广西不同养殖模式猪源大肠杆菌耐药表型差异性分析

为调查广西不同养殖模式的猪源大肠杆菌耐药表型差异,为合理使用抗菌药物防治猪大肠杆菌病和减缓耐药菌株产生提供参考,采用体外分离培养和体外药敏试验的方法,分离了广西不同养殖模式的猪源大肠杆菌,并进行耐药表型检测和差异性分析。结果显示,大规模养猪场、中小规模养猪场和散养户的猪源大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星的敏感率高于70%,而对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、利福平、林可霉素和复方新诺明的耐药率均高于90%。大规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星的耐药率极显著低于散养户(P0.01),对氧氟沙星、庆大霉素和氟苯尼考的耐药率显著低于散养户(P0.05);中小规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星、强力霉素和氟苯尼考的耐药性显著低于散养户(P0.05);散养户大肠杆菌对环丙沙星、卡那霉素和壮观霉素的耐药率极显著高于大规模养猪场和中小规模养猪场(P0.01),而对头孢噻肟的耐药率极显著低于大规模养猪场和中小规模养猪场(P0.01)。大规模养殖场、中小规模养殖场和散养户大肠杆菌的多重耐药指数(MARI)分别为0.62、0.63和0.68。14～23耐,散养户(44株)极显著高于大规模养猪场(30株)(P0.01),显著高于中小规模养猪场(39株)(P0.05)。结果表明,3种养殖模式的猪源大肠杆菌的耐药情况不同,但均存在严重的耐药问题,且以多重耐药为主。     

2013-2014年广西省主要猪病毒性传染病流行病学调查

为掌握广西猪主要病毒性传染病流行情况,为猪传染病预防方案提供依据,本研究于2013年1月1日至2014年12月31日从广西省共收集410份样品,运用PCR及RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(PORV)、猪流感病毒(SIV)的感染情况。检测结果表明,PRRSV、PCV-2、CSFV、PRV、PEDV、TGEV、 PORV和SIV的平均感染率分别为35.12%、18.54%、1.17%、0.98%、10.00%、2.44%、0和1.22%;PRRSV和PCV-2混合感染率为6.83%;PRRSV在秋、冬季节呈现高感染率为36.67%、45.31%和63.64%、48.78%,而PCV-2在春、夏、冬季节呈现高感染率为44.44%、25.00%,11.29%、19.35%和39.39%、14.63%。PRRSV和PCV-2是混合感染的主要病原,它们互相之间或是与CSFV、PEDV、PRV、SIV及副猪嗜血杆菌、链球菌等混合感染,PRRSV和PCV-2将是今后广西地区猪病防控的重点。     

广西畜禽产品中沙门氏菌血清型、耐药性及耐药基因调查

试验旨在了解广西部分地区畜禽产品中沙门氏菌血清型分布和耐药状况,以及β-内酰胺酶blaTEM、blaCTX-M基因和氟喹诺酮类抗生素耐药基因qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ⅰb-cr的流行情况。对沙门氏菌进行分离鉴定与血清型分型,采用K-B纸片法对其中随机挑选的80株分离株进行24种抗菌药物敏感性试验,并采用PCR方法进行耐药基因检测。结果显示,从零售生鲜畜禽肉中分离的176株沙门氏菌分属5个血清群,共26种血清型,主要优势血清群为B群60.23%(106/176)、E群18.75%(33/176)和C群15.91%(28/176),主要优势血清型为德尔卑沙门氏菌35.23%(62/176)、鼠伤寒沙门氏菌11.93%(21/176)和伦敦沙门氏菌9.66%(17/176)。80株分离株对24种抗菌药物均产生不同程度的耐药,其中对复方新诺明、林可霉素、利福平的耐药率最高,均高于90.00%,对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、强力霉素、头孢拉啶、头孢氨苄、头孢曲松、头孢他啶、头孢噻肟、阿奇霉素的耐药率介于50.00%~90.00%之间,对环丙沙星、氧氟沙星、氟苯尼考的耐药率小于10.00%;所有分离株均为多重耐药株,其中最少为2重耐药,最多为17重耐药,多重耐药性主要集中在10~16重耐药,共占总数的78.75%(63/80)。PCR结果显示,80株分离株各基因的检出率分别为:blaTEM98.75%(79/80)、blaCTX-M26.25%(21/80)、oqxA26.25%(21/80)、oqxB21.25%(17/80)、qnrA16.25%(13/80)、aac(6′)-Ⅰb-cr 50.00%(40/80)。结果表明,广西畜禽产品源沙门氏菌血清型呈多样性分布,分离株的耐药情况严重,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有很大的关系。     

