高邮麻鸭白细胞介素-2基因的克隆与序列分析

[目的]对高邮麻鸭白细胞介素-2（CIL-2）基因进行克隆和序列分析。[方法]以高邮麻鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,根据已发表的鸭IL-2基因cDNA序列设计并合成1对引物,应用两步RT-PCR技术扩增出IL-2基因的特异性片段。将扩增片段插入pGEM-T-easy载体,并进行测序分析和结果验证。[结果]阳性克隆所含插入片段的DNA序列全长为433bp,与预期大小一致,含有1个423bp大小的开放性阅读框,共编码141个氨基酸的前体蛋白,N端21个氨基酸形成信号肽,成熟蛋白为120个氨基酸,分子量约为13.66kD,含1个糖基化位点。该序列与绿头鸭、绍兴鸭、固始鸭相应序列的同源性均为99.8%,与广州白鸭的同源性为99.3%,存在少量核苷酸差异。[结论]高邮麻鸭IL-2编码区基因相对高度保守,为其用于临床疾病治疗提供了一定参考。     

巨型艾美球虫配子体gam82基因的克隆表达与免疫原性分析

提取巨型艾美球虫(Eimeria maxima)南通株(NT株)配子体总RNA,应用RT-PCR技术对gam82基因进行克隆,并对其核苷酸及氨基酸进行序列分析.结果表明,克隆的基因全长为1 791个核苷酸,具有一个完整的开放阅读框,编码596个氨基酸,与GenBank中发表的Houghton株gam82基因同源性为100%.根据对推导的氨基酸序列的二级结构和抗原表位分析的结果,筛选免疫原性良好的区域,命名为gam82-Y,进行原核表达.重组菌经过IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,gam82-Y基因片段在大肠杆菌中得到了融合表达,相对分子质量约为53 000.可溶性分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在.以 E.maxima高免血清为一抗进行Western-blot检测,显示重组抗原gam82-Y具有免疫原性.     

辣蓼黄酮乙酸乙酯部分对PRV体外诱导RAW264.7细胞分泌炎性因子的影响

探讨辣蓼黄酮乙酸乙酯部分（ethyl acetate of flavonoids from Polygonum hydropiper L.,FEA）对猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）体外诱导RAW264.7细胞分泌炎性因子的影响。正式试验前将不同浓度的FEA作用于RAW264.7细胞,通过CCK-8检测细胞体外增殖活性,筛选FEA对RAW264.7细胞的安全浓度范围。正式试验分为空白对照组、PRV阳性对照组、芦丁对照组、5个FEA药物组,除空白对照组外,其余各组细胞加入PRV共孵育1.5 h后,再加入芦丁或不同浓度的FEA,分别培养4、8、12、24 h,CCK-8法检测FEA对病毒感染的RAW264.7细胞活性,筛选出3个FEA药物组（高、中、低剂量FEA）,再通过ELISA法检测各时间点细胞培养液上清中炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、MCP-1和IFN-γ的分泌水平,以确定FEA体外调节炎症反应的最适时间及药物浓度。结果显示：①FEA对RAW264.7细胞的安全浓度为12.5~200 μg/mL;②25~100 μg/mL FEA能显著提高PRV感染的RAW264.7细胞体外增殖活性;③PRV感染RAW264.7细胞后促进细胞炎症因子的分泌,用FEA处理8~12 h后,在一定程度上降低了TNF-α、IL-1β、IL-6和MCP-1的分泌水平（P<0.05）,升高了IFN-γ分泌水平（P<0.05）,调节了IL-10分泌水平,且FEA处理8 h抗炎效果最好。结果表明,FEA能调节病毒感染细胞分泌炎性因子的水平,提示其具有体外抗炎作用。该结果可为进一步研究FEA抗病毒分子机制提供参考依据。     

农业职业院校中高职衔接人才培养的研究与实践 ——以广西农业职业技术学院为例

广西农业职业技术学院与中职学校共同合作开展"2+3"中高职衔接的人才培养模式,发挥广西农业职业教育集团的作用,从中职学生学习的实际出发,校企共同制定高职阶段人才培养方案,开展冠名班、骨干班、场长班、志向班、现代学制班等校企联合培养班级,构建考核评价体系,组织教学环节,监控教学过程,制定教学管理制度等方面抓好衔接,确保"2+3"中高职衔接人才培养质量。     

日粮中添加植物精油对肉鸡生长性能、免疫功能和肠道形态结构的影响

为研究日粮中添加植物精油对白羽肉鸡生长性能、免疫功能和肠道形态结构的影响，试验将240只1日龄体重接近的健康白羽肉鸡随机分为4组，每组6个重复，每个重复10只鸡。4个处理组分别饲喂基础日粮（对照组），基础日粮+400 mg/kg（试验Ⅰ组）、600 mg/kg（试验Ⅱ组）和800 mg/kg（试验Ⅲ组）的植物精油（主要成分为茶树精油、肉桂醛和香芹酚），试验为期42 d。研究表明：（1）42日龄时，对照组与试验Ⅰ～Ⅲ组的初始体重、终末体重、平均日增重和料重比均差异不显著（P> 0.05）；试验Ⅲ组的平均日采食量显著高于对照组和Ⅰ组（P <0.05）；试验Ⅱ组的末重均高于其他各组，料重比低于其他各组，但差异不显著（P> 0.05）。（2）21日龄时，试验Ⅱ组的脾脏指数显著高于其他各组（P <0.05）；与对照组相比，Ⅱ组的胸腺指数和法氏囊指数各提高了12.6%和19.3%;42日龄时，整个试验阶段，与对照组相比，添加植物精油对脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数均无显著影响（P> 0.05）。（3）42日龄时，与对照组相比，试验Ⅱ组空肠的绒毛高度提高30.1%(P ...     

