东北虎γ-干扰素基因的克隆、生物信息学分析及其在毕赤酵母中的表达

本试验旨在通过克隆东北虎γ-干扰素(IFN-γ)基因,研究其分子特征并预测蛋白生物学功能,为后续研究干扰素抗病毒活性做前期准备。通过RT-PCR从ConA诱导过的东北虎血淋巴细胞中扩增东北虎IFN-γ基因并测序,应用生物信息学方法进行序列分析。结果表明:东北虎IFN-γ编码区由504个核苷酸组成,共编码167个氨基酸,蛋白相对分子质量为19.59 ku,等电点为9.03,所编码的蛋白为碱性亲水性蛋白,其中前23个氨基酸可能为信号肽,IFN-γ编码蛋白保守结构域为IFN-γ超家族,且存在跨膜结构,其中1-6位氨基酸为胞内区域,7-28位氨基酸为跨膜区域,29-167位氨基酸为胞外区域;IFN-γ编码蛋白二级结构主要以α-螺旋(58.08%)和无规则卷曲(33.53%)为主,存在5个潜在的B细胞抗原表位,3个潜在的N-糖基化位点;分子进化分析显示,东北虎IFN-γ与GenBank上发表的东北虎、非洲狮、金钱豹、美洲狮、猎豹、家猫、加拿大猞猁、野猪等的核苷酸相似性为80.4%~99.8%,氨基酸相似性为70.5%~100%,东北虎IFN-γ与非洲狮、金钱豹亲缘关系最近,美洲狮、猎豹、家猫、猞猁次之,野猪最远。通过合成改造后的东北虎IFN-γ基因,构建能表达IFN-γ蛋白的重组质粒pPIC9K-IFN-γ,将其导入高效表达系统-毕赤酵母中进行诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达蛋白的分子量约17.8 ku,与预期大小相符,表明东北虎IFN-γ成功表达。     

表达IBDV VP2免疫原的HVT重组体接种雏鸡对IBDV攻击的…

构建了表达了传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２的两种火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）重组体ｖＨＶＴ００１和ｖＨＶＴ００２。用其接种１日龄雏鸡以评价它们对ＩＢＤＶ５２／７０株和马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＲＢ１Ｂ株攻击的保护效果。在ＩＢＤＶ攻击中，ｖＨＶＴ００２免疫鸡能预防死亡和法氏囊肉眼病变，具有良好的保护力，以１０＾５ＰＦＵ免疫能达１００％、１０＾４ＰＦＵ免疫能达６０％保护，而用ｖＨＶＴ００１免疫只获得较低     

牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化

从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA，扩增了MPT83基因，并克隆入pMD-18-T Simple Vector，将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a（＋）中，转化BL21（DE3）宿主菌，IPTG诱导表达，用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序，构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen-Bank中的序列一致；构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHI＋HindⅢ双酶切鉴定构建正确；经SDS-PAGE分析，在约42ku处出现新的蛋白条带，4h后表达量即达到高峰；Westernblotting分析表明，融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别；纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳，出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。     

猪胸膜肺炎放线杆菌Apx毒素的研究进展

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的细菌性呼吸道传染病。Apx毒素(actinbacillus pleuropneumoniae toxin)是由胸膜肺炎放线杆菌分泌的一类溶血毒素,在胸膜肺炎放线杆菌致病过程中,Apx毒素起了重要的作用。     

仔猪大肠杆菌病病原分离鉴定及药敏试验

从广东某猪场严重腹泻的仔猪中采集12份仔猪黄痢、白痢粪便样品,共分离出6株大肠杆菌.药敏试验结果表明,所分离到的6株大肠杆菌对头孢噻肟、头孢拉啶、诺氟沙星等药物最敏感,可作为防治该猪场仔猪大肠杆菌病的首选药物.利用所分离菌株研制出灭活铝胶菌苗注射产前母猪,其后代仔猪的黄、白痢发病率大大降低.     

猪传染性胸膜肺炎的诊治

1 发病情况 2006年下半年广东某新建猪场先后从广东地区的3个种猪场引进种猪,进行过猪瘟、猪丹毒、猪肺疫、流行性乙型脑炎及传染性胃肠炎等疫苗的免疫接种.该场保育舍断奶后1周左右的小猪突然大批发病,个别育肥猪也有发病.发病猪临床上表现为精神萎顿,嗜睡,病猪呆立一旁,呼吸急促,呈腹式呼吸,有的呈犬坐姿式,体温升高(41 ℃),间隙性阵咳,严重者鼻腔流出血红色泡沫样液体.急性病例多数死亡,病程一般为2～5 d.