东北虎γ-干扰素基因的克隆、生物信息学分析及其在毕赤酵母中的表达

本试验旨在通过克隆东北虎γ-干扰素(IFN-γ)基因,研究其分子特征并预测蛋白生物学功能,为后续研究干扰素抗病毒活性做前期准备。通过RT-PCR从ConA诱导过的东北虎血淋巴细胞中扩增东北虎IFN-γ基因并测序,应用生物信息学方法进行序列分析。结果表明:东北虎IFN-γ编码区由504个核苷酸组成,共编码167个氨基酸,蛋白相对分子质量为19.59 ku,等电点为9.03,所编码的蛋白为碱性亲水性蛋白,其中前23个氨基酸可能为信号肽,IFN-γ编码蛋白保守结构域为IFN-γ超家族,且存在跨膜结构,其中1-6位氨基酸为胞内区域,7-28位氨基酸为跨膜区域,29-167位氨基酸为胞外区域;IFN-γ编码蛋白二级结构主要以α-螺旋(58.08%)和无规则卷曲(33.53%)为主,存在5个潜在的B细胞抗原表位,3个潜在的N-糖基化位点;分子进化分析显示,东北虎IFN-γ与GenBank上发表的东北虎、非洲狮、金钱豹、美洲狮、猎豹、家猫、加拿大猞猁、野猪等的核苷酸相似性为80.4%~99.8%,氨基酸相似性为70.5%~100%,东北虎IFN-γ与非洲狮、金钱豹亲缘关系最近,美洲狮、猎豹、家猫、猞猁次之,野猪最远。通过合成改造后的东北虎IFN-γ基因,构建能表达IFN-γ蛋白的重组质粒pPIC9K-IFN-γ,将其导入高效表达系统-毕赤酵母中进行诱导表达,经SDS-PAGE分析,表达蛋白的分子量约17.8 ku,与预期大小相符,表明东北虎IFN-γ成功表达。     

广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒和限制性片段长度多态性分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)属动脉炎病毒科动脉炎病属成员,包含7个开放阅读框(ORFs),目前有两个血清型,即欧州型和美州型,而美洲型毒株又可分为多个亚型.     

兽药的合理使用

科学、高效、安全地使用兽药,不但能及时预防和治疗动物疾病,提高养殖效益,而且对控制和减少药物残留、提高动物产品质量具有重要意义。     

胸膜莫肺炎放线杆菌APXIV部分基因片段的表达及纯化

参照GenBank中已发表的ApxIV基因序列,以自行分离的App DNA为模板,利用PCR方法扩增出ApxIV3'端,大小为552bp的保守基因序列.将PCR产物克隆到pMD18-T Simple Vector中,获得重组质粒pMD-ApxIV,对其重组质粒pMD-ApxIV进行BamHI、HindIII双酶切,并将酶切产物克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建了重组表达质粒pET-ApxIV.将表达质粒转化至大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明pET-ApxIV在BL21中成功表达,并能被App阳性血清所识别,具有良好的免疫原性.表达蛋白的分子质量约为39.5KDa.利用HiTrap FF crude columns将表达的蛋白进行了纯化.     

PCR技术及其在家畜病毒性疾病诊断中的应用

多聚酶链反应(PCR)技术是诞生于80年代的一项体外酶促扩增 DNA 新技术,具有特异性和敏感性高、操作简便、快速高效等特点,现已经广泛用于畜禽传染病和遗传病诊断、生物工程、法医鉴定等诸方面,本文仅就 PCR 技术发展近况及其在家畜病毒性疾病诊断与研究应用概况作一概述。     

《家畜传染病学》教学改革

《家畜传染病学》是兽医专业的一门重要专业课,也是预防兽医学的核心课程之一.它是研究家畜传染病发生和发展规律及如何预防、控制与消灭方法的科学.改革开放以来,我国畜禽业生产结构发生了革命性的变化,以集约化为主体的多种规模养殖成为当今的主体,另一方面,随着科学技术的突飞猛进,许多新的技术应用大大丰富了本学科的内涵.     

用套式PCR方法对几种猪用冻干疫苗的PCV2检测

参照Genbank已发表的猪圆环病毒2型的基因序列,取其比较保守的基因片段ORF2,利用引物设计软件Oli-go5.0设计两对PCV2型特异的引物,其中第一对引物扩增跨度为ORF2全基因片段,长度为702 bp,第二对引物扩增ORF2中间的一个小片段,跨度大小为494 bp.首先用第一对引物扩增阳性DNA,阳性DNA的浓度从10-1稀释到10-11,然后以第一次PCR产物为模板,用第二对引物进行PCR,发现这种套式PCR的方法比用普通PCR灵敏度提高102倍.同这种套式PCR方法对广东省市场上出售的几种猪用弱毒疫苗进行猪圆环病毒2型检测,结果发现这几种疫苗全部为阴性,本实验说明目前广东市场上出售的弱毒疫苗在制作过程中没有受到PCV2的污染,解除了广大猪场主的顾虑.     

猪胸膜肺炎放线杆菌与副猪嗜血杆菌分离鉴定和药敏试验

猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)为革兰氏阴性杆菌,迄今为止已知的有15个血清型;猪只感染APP后,主要表现为猪胸膜肺炎,急性暴发时,有很高的发病率和死亡率[1,2].一些病猪康复后常伴有慢性肺炎,导致生长停滞且长期带菌而成为其它猪只的传染源.副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HP)也是革兰氏阴性杆菌,至少有15个血清型,主要在断奶后和保育阶段发病,通常见于5～8周龄的猪,发病率一般在10%～15%,严重时死亡率可达50%[1,3].在临床上,由于APP和HP在形态上极其相似,各自血清型又多,难以区分,治疗过程中,药物的滥用造成了致病菌对大多数药物产生了耐药性.