仔猪副伤寒的诊断与治疗

<正>仔猪副伤寒又称沙门菌病(swine salmonellosis),主要是由猪霍乱沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等引起的一种仔猪的高热传染病[1-2]。该病一般呈散发性,因饲养管理不当,机体抵抗力下降时会出现地方流行性,特别是长途运输后易造成暴发。沙门菌对环境的抵抗力较强,但对化学消毒剂的抵抗力较弱,一般的化学消毒剂就能将其杀死。该病常与猪瘟混合感染,有时也可单独感染。近年流行的猪霍乱沙     

日本大耳白兔干扰素-γ基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

提取经ConA 刺激后的日本大耳白兔外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR技术对其IFN-γ基因进行扩增和测序。将去除信号肽的IFN-γ基因片段插入原核表达载体pET-30a并在大肠杆菌中进行表达。结果显示,克隆的IFN-γ基因长为504个核苷酸,具有一个完整的开放阅读框,编码168个氨基酸,所测序列与GenBank中已登录的安哥拉兔、中国白兔、欧洲兔、新西兰兔IFN-γ同源性为100%,与獭兔同源性高达99.8%。构建的重组菌经过IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳证实,IFN-γ基因片段在大肠杆菌中得到了融合表达,分子质量约为18 ku,表达量为菌体总蛋白的35%左右。以上结果为下一阶段兔IFN-γ重组蛋白生物学特性及其应用的研究奠定了基础。     

猪伪狂犬病毒体外诱导RAW264.7细胞炎症反应模型的建立

【目的】探讨猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）感染对小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）炎症反应的影响,确定PRV的最佳感染剂量和感染时间,为建立RAW264.7细胞体外病毒感染炎症反应模型打下基础。【方法】PRV按10倍递增稀释成10-5~10-1 PRV稀释液,感染RAW264.7细胞并孵育1.5 h,弃病毒液后加入含5%胎牛血清的DMEM维持培养液继续培养,分别于继续培养2、4、8、12、24和48 h时收集细胞上清液,采用ELISA测定IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α、MCP-1和IFN-γ分泌水平及环氧合酶（COX-1和COX-2）活性,并以CCK-8法测定细胞活性。【结果】以PRV感染RAW264.7细胞4~48 h后均能通过PCR扩增获得PRV核酸的特异性条带,故选择4~48 h作为后续研究的PRV感染时间范围;10-2 PRV~10-1 PRV感染可显著降低RAW264.7细胞活性（P<0.05,下同）,10-3 PRV组仅在培养48 h时出现下降趋势,而10-5 PRV~10-4 PRV感染对RAW264.7细胞活性无显著影响。PRV感染RAW264.7细胞后,其胞内炎症因子IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-1β和MCP-1的分泌水平整体上呈升高趋势,其中10-3 PRV感染RAW264.7细胞12 h能显著或极显著（P<0.01）提高IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-1β和MCP-1的分泌水平;10-4 PRV~10-1 PRV感染组的IL-10分泌水平均呈升高趋势,而10-5 PRV感染组在感染8和24 h时IL-10分泌水平明显低于空白对照组,至感染48 h所有病毒感染组的IL-10分泌水平均降低;10-3 PRV~10-1 PRV感染8~24 h能有效提高RAW264.7细胞的COX-2活性,但对COX-1活性的影响不明显。【结论】PRV感染能诱导RAW264.7细胞发生炎症反应,其中10-3 PRV体外感染RAW264.7细胞8~12 h是建立RAW264.7细胞炎症反应模型的最佳条件。该模型可应用于PRV感染与RAW264.7细胞炎症反应相关干预药物的研究,为进一步揭示PRV感染机理及开发抗病毒感染药物提供理论依据。     

和缓艾美球虫与早熟艾美球虫的分离与鉴定

采用单卵囊分离技术,获得了2株纯种球虫,鉴定为和缓艾美球虫与早熟艾美球虫.主要鉴定指标:和缓艾美球虫:卵囊呈球形或亚球型,囊壁光滑无色,卵囊内有1极体,无内、外残余体;测100个卵囊的平均大小为(14.96±1.38μm×(13.65±1.20)μm,测100个孢予囊的平均大小为(9.23±1.20)μm×(5.29±0.53)μm;潜在期96 h,最短孢子化时间15.5 h;虫体主要寄生于小肠下段.早熟艾美球虫:卵囊呈椭圆形或卵圆形,有极体,无内、外残余体;测100个卵囊的平均大小为(19.21±2.10)μm×(16.40±1.75)μm,测100个孢子囊的平均大小为(10.62±0.90)μm×(6.85±0.75)μm;潜在期84 h,最短孢子化时间20 h;虫体主要寄生于鸡十二指肠与空肠前段.分别用此2株纯种球虫的孢子化卵囊20×10<'4>、60×10<'4>个感染30日龄黄羽肉鸡各10只,另设1个不感染对照组,结果感染2株纯种球虫的鸡均未发生死亡,但平均增重与不感染对照组差异显著(P<0.05),感染和缓艾美球虫的2组鸡肠道均出现可见病变,感染早熟艾美球虫的2组鸡肠道病变计分为零.     

案例分析教学方法在《动物疫病防治》课程教学中的应用研究与实践

为探讨案例教学法在《动物疫病防治》课程中的教学效果,我们在教学实践中进行了有益的尝试。案例教学法是很适合《动物疫病防治》课程教学,并取得了很好的教学效果。案例教学法可以提高教师的教学水平,能活跃课堂气氛,调动学生学习的积极性,有利于学生掌握知识技能、运用知识技能,拓宽学生的思维,提高学生的综合素质,培养学生的分析问题和解决问题的能力。案例教学法取得的教学效果明显优于传统教学方法。