氟苯尼考耐药基因floR LAMP检测方法的建立及应用

为建立快速、灵敏且可定量检测氟苯尼考耐药基因floR的环介导等温扩增方法(LAMP),根据GenBank登录的革兰阴性菌floR基因保守序列,利用PrimerExploerV4设计特异性LAMP引物,成功建立了快速检测氟苯尼考耐药floR基因的LAMP方法。该LAMP检测方法反应温度为63℃,反应时间为60min,具有可实时监测反应、定量检测出floR基因的拷贝数,以及操作简便的特点,灵敏度高,检测限为6.24×100拷贝,是普通PCR的100倍。用建立的方法检测对氟苯尼考不同敏感性的大肠埃希菌floR基因,结果显示,对氟苯尼考敏感、中介和耐药的菌株均检测到floR基因,其拷贝数与菌株MIC相关,提示floR基因不仅存在于氟苯尼考耐药菌中。所建立的floR基因LAMP检测方法可为floR基因的监测,以及氟苯尼考耐药性产生和传播机制的研究提供新的技术手段。     

天门冬多糖对猪脾淋巴细胞体外增殖的影响

试验旨在研究不同浓度的天门冬多糖(ASP),在ConA或LPS的协同刺激下对猪脾淋巴细胞体外增殖的影响。猪脾淋巴细胞体外培养体系中加入不同浓度的天门冬多糖使其终浓度为400、200、100、50、25、12.5μg/ml,在ConA(5μg/ml)或者LPS(10μg/ml)的协同刺激作用下,细胞培养24、48、72 h时,观察猪脾淋巴细胞增殖情况。结果表明,天门冬多糖及其协同ConA或LPS能显著或极显著的促进猪脾淋巴细胞体外增殖(P<0.05或P<0.01)。     

广西巴马香猪的种质特性及开发利用

根据广西巴马香猪的生态环境、体型外貌、生产、繁殖性能进行了系统介绍,简要介绍了香猪的饲养管理,阐述了巴马香猪的开发利用价值,并提出了保护地方品种,加大地方品牌推广力度的期望。     

波尔山羊肝片吸虫和支原体混合感染的诊治

2013年12月20日我们诊治了一例波尔山羊下颌水肿、消瘦和呼吸困难而致羊死亡的病例,经流行病学调查,临床症状、病理变化和实验室检测确诊其病原为羊肝片吸虫和绵羊肺炎支原体混合感染。现报道如下：1发病经过该养殖户有2年多养羊的历史,常年免疫山羊痘疫苗和口蹄疫疫苗,没有发生过疫情,至2013年初波尔山羊存栏已达270只。     

