肠致病性大肠杆菌DPO-PCR快速检测方法的建立

为建立肠致病性大肠杆菌(EPEC)的快速检测方法,本研究以EPEC bfp A基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物(DPO),建立了EPEC的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,退火温度在45℃~65℃范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感。该方法对其他菌株的扩增结果均为阴性,特异性强;其灵敏度为97 cfu/m L。利用该方法和国标法分别对采集的230份临床样品进行检测,均共计检出5份EPEC阳性样品,两者符合率为100%。本研究建立的DPO-PCR方法设计简单、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,为快速准确检测EPEC提供新的检测手段。     

副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

为建立检测副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的快速检测方法,本研究以VP toxR基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测VP的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有VP检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为4.9 CFU/mL,利用该检测方法对采集的150份样品进行检测,共计检出3份VP阳性样品,与国标法(GB 4789.7-2013)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。     

食蟹猴肠道志贺氏菌的分离和鉴定

[目的]为志贺氏菌流行病学的调查和相关疾病的防治提供依据。[方法]从2~3岁的健康食蟹猴的230份新鲜粪便样品中分离可疑菌株,并对分离到的菌株进行氧化酶实验、血清型分型和生化实验。[结果]从230份食蟹猴新鲜粪便样品中分离出3株可疑菌株,阳性检出率为1.3%。通过形态学观察、生化实验和血清学检测,3株可疑菌株均被鉴定为志贺氏菌B群,其中2株血清型为2α型,1株血清型为Y变种,属于主要流行菌群。3株可疑菌株的生化反应结果符合志贺氏菌的生化反应特点。[结论]该研究可保证出口试验猴无感染志贺氏菌的要求。     

实验猴粪便样品中沙门氏菌LAMP检测方法的建立及应用简

A loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay was developed for detection of Salmonlla in fecal samples of experimental monkeys. According to the specific sequences (fimY) of Salmonlla in GenBank, one set of primers was selected and the reaction condition was optimized. The results showed that the detection limit of LAMP method was 1.35×10¹ and 1.35×10³ CFU/mL in Salmonella pure culture and clinical samples,respectively,which was the same as routine PCR. The amplification could complete in one hour, and the result could be distinguished by naked eyes. There was non-specific amplification of other pathogens. These results suggested that this LAMP assay was a simple and specific method for rapid detection of Salmonlla in fecal samples.     

猕猴属实验动物的动物福利要求

为了确保猕猴属实验动物的顺利出口,满足国际上对实验用猴越来越高的动物福利要求,本文从制度建设,人员要求,以及饲养、隔离、运输环节的动物福利要求进行了分析,起草了一套完整的动物福利规范,供国内养殖企业和检验检疫部门参考。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ基因的克隆、序列分析及表达

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型Ⅰ菌株序列设计了一对特异性引物，用PCR方法扩增毒素Ⅰ基因，得到约920bp的片段，与参考序列的核苷酸同源性达99．3％，定向克隆到pET32a（＋）中，转化BL21（DE3），经诱导后，毒素Ⅰ基因得到高效表达，Westemblot鉴定呈阳性。     

单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

为建立单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的快速检测方法,本研究以LM iap基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR快速检测LM的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有LM菌株检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为6.5 CFU/mL;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测4次Ct值的变异系数均小于2%;利用该检测方法对采集的139份样品进行检测,共计检出3份LM阳性样品,与国标法(GB 478930-2010)检测结果一致。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。     

猪胸膜肺炎放线杆菌PCR快速分型系统的建立及应用

根据外膜蛋白基因中间部分的差异,毒素基因和荚膜基因的型特异性,建立3个多重PCR的分型体系,可将App1～12型分成11个模式,除9型和11型外完全区分。此分型体系用于3株野毒株的分型,得出的结果和血清学分型一致。对人工发病猪扁桃体、肺脏、鼻拭子各12份分型结果与已知血清型一致。将该分型系统直接用于临床病料的鉴定并分型,实验从35份临床可疑病料中检测出2份阳性,均为7型,从健康猪扁桃体350份中检测出5份阳性,一份为4型,一份为12型,一份为3型,2份为7型。     

出口实验猴产业发展中检验检疫问题研究

实验猴产业作为生物医药产业链的纽带,正步入关键期、黄金期。本文结合广州市从化区出口实验猴产业的实际情况,介绍了出口实验猴的养殖情况、出口情况、产业前景、机遇与挑战,阐述了影响实验猴产业发展的几个关键因素,包括国内外市场、饲养技术、动物卫生检疫、生物安全风险等,分析了在检疫监管方面的做法及存在的问题,并对实验猴产业的发展提出了建议,如制定检疫监管规程、优化检疫监管制度、加强技术保障能力建设、建立实验动物产业动态信息平台、加强与地方政府的沟通合作等,以期为促进出口实验猴产业的可持续发展提供借鉴。