今已知最小的动物病毒之一,属于圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属成员,根据PCV的致病性、抗原性及核苷酸序列,将PCV分成两种基因型,即PCV1及PCV2.     

犬瘟热病毒小熊猫株(LP)的动物感染试验

将从死亡小熊猫肝脏病料中分离到ＣＤＶ ＬＰ株第９代ＭＤＣＫ细胞培养毒,按不同剂量各接种７只２～３月龄的健康幼犬,接种犬全部发病。于接种后７天时各捕杀２只犬进行检测,电镜检查、ＣＤＶ ＲＴ－ＰＣＲ、ＣＤＶ的分离及中和试验结果均为阳性,说明接种犬发生了ＣＤＶ感染。结合接种犬出现的临床症状及病理解剖学变化结果进行的分析表明,ＣＤＶ ＬＰ株是一株强毒,并且具有很强的免疫原性。人工感染犬试验结果表明某动物园     

牛病毒性腹泻病毒P20和P14基因的克隆及序列分析

参考GenBank中BVDV Oregon C24V株的基因组序列设计两对引物,利用套式PCR方法扩增P20基因,扩增出预期525 bp的目的片段.扩增产物克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序.测序结果与参考序列Oregon C24V比较,二者的核苷酸同源性仅为80.95%,推导氨基酸同源性为87.50%.测序结果经NCBI上的Blast(Http:/www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)同源性比较,克隆得到的基因与Osloss株同源性最高,核苷酸同源性为93.65%,推导氨基酸同源性为95.83%.根据P20的测序结果,参照GenBank中BVDV Osloss株设计一对引物,扩增P14基因,经同源性比较,扩增的P14基因与Osloss株核苷酸同源性为94.77%,推导氨基酸同源性为95.10%,通过系统发生分析,推测P20基因和P14基因与Osloss株在进化上比较接近.     

牛粘膜病病毒E1基因的克隆及原核表达

参考BVDVVEDEVAC株的基因组序列及E2基因的测序结果设计一对引物,扩增出预期585 bp的目的片段。扩增产物克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与参考序列VEDE-VAC株比较,二者的核苷酸同源性为100%,推导氨基酸同源性为100%。测序结果经同源性比较,克隆得到的基因与VEDEVAC株同源性最高。系统发生树分析推测E1基因与VEDEVAC株在进化上比较接近。将E1基因定向亚克隆到表达载体pGEX-6p-1中,对阳性重组质粒转化的大肠杆菌BL21进行诱导,E1基因获得了成功表达。     

牛病毒性腹泻诊断技术

牛病毒性腹泻/黏膜病（Bovine viral diarrhea-mucosal disease/mucosal disease,BVD/MD）,简称牛病毒性腹泻（BVD）或牛黏膜病（BMD）,是以牛发热、黏膜糜烂和溃疡、白细胞减少、腹泻、咳嗽及怀孕母牛流产或产出畸形胎儿为主要特征的一种传染病[1].病原是牛腹泻病毒（Bovine viral diarrhea-mucosal disease virus,BVDV）,属于黄病毒科（Flaviridae）瘟病毒属（Pestivirus）的成员.根据它在细胞培养物上的特性,BVDV分为两种生物型：一种为致细胞病变型（CP型）,能引起细胞形成空泡,核固缩、溶解和死亡等;另一种为非致细胞病变型（NCP型）,此型病毒在细胞中复制不引起细胞病变.两种生物型除了与宿主细胞作用不同外,血清型相同.1946年Olafson等首次报道病毒性腹泻病.1980年,李佑民首先证明我国也有本病存在.自20世纪80年代以来,我国已有15个省、市、自治区查出该病,感染动物包括牛、羊、猪、骆驼、鹿等.王新平等对内蒙古、吉林、宁夏等不同地区的牛、羊、鹿群进行了病原学调查,结果发现牛病毒性腹泻病毒的感染率分别为16.5%～89.0%、14.6%～83.3%、19.6%～44.4%,表明本病在国内某些地区存在严重感染。