雪山草鸡感染传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进行了基因测序及序列分析。结果显示,引起该鸡群发病的病原是IBDV新型变异株,属于A2dB1基因型;这3个毒株的VP2高变区编码蛋白上含有IBDV变异株的特征性氨基酸,也具有IBDV新型变异株的独特氨基酸。结果提示,我国地方品种鸡群中也有IBDV新型变异株的流行,现有的部分商品化IBDV疫苗已不能有效预防IBDV新型变异株的流行。     

表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及生物学特性分析

鸡传染性法氏囊病（IBD）是一种严重危害养禽业的高度致死性和免疫抑制性传染病。为研制IBD重组火鸡疱疹病毒（HVT）活载体疫苗,本研究构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）保护性抗原VP2基因的重组HVT并对其体外生物学特性进行了分析。通过RT-PCR扩增IBDV超强毒株VP2基因并克隆入pCI载体,获得重组真核表达质粒pCI-VP2。用限制性内切酶将携带CMV启动子的VP2基因表达框架切下,连接于入门质粒pENTR,构建获得重组入门质粒pENTR-VP2。将pENTR-VP2与HVT重组黏粒H3-Kan/ccdB进行LR重组反应,构建重组表达黏粒H3-VP2。用H3-VP2与其他4个相互重叠并覆盖HVT全基因组的黏粒共同转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,拯救获得重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF中连续传至20代后用PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行检测,并绘制重组病毒体外生长曲线,分析其体外复制特性。结果表明,重组病毒rHVT-VP2能够稳定表达VP2蛋白,rHVT-VP2在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异。重组病毒rHVT-VP2免疫鸡后能够诱导产生IBDV中和抗体,并对IBDV强毒株攻击引起的死亡提供90%免疫保护。重组病毒rHVT-VP2的构建为研制IBD重组HVT活载体疫苗奠定了基础,对IBD的防控具有重要意义。     

基因修饰的鸡新城疫病毒HN基因DNA疫苗免疫效力评价

为了评价基因修饰对提高DNA疫苗免疫效果的影响,将NDV F48E9株HN基因进行密码子优化和信号肽替换,修饰后的基因命名为SoptiHN,将HN和SoptiHN基因分别克隆至pVAX 1和含CpG-ODN刺激序列的载体pVAX 1-CpG中,共获得pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN、pV-HN和pVC-HN 4种质粒.将4种质粒股四头肌多点注射3周龄SPF鸡,每只鸡200 μg,以PBS为非免疫对照;一免后3周以相同的剂量加强免疫,二免后2周以103EID50NDV的F48E9强毒株进行攻毒,计算发病率、死亡率以及排毒情况.试验期间每周采集血清进行HI抗体的检测,同时采集抗凝血分离外周血淋巴细胞,分析免疫后各试验组IFN-y和IL-18的变化情况.结果表明,疫苗免疫1周后,所有免疫组均能产生抗NDV的HI抗体,pV-SoptiHN和pVC-SoptiHN组最高,与其他组差异显著;pVC-SoptiHN和pVC-HN质粒免疫组IFN-γ和IL-18表达水平要略高于pV-SoptiHN和pV-HN质粒免疫组.攻毒结果显示,pV-SoptiHN与pVC-SoptiHN免疫组的死亡保护率均为71%,排毒检出率均为25%,而pV-HN和pVc-HN免疫组的保护率均为50%,排毒检出率分别为50%和44%,pVAX1、pVAX1-CpG和PBS对照组攻毒后的死亡率均为100%,排毒检出率均为100%,pV-SoptiHN与pVC-SoptiHN免疫组的排毒时间与其他5组相比有所缩短.以上结果表明,修饰后的HN基因可以诱导鸡产生更强烈的免疫反应,获得更好的保护效率.     

张家口地区奶牛临床型乳房炎病原菌的中草药体外抑菌试验

奶牛乳房炎是奶牛养殖业中的常见病和多发病,根据临床上是否表现症状分为临床型乳房炎和隐性乳房炎.该病不仅会降低产奶量,而且还会影响奶及奶制品的品质,给养殖业造成巨大的经济损失,严重制约着奶牛养殖业的健康发展.     

