以马铃薯为辅料的黄酒发酵条件优化

采用响应面方法对以马铃薯为辅料的黄酒发酵条件进行了优化。通过单因素试验、正交试验及中心组合试验优化得到以马铃薯为辅料酿造黄酒的最佳发酵条件为：酵母添加量0.114%(原料量的0.114%)、主发酵温度28℃、麦曲添加量14.0%(原料量的14.0%)、料水比1∶0.7、每100 g原料添加425μL糖化酶、发酵初始pH值4.0。在优化得到的发酵条件下酿造得到的以马铃薯为辅料的成品黄酒，其酒精度、酸度、色、香、味等各项理化指标和感官指标均符合国家黄酒标准GB/T 13662-2000，成品酒的感官品质得到了改善，且所含游离氨基酸含量为7063.4 mg/L，是普通黄酒游离氨基酸含量的1.2～2.5倍。     

弹性蛋白酶产生菌的筛选及其发酵条件的初步研究

从肉联厂和屠宰场附近的土壤和污水中采集到的近100个样品中,经富集培养分离到123株能产生弹性蛋白酶的菌株,反复初筛、复筛后,分离到一株产胞外弹性蛋白酶活较高且稳定的细菌,经初步鉴定属芽孢杆菌属(Bacillus sp. EL3).同时研究了其产酶最适条件, 产酶最适碳源为葡萄糖, 最适氮源为豆饼粉.并对碳源、氮源和生长因子进行了正交实验,研究发现碳源对产酶的影响最大,其次为氮源.当葡萄糖的用量为6%、豆饼粉为5%、玉米提取液为0.2%时,其具有较高的产酶水平.最适发酵初始pH为7.5 , 250 mL 最适摇瓶装液量为20 mL.在该发酵培养基中培养,35 h时达最高的产酶水平.同时还对离心后的粗酶液进行温度和pH试验, 发现该酶最适作用温度和pH分别为50 ℃和7.4, 该酶在40 ℃以下保温30 min酶活仍较高, 在60 ℃以上酶活全部丧失.在pH7.4～9.0的范围内比较稳定, 而在pH 7.0以下时, 酶活下降很快.金属离子Cu2+、Zn2+、Al3+能抑制弹性蛋白酶的活性,而Fe3+、Li2+能激活弹性蛋白酶活性,螯合剂EDTA则严重抑制弹性蛋白酶活性.     

缓冲体系对产弹性蛋白酶芽孢杆菌EL31410发酵的影响

摘要: 弹性蛋白酶是以降解弹性硬蛋白为特征的蛋白水解酶。培养芽孢杆菌(Bacillus sp.) EL31410产弹性蛋白酶的过程中，pH的波动对产酶有较大影响。菌体最适生长pH为6.0～7.0，最适产酶pH为6.4～6.6。采用单因素实验和二次通用旋转回归设计研究了缓冲体系对产弹性蛋白酶芽孢杆菌EL31410发酵的影响。优化结果显示：15 h后添加pH 6.4 KH2PO4-NaOH缓冲液，使其在培养基中浓度为0.02 mol/L时，对控制发酵液pH和提高菌体生长及酶活性的综合效果为最佳。验证实验证明该模型是较可靠的。     

枯草芽孢杆菌ZJF-1A5 β-葡聚糖酶基因的克隆、序列分析和表达

β-1,3-1,4-葡聚糖酶是重要的工业用酶,可有效减少大麦β-葡聚糖在啤酒酿造中所造成的麦汁过滤困难和啤酒的非生物性浑浊等负面影响.但内源β-葡聚糖酶在麦芽干燥和糖化过程中丧失了大部分活性.而微生物来源β-葡聚糖酶与麦芽内源酶有相同的底物专一性,且热稳定性优于麦芽内源酶.本研究对Bacillus subtilis mutant ZJF-1A5葡聚糖酶基因进行克隆、序列分析和表达,并对酶在细胞中的分布和酶的热学性质进行了研究.     

基因工程菌EGs2产β-葡聚糖酶条件优化及产酶特性

摘要：用乳清粉作为主要培养基组成，采用正交试验对重组菌EGs2的发酵条件进行了优化，并对粗酶液的酶学性质进行了研究。重组菌EGs2的最佳发酵条件为：摇床转速170 r•min-1，接种量1 ％，发酵培养基初始pH值6.0，种龄12 h。重组菌EGs2β－葡聚糖酶的表达与菌体生长呈正相关，发酵14h后，菌体生物量最高可达1.71 g•L -1，β－葡聚糖酶活力最高可达321.56 U•ml-1。所得粗酶液的最适反应温度和pH值分别为60 ℃和6.0，在70 ℃以下保温20 min后，残余酶活力均在80 %以上。在pH 5.0-9.0 放置48 h后仍能保持均90 %以上的残余酶活力。     

