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轮状病毒(RV)是导致全球婴幼儿严重腹泻的重要病原体。由于缺乏完全基于质粒的反向遗传学系统,阻碍了对RV复制和发病机制的深入研究。经过多年来对轮状病毒反向遗传系统的开发,2018年终于成功研发了完全基于11个RV质粒的反向遗传系统,该技术不需要辅助病毒和辅助质粒的参与,不需要复杂的筛选过程,且重组病毒的拯救效率高。这项技术的成功研发,将加速RV基础生物学的研究,可应用于RV新型疫苗的设计、筛选RV抗病毒制剂,促进其他病毒反向遗传系统的研发。本文就轮状病毒反向遗传学系统的研究进展及应用作以简要综述。 相似文献
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新城疫病毒Ⅰ系毒株通过Caspase途径诱导鸡胚成纤维细胞凋亡 总被引:1,自引:1,他引:1
应用不同Caspases抑制剂研究了新城疲病毒(NDV)Ⅰ系毒株诱导鸡胚成纤维细胞(CEF)凋亡的途径。结果,用20μmol/L的Z—VAD.fmk、Z—IETD.fmk和Z—LEHD.fmk分别处理CEF后,均能抑制NDVⅠ系毒株诱导的CEF凋亡;而用20μmol/L的Z—DEVD.fmk和Z—AEVD.fmk分别处理CEF,则不能抑制NDVⅠ系毒株诱导的CEF凋亡。由此表明,NDVⅠ系毒株能通过Caspase依赖性途径诱导CEF凋亡,其中Caspase-8和Caspase-9在凋亡中发挥重要作用,而Caspase-3和Caspase-10在凋亡中不发挥作用。 相似文献
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【目的】从野生蝙蝠体内分离病毒,为开展蝙蝠的病原监测奠定基础。【方法】从广东省韶关采集了30份野生犬蝠样品,研磨后接种Vero E6细胞,从中分离到2株病毒,对其中一株病毒进行研究,使用生物学与分子生物学方法确定其分类学地位。【结果】该毒株在Vero E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变,表现为细胞内颗粒增多,细胞收缩、变圆,最后细胞从瓶壁脱落。反复冻融3次后,收集细胞及培养液,电镜观察发现,病毒粒子无囊膜,有双层衣壳,呈正二十面体对称,将病毒命名为Bat/China/2003(B/03)。红细胞凝集试验表明该病毒能凝集健康人O型血红细胞,不能凝集SPF鸡、实验用普通级牛、大鼠和豚鼠的红细胞。理化特性试验表明该病毒对氯仿有抵抗力、能耐受pH3.0的酸性环境、50℃水浴1 h病毒丧失感染能力、1 mol•L-1 MgCl2能提高病毒对热的抵抗力。病毒基因组经琼脂糖凝胶电泳分大、中、小3个区段。用哺乳动物呼肠病毒特异性引物进行反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增得到了预期大小的片段。测序结果经NCBI BLAST分析表明,与呼肠病毒科正呼肠病毒属的Ndelle virus核苷酸同源性最高为91.2%。用DNAMAN Multiple Alignment进行序列同源性分析,与哺乳动物呼肠病毒血清1、2、3型的代表株T1L,T2J,T3D的核苷酸同源性分别为89.9%、76.9%、89.9%。【结论】由以上结果推断该病毒为呼肠病毒科的成员。 相似文献
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牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)为α疱疹病毒亚科成员,是引起牛多种疾病的重要病原之一。BHV-1面对牛免疫系统的不断进化,产生出多种机制以逃逸宿主的免疫防御,其主要包括诱导外周血单个核细胞凋亡、感染淋巴细胞和抑制淋巴细胞反应、抑制干扰素-β表达和建立潜伏感染等多种免疫逃逸机制。BHV-1的免疫逃逸给治疗和预防BHV-1所导致的相关疾病造成了极大的困难。尤其以潜伏感染最为严重,它能使患病动物终身带毒并能实现病毒的再激活。故主要阐述BHV-1的上述免疫逃逸机制,以期对相关疾病的防制和疫苗创制提供一定的帮助。 相似文献
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大肠杆菌主要寄居于人和动物的肠道内,在自然界分布广泛,属于条件致病菌.大肠杆菌能通过消化道使人类和畜禽发生感染和中毒.对大肠杆菌病的防治和流行病学调查都依赖于对病原的及时准确的检测和鉴定.本文对大肠杆菌病各种实验室病原检测方法,包括细菌的分离培养、荧光免疫测定技术、免疫胶体金标记技术、免疫磁珠分离法、多重PCR、荧光定量PCR等方法作以概要性综述. 相似文献
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为了对大庆地区患有腹泻疾病的舍饲牛进行病原鉴定,通过RT-PCR方法对病料进行检测,将轮状病毒阳性样品接种MA104细胞进行病毒分离,扩增分离株VP7、VP4片段,将扩增产物纯化后连接在pMD18-T载体上,转化到大肠杆菌TOP10感受态细胞中进行亚克隆,将鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定,并利用DNA Star与GenBank上的参考序列进行同源性分析。结果表明,从样品中分离到1株BRV毒株,将其命名NX23。核苷酸序列分析表明,分离株NX23属于G8P[1]型轮状病毒,确认了G8P[1]型牛轮状病毒在我国的流行,为我国BRV分子进化及其RV分子流行病学的进一步研究奠定基础。 相似文献
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轮状病毒(Rotavirus,RV)是全世界范围内引发多种幼龄动物及婴幼儿病毒性腹泻的最主要病原之一,给畜牧业发展和人类健康造成严重危害。通过RT-PCR对来自宁夏犊牛腹泻粪样进行检测,选取阳性样品经MA104细胞进行病毒分离。细胞盲传4代后出现CPE,至7代后细胞CPE现象明显,获得1株牛轮状病毒,扩增VP7、VP4基因并测序分析,结果表明该分离株属于G6P[5]型轮状病毒,命名为NX28。研究明确了G6P[5]型在国内牛群中的存在及流行,并为下一步的牛轮状病毒的分子流行病学研究奠定基础。 相似文献
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猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端主要抗原表位区的原核表达 总被引:1,自引:0,他引:1
利用分子生物学软件分析GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列,确定了其C端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了一对特异性引物,RT-PCR扩增该区域,并将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,命名为pET30a-ORF2C,然后转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。结果表明,RT-PCR扩增得到301 bp的片段,重组蛋白大小约为18 ku,与预期大小相符。Western blot分析表明,该蛋白与阳性血清发生特异性反应,为进一步利用其建立诊断方法奠定了基础。 相似文献