双黄连制剂药理作用及其在兽医临床中的应用分析

双黄连制剂是纯中药制剂,通过金银花、连翘、黄芩3味中药精制而成,其临床疗效主要为清热解毒、辛凉解表。目前,临床上应用的双黄连制剂主要有可溶性粉、口服液和注射液。进一步的研究双黄连制剂的药理作用,为实际兽医临床应用提供理论依据和起到参考作用。     

壳聚糖絮凝对双黄连口服液制剂中有效成分的影响

选用正交试验筛选壳聚糖絮凝澄清的最佳条件,以主要成分黄芩苷作为含量考察指标,研究了壳聚糖作为澄清剂对双黄连口服液中黄芩苷含量的影响,并与醇沉法进行了对比。结果显示,壳聚糖能使双黄连提取液得到良好的澄清效果,主要成分黄芩苷损失较小,优于醇沉法,表明壳聚糖能作为良好的澄清剂代替醇沉法处理双黄连口服液。     

两种薄层色谱法鉴别双黄连口服液中黄芩苷、绿原酸的探讨

双黄连口服液标准分别收载于《中国兽药典》2000年版[1]和2005年版[2]二部中,改版收载于2005年版二部,对【鉴别】项(1)方法进行了修订,其他检测项目相同。现按照2005年版二部收载双黄连口服液检测产品时,对【鉴别】项(1)方法有些见解,提出与大家探讨,通过反复试验,实验结果表明,按本方法在紫外光灯(254nm)下检视结果时,供试品色谱中无斑点,与对照品色谱相应位置上,未见斑点,致使无法判定结果,见图2。在紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色的荧光斑点,但Rf值小,分离度不高(见图4)。     

双黄连注射液对中性粒细胞磷酸二酯酶4B基因表达的影响

本试验以主要在中性粒细胞中表达的磷酸二酯酶4B基因为靶基因,研究双黄连注射液的抗炎机制.采用半定量RT-PCR法检测双黄连注射液在不同时间对磷酸二酯酶4B基因表达的影响.结果发现双黄连注射液与中性粒细胞共孵育1 h时对磷酸二酯酶4B基因表达无明显的影响,当孵育到3 h时即可极显著抑制磷酸二酯酶4B基因的表达(P＜0.01).本试验结果表明,双黄连注射液能在基因转录水平上抑制中性粒细胞内磷酸二酯酶4B基因的表达,提示其能使cAMP含量升高而抑制中性粒细胞等炎症细胞的活化,从而发挥抗炎作用.     

止痢散、杨树花口服液中非法添加盐酸小檗碱检测方法的建立

建立止痢散、杨树花口服液中非法添加盐酸小檗碱的HPLC-PDA检测方法,采用十八烷基键合硅胶为填充剂,乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH值至3.0)(25∶75)为流动相,等度洗脱,流速为1.0 mL/min,二极管阵列检测器,提取波长为345 nm。采用峰纯度检查和光谱相似度检查辅助对照品比对方法,对非法添加药物进行确证。按外标法以峰面积计算,盐酸小檗碱在止痢散和杨树花口服液中的平均回收率分别为99.8%和99.7%,RSD分别为0.3%和0.4%;线性方程为Y=41435X-15904,R²=0.9999;检测限分别为0.2 g/kg, 0.2 g/L。该检测方法专属型强,灵敏度高,操作简便,准确可靠,可用于测定止痢散、杨树花口服液中非法添加的盐酸小檗碱。     

复方双黄连制剂体外抗菌抗病毒活性研究

【目的】探究复方双黄连制剂体外抗菌抗病毒活性,为复方双黄连的深度开发及家禽、家畜合理选择用药提供科学依据。【方法】将金银花、黄芩、连翘颗粒分别制成浸膏,再将药物浸膏及穿心莲颗粒按照比例制成穿心莲、双黄连（金银花：黄芩：连翘=1：1：2）和复方双黄连（金银花：黄芩：连翘：穿心莲=1：1：2：2）口服液,调节pH为7.0,生药浓度为100%。用大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的12个菌株进行细菌敏感性检测,采用牛津杯结合试管二倍稀释法筛选出敏感菌株,根据药物的最小抑菌浓度（MIC）探讨其体外抗菌活性;采用二倍稀释法稀释药物,培养恒河猴胚肾细胞（MA-104）、鸡胚成纤维细胞（DF-1）,用CCK-8法检测细胞活力,结合细胞病变（CPE）情况确定3种药物安全浓度,将最大药物安全浓度以二倍稀释法稀释3个梯度,用新城疫病毒、轮状病毒对MA-104和DF-1进行药物+病毒互作、先加药后攻毒和先攻毒后加药3种方式的处理,用CCK-8法检测细胞活力,并结合CPE探讨药物的体外抗病毒活性。【结果】复方双黄连的抗菌效果优于穿心莲和双黄连,其对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的MIC分别为0.20~1.56、0.20~1.56和0.78~1.56 mg/mL。CPE和细胞活力的测定结果表明,双黄连、穿心莲、复方双黄连对DF-1细胞的安全浓度范围分别为0~6.25、0~0.78和0~0.78 mg/mL,对MA-104细胞的安全浓度范围分别为0~3.13、0~0.78和0~0.78 mg/mL。新城疫病毒17E株对DF-1细胞的TCID₅₀为10^-6.19/100 μL;牦牛轮状病毒G6P[1]型SDA2株对MA-104细胞的TCID₅₀为10^-6.24/100 μL。复方双黄连通过直接灭活病毒（药物+病毒互作）、阻断病毒吸附（先加药后攻毒）及干扰病毒复制（先攻毒后加药）途径对新城疫病毒的有效抑制率分别为28.82%、55.92%、42.45%,对轮状病毒的有效抑制率分别为48.84%、26.52%、15.40%。【结论】复方双黄连的抗菌抗病毒作用均强于双黄连和穿心莲,且其对大肠杆菌、沙门氏菌的抗菌效果优于金黄色葡萄球菌,研究结果可为复方双黄连在兽医临床应用和深入开发提供科学依据。     