大肠杆菌O157:H7氟苯尼考耐药菌株与敏感菌株的蛋白组学差异

[目的]分析大肠杆菌O157:H7氟苯尼考耐药菌株与敏感菌株的差异表达蛋白,从蛋白组学层面揭示大肠杆菌O157:H7对氟苯尼考耐药性的产生机制.[方法]提取大肠杆菌O157:H7氟苯尼考耐药菌株(RS2-256)和敏感菌株(RS2)的全菌蛋白,经同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)标记后进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析,质谱数据通过Mascot v2.2鉴定,并根据COGs数据库对差异表达蛋白进行GO功能注释和分类.[结果]RS2菌株获得3385个肽段,RS2-256菌株获得3955个肽段,合计7340个肽段,其中6975个肽段为特有肽段,分属于1039个蛋白.与RS2菌株相比,RS2-256菌株有145个蛋白表达差异显著(P<0.05),占检测蛋白总数的13.96%,其中,上调表达蛋白有87个、下调表达蛋白有58个.表达差异蛋白按照功能进行分类,可分为外排泵、转运蛋白、细胞膜形成、应激调控、核糖体结构、DNA复制、转录、翻译、翻译后修饰、能量产生和转化、氨基酸转运和代谢、辅酶转运和代谢、糖转运和代谢、脂肪代谢、离子转运和代谢、细菌运动性、转座及信号通路共18类;多药物外排泵亚基AcrA和AcrB、外膜蛋白TolC、外膜蛋白X等52个蛋白的表达变化在3.00倍以上,占表达差异蛋白总数的35.86%.[结论]外排泵AcrAB-TolC家族、ABC家族、外膜蛋白、毒性调节器B、饥饿蛋白等在大肠杆菌O157:H7对氟苯尼考耐药性产生过程中发挥重要作用,同时涉及细菌糖代谢、氨基酸代谢、离子转运、DNA损伤与修复、生物膜及毒素与抗毒素系统等生命活动.     

广西畜禽产品中沙门氏菌血清型、耐药性及耐药基因调查

试验旨在了解广西部分地区畜禽产品中沙门氏菌血清型分布和耐药状况,以及β-内酰胺酶bla_TEM、bla_CTX-M基因和氟喹诺酮类抗生素耐药基因qnrA、oqxA、oqxB、aac（6'）-Ⅰ b-cr的流行情况。对沙门氏菌进行分离鉴定与血清型分型,采用K-B纸片法对其中随机挑选的80株分离株进行24种抗菌药物敏感性试验,并采用PCR方法进行耐药基因检测。结果显示,从零售生鲜畜禽肉中分离的176株沙门氏菌分属5个血清群,共26种血清型,主要优势血清群为B群60.23%（106/176）、E群18.75%（33/176）和C群15.91%（28/176）,主要优势血清型为德尔卑沙门氏菌35.23%（62/176）、鼠伤寒沙门氏菌11.93%（21/176）和伦敦沙门氏菌9.66%（17/176）。80株分离株对24种抗菌药物均产生不同程度的耐药,其中对复方新诺明、林可霉素、利福平的耐药率最高,均高于90.00%,对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、强力霉素、头孢拉啶、头孢氨苄、头孢曲松、头孢他啶、头孢噻肟、阿奇霉素的耐药率介于50.00%~90.00%之间,对环丙沙星、氧氟沙星、氟苯尼考的耐药率小于10.00%;所有分离株均为多重耐药株,其中最少为2重耐药,最多为17重耐药,多重耐药性主要集中在10~16重耐药,共占总数的78.75%（63/80）。PCR结果显示,80株分离株各基因的检出率分别为：bla_TEM 98.75%（79/80）、bla_CTX-M 26.25%（21/80）、oqxA 26.25%（21/80）、oqxB 21.25%（17/80）、qnrA 16.25%（13/80）、aac（6'）-Ⅰb-cr 50.00%（40/80）。结果表明,广西畜禽产品源沙门氏菌血清型呈多样性分布,分离株的耐药情况严重,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有很大的关系。     

实验室检测在猪病防控中的应用

正近年来,随着规模化、集约化养猪的不断发展,猪场疾病的复杂化程度日趋严重,和以往仅凭兽医技术人员简单的临床诊断及经验判断已经远远无法满足当今养殖业的发展需求,需借助专业的实验室检测技术来弥补传统诊断的缺陷。笔者结合自身两年来的实验室工作经历,总结以下几点实验室检测在猪病防控中的应用,仅供大家交流参考。1抗体检测所谓抗体检测,通常是指借助与已知抗原在体