精氨酸代谢酶对传统黄酒发酵氨基甲酸乙酯产生的调控作用

通过不同处理方法分析传统黄酒在发酵过程中氨基甲酸乙酯产生的代谢规律以及精氨酸代谢酶对氨基甲酸乙酯产生的调控作用,其中对照组不加任何抑制剂,实验组分别加入0.001、0.01和0.2mol/L L-鸟氨酸盐酸盐及150和750U脲酶作为抑制剂.结果表明:L-鸟氨酸盐酸盐和脲酶抑制剂对氨基甲酸乙酯产生的抑制效果良好;尿素和瓜氨酸是氨基甲酸乙酯产生的主要前体物,在黄酒发酵中胞内鸟氨酸氨甲酰基转移酶活性对氨基甲酸乙酯的产生起着抑制作用,然而其具体的调控机制还有待进一步解析.     

枯草芽孢杆菌ZJF-1AS ββ-葡聚糖酶基因的克隆、序列分析和表达

β-1，3．1，4-葡聚糖酶是重要的工业用酶，可有效减少大麦β-葡聚糖在啤酒酿造中所造成的麦汁过滤困难和啤酒的非生物性浑浊等负面影响。但内源β-葡聚糖酶在麦芽干燥和糖化过程中丧失了大部分活性。而微生物来源β-葡聚糖酶与麦芽内源酶有相同的底物专一性，且热稳定性优于麦芽内源酶。本研究对Bacillus subtilis mutant ZJF-1A5葡聚糖酶基因进行克隆、序列分析和表达，并对酶在细胞中的分布和酶的热学性质进行了研究。     

用蜂毒溶血肽和表皮生长因子构建膜毒性免疫毒素的研究

表皮生长因子受体由于在许多种肿瘤细胞表面过度表达而成为特异杀伤肿瘤细胞的理想靶位。正电性抗菌肽有其独特的膜毒性细胞毒机制。本研究以小鼠表皮生长因子为导向部分，以蜂毒溶血肽为毒性部分，构建特异杀伤肿瘤细胞的膜毒性免疫毒素---“MEGFMEL”嵌合蛋白。该嵌合蛋白以大肠杆菌BL21为表达宿主，以pET30a为表达载体，采用低温诱导表达和无破胞程序的冻融法进行纯化，最终浓度为63.45μg/mL、纯度为68%。体外活性检测表明MEGFMEL”嵌合蛋白对表面过度表达EGFR的鳞状上皮癌A431细胞表现出显著杀伤力，其LD50值为52.6μg/mL。本研究结果显示以正电性抗菌肽为毒性部分构建针对表皮生长因子受体的新型膜毒性IT是可行的。     

复合酶法制备早籼米多孔淀粉的工艺条件

以早籼米淀粉为原料,探讨了复合酶法制备多孔淀粉的工艺条件。在适宜条件下用一定比例的α 淀粉酶与糖化酶复合酶水解早籼米淀粉,以形成多孔淀粉。主要考查了温度、ｐＨ值、时间、酶用量和复合酶比对多孔淀粉得率、吸水率和吸附色素能力的影响。研究表明,针对多孔淀粉的得率、吸水率和对胭脂红吸附量3个指标,其最佳工艺条件不一致,以吸水率最佳为标准,最佳制备条件为温度55℃,pH 4.0,时间16 h,α 淀粉酶与糖化酶体积比1∶3,酶活分别为14.00 KNU/g和90.00 AGU/g。在此条件下经两次验证,多孔淀粉的得率分别为41.07％和43.37％,吸水率分别为148.03％和15561％,对胭脂红的吸附量分别为9.37 mg/g和9.38 mg/g。     

用蜂毒溶血肽和表皮生长因子构建膜毒性免疫毒素

表皮生长因子受体由于在许多种肿瘤细胞表面过度表达而成为特异杀伤肿瘤细胞的理想靶位;正电性抗菌肽有独特的膜毒性细胞毒机制.研究以小鼠(Mus musculus)表皮生长因子(mouse epidermal growth factor,MEOF)为导向部分,以蜂毒溶血肽(melittin,Mel)为毒性部分,构建特异杀伤肿瘤细胞的膜毒性免疫毒素MEGFMEL嵌合蛋白.该嵌合蛋白以大肠杆菌(Eschedchia coil)BL21为表达宿主,以pET30a为表达载体,采用低温诱导表达和无破胞程序的冻融法进行纯化,最终浓度为63.45μg/Ml、纯度为68%.体外活性检测表明,MEGFMEL嵌合蛋白对表面过度表达EGFR的肝癌A431细胞表现出显著杀伤力,其LD50为52.6μg/Ml.结果显示以正电性抗菌肽为毒性部分构建针对表皮生长因子受体的新型膜毒性免疫毒素(im-munotoxin,IT)是可行的.