双黄连口服液质量分析

考察市售不同厂家生产的双黄连口服液的质量控制。依据2015版《中国兽药典》二部双黄连口服液质量标准~([1]),采用薄层色谱法和高效液相色谱法,分析双黄连口服液中的黄芩苷、绿原酸和连翘苷的色谱特征和含量。结果表明,测定18批双黄连口服液的合格率为33.33%:而定性检测合格的比例为66.67%;黄芩苷含量范围为0.17%～439.61%,黄芩苷含量合格率为61.11%;绿原酸含量范围为0.02%～231.48%,绿原酸含量合格率为33.33%;连翘苷含量范围为0.46%～341.87%,连翘苷含量合格率为38.89%。源于18个厂家的双黄连口服液的合格率仅为33.33%,且双黄连口服液中主要成分含量相差较大,因此,应从中药材的源头控制及制剂生产环节全过程进行产品质量控制,确保产品质量稳定可控。     

高效液相色谱法测定双黄连栓中金银花的绿原酸含量

[目的]建立双黄连栓中绿原酸含量的HPLC测定方法。[方法]色谱柱为DiamonsilC18 5μm（250mm×4．6mm）色谱柱,流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（15．0：85．0：1．0：0．3）,检测波长为324nm,流速为1．2ml／min,进样量为20μl,柱温25℃,在该条件下测定双黄连栓中金银花的绿原酸含量。[结果]试验条件下,绿原酸在0．2～0．6μg范围内线性关系良好,r=0．9987;样品在5h内稳定;平均回收率99．6％,RSD=0．8％（n=6）。[结论]该方法简便、快速、准确,可用于双黄连栓的含量测定及质量控制。     

浓缩型兽用双黄连口服液的急性毒性及亚慢性毒性试验

[目的]评价浓缩型兽用双黄连口服液的用药安全性,为其临床用药提供参考依据.[方法]以昆明系小鼠为试验对象,通过开展浓缩型兽用双黄连口服液的急性毒性及亚慢性毒性试验,确定其临床应用的主要毒性作用及毒性作用靶器官.其中,急性毒性试验设20.00、10.00、5.00、2.50和1.25 g/kg 5个剂量组,试验开始当天在24 h内分2~3次对小鼠进行灌胃给药;最大耐受量试验用药剂量为240.00 g/kg,试验开始当天在24 h内分2次对小鼠进行灌胃给药,每次0.80 mL/只;亚慢性毒性试验设每天灌服0.16、0.08和0.04 mL/只3个剂量组,连续灌胃给药28 d.[结果]急性毒性试验小鼠灌胃给药后30 min内精神萎靡,安静,呼吸变慢,但30 min后恢复正常,未出现中毒症状和死亡现象,未能测出半数致死量(LD50).小鼠对浓缩型兽用双黄连口服液的最大耐受量大于240.00 g/kg.亚慢性毒性试验期间,各用药组小鼠的体重、脏器(肝脏、脾脏和肾脏)指数和血清学指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮和肌酐含量)与空白对照组相比均无显著差异(P>0.05);病理组织切片观察发现,仅高剂量组小鼠的肝脏有损伤,肝细胞有点状坏死灶,肝细胞索凌乱,细胞界限模糊不清,细胞核着色减弱,其他脏器组织切片均无异常变化.[结论]浓缩型兽用双黄连口服液对小鼠无急性毒性作用,长期连续用药也无亚慢性毒性作用,安全性较高.     

双黄连口服液联合青霉素G对金黄色葡萄球菌的体外抗菌作用研究

用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)介绍的方法,分别测得双黄连口服液和青霉素G对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC);使用棋盘联合药敏试验法,以部分抑菌浓度(Fractional inhibitory concentration,FIC)指数为指标,观察双黄连口服液和青霉素G联用对金黄色葡萄球菌的抗菌作用.结果表明,双黄连口服液对金黄色葡萄球菌的MIC是46.88 mg/mL(稀释度1:32);青霉素G对金黄色葡萄球菌的MIC是0.25 U/mL;双黄连口服液和青霉素G联用对金黄色葡萄球菌的FIC指数是0.125.双黄连口服液联用青霉素G对金黄色葡萄球菌联合药敏结果呈协同作用.