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猪肌生成抑制素(MSTN)cDNA的克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
从猪的肌生成抑制素(MSTN)编码序列中设计引物,以军牧一号猪肌细胞总PNA为模板,利用RT-PCR和嵌套PCR技术,扩增出MSTN cDNA片段。该片段全长1277bp,包含猪MSTN基因的全部编码序列。将所得片段与pMD18-T载体连接,转化到JM109大肠杆菌中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒测序结果与文献报道的一致。经EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ酶解分析,cDNA片段与pMD18-T载本之间既有正向插入的克隆,也有反向插入的克隆,所得到的MSTN cDNA可用于原核和真核表达载体的构建。 相似文献
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选用健康家兔40只,取仰卧位保定,5%戊巴比妥钠溶液麻醉,对家兔胸部体层摄影技术进行了探讨。几何条件:使用直线轨迹时,曝光角度以20°为好;使用区域圆轨迹时,以12°为好。显示支气管的最佳层次()与胸厚(X)的回归方程(?)=0.739X-1.922。物理条件:kVP=胸厚(cm)+40+10(滤线器);mA及s:直线轨迹时100mA,0.3s;区域圆轨迹时20mA,2.8s。并对所拍摄的X线体层照片进行了分析,在显示胸部某一层面的结构上和对肺脏、支气管部位病变的诊断上,体层摄影有明显的优点,而麻醉对改善体层片的质量有一定作用。 相似文献
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从猪肌生成抑制素(MSTN)cDNA序列中设计引物。以pMD18-T-MSTN质粒为模板,PCR扩增猪MSTN成熟蛋白编码序列,该片段全长1095bp。将所得片段与pMD18-T载体连接,构建重组质粒pMT—mpMSTN,将其转化到大肠杆菌DH5a中,成功地筛选到阳性克隆。双酶切重组质粒pMT—mpMSTN和真核表达载体pcDNA3.1,连接目的片段与载体pcDNA3.1,转化大肠杆菌DH5a,经酶切、PCR及测序分析,表明成功地构建了真核表达质粒pcDNA3.1-mpMSTN。 相似文献
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猪生成抑制素(MSTN) cDNA的克隆 总被引:3,自引:1,他引:2
从猪的肌生成抑制素(MSTN)编码序列中设计引物,以军牧一号猪肌细胞总RNA为模板,利用RT-PCR和嵌套PCR技术,扩增出MSTNcDNA片段.该片段全长1277bp,包含猪MSTN基因的全部编码序列.将所得片段与pMD18-T载体连接,转化到JM109大肠杆菌中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒测序结果与文献报道的一致.经EcoRⅠ和PstⅠ酶解分析,cDNA片段与pMD18-T载体之间既有正向插入的克隆,也有反向插入的克隆,所得到的MSTNcDNA可用于原核和真核表达载体的构建. 相似文献
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猪肌生成抑制素基因的克隆和序列测定 总被引:18,自引:0,他引:18
根据文献报道的猪肌生成抑制素基因cDNA序列,分别从第1、第2和第3外显子中设计引物,以大约克猪染色体DNA为模板,分段扩增出含内含子和外显子的序列。将所得各序列回收、克隆到pGEM-easyT载体中,然后进行序列测定。合并所有测得的猪肌生成抑制素因序列,共获得6kb连续序列。分析结果表明,猪肌生成抑制素基因第1内含子长1809bp,第2外显子长374bp,第2内含子长1978bp。所测得的外显子序列与已发表的cDNA序列同源分析比较,没有出现引起氨基酸改变的突变。表明瘦肉型猪(大约克猪)肌生成抑制素基因仍很完整,可通过改变基因结构等降低肌生成抑制素活性的方法提高瘦肉率。 相似文献
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