鸭肠炎病毒UL41基因缺失株的构建及其体外增殖能力分析

旨在构建鸭肠炎病毒（DEV）UL41基因缺失毒株,并对其生物学特性进行分析,本研究以克隆有DEV UL41基因的重组黏粒D1为骨架,利用Red/ET重组技术构建缺失UL41基因的重组黏粒D1 dUL41;将UL41基因缺失重组黏粒D1 dUL41与其他4个克隆有DEV基因组片段的亲本黏粒共转染鸭胚成纤维细胞（DEF）,拯救获得UL41基因缺失毒株rDEV-SD19/dUL41。将该基因缺失病毒感染DEF后,提取病毒基因组进行PCR鉴定及测序,并利用间接免疫荧光试验检测该病毒感染细胞中UL41基因表达情况;绘制拯救的基因缺失病毒的生长曲线,分析其体外复制特性。PCR及测序结果显示,本研究成功构建了缺失UL41基因的重组黏粒D1 dUL41。将该基因缺失黏粒与其他含有DEV基因组的亲本黏粒共转染DEF后能够产生典型的蚀斑病变。PCR及测序结果显示,UL41基因成功从DEV基因组中缺失;间接免疫荧光试验发现,基因缺失病毒rDEV-SD19/dUL41感染DEF后,未见UL41蛋白表达。综上表明,本研究成功构建了DEV UL41基因缺失病毒。体外生长曲线显示,rDEV-SD19/dUL41在DEF中的复制能力明显低于亲本病毒,提示UL41蛋白在DEV复制中发挥重要作用。UL41基因缺失DEV的构建为进一步研究UL41基因在DEV感染和致病中的作用机制奠定了基础。     

H9N2亚型猪流感病毒血凝素基因的克隆、序列分析及生物信息学预测

对猪流感A/swine/HeBei/012/2008/(H9N2)分离株血凝素(HA)基因进行了克隆和序列测定,与GenBank中收录的相关序列进行了比对并绘制了系统发育进化树。采用生物信息软件和互联网服务器,预测HA的二级结构,分析其表面特性(亲水性、柔韧性、可及性和抗原性),综合预测HA的B细胞抗原表位。结果显示:HA蛋白含有6个糖基化位点,剪切位点序列为PARSSR GLF,为低致病性流感病毒的裂解位点。HA基因核苷酸序列和推导的氨基酸的同源性与A/chicken/Hebei/4/2008(H9N2)最高,均为99%。HA基因进化树显示分离毒株与A/chicken/Hebei/4/2008(H9N2)位于同一分支,具有较近的亲缘关系;由此推测分离株可能是由A/chicken/Hebei/4/2008(H9N2)而来,在跨物种传播的过程中发生了部分变异。生物信息学预测结果表明:HA蛋白肽链的24-31、167-179、190-196、266-273和487-508区段为预测的B细胞表位优势区。     

ND—EDS鸭源二联油乳剂灭活苗的研制

以鸭源NDV和EDSV适应株同时接种鸭胚,收获48一120小时鸭胚尿囊液,测其NDV和EDSV的HA价后,制成二联油乳剂灭活苗,免疫130日龄蛋鸡,免疫后30天HI抗体达到高峰,免疫后180天ND—HI抗体≥8log_2,EDS—HI抗体≥6.5log_2,与进口和国产二联苗比较抗体水平相近,P>0.05无显著差异,疫苗保存6—9个月不影响免疫效果。     

增免散对雏鸡免疫功能和增重的影响

近年来 ,随着中药免疫药学研究的逐步深入 ,人们发现许多中药或其活性成分能增强机体免疫功能 ,促进机体生长 ,预防疾病的发生。对于应用中草药防治鸡传染病、提高免疫力机理的研究报道很多 ,如陆钢[1] 报道党参等药具有提高鸡血清抗体和雏鸡保护率的作用 ,延长抗体存留时间 ,增强吞噬细胞的功能 ,提高机体免疫力 ;方维焕报道黄连等 2 2种中药对鸡新城疫病毒有不同程度的抑制作用 ,1 6种中药能明显抑制病毒血凝和有不同程度减少病毒空斑形成的作用。可见具有治疗传染病作用的中药除含有效物质杀灭、抑制病毒外 ,还能激发机体抗感染的免疫力 …     

传染性喉气管炎病毒WG株糖蛋白gJ基因的克隆与表达

根据GenBank中已发表的传染性喉气管炎病毒全基因组序列（NC006233）设计引物,以传染性喉气管炎病毒WG株基因组为模板,PCR扩增糖蛋白gJ基因,并对其进行序列分析。用DNAStar软件分析酣蛋白的抗原性,选择抗原性强的140aa-483aa片段,克隆并连接到原核表达载体pET-32a（＋）中,转化BL21（DE3）菌株。经IPTG诱导后,获得大小为65．2ku的重组蛋白,命名为卜出,表达量占菌体蛋白总量的60．8％;Westernblot分析表明r-gJ具有较强的抗原性。     

肉仔鸡传染性法氏囊病混合感染白痢杆菌病的诊断与防治

鸡传染性法氏囊病(IBD)是由病毒引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病,在我国的流行非常广泛。本病主要侵害免疫中枢器官—法氏囊。因法氏囊被破坏,使鸡降低其对各种传染病的抵抗力并造成鸡对免疫接种的应答反应低下或造成免疫失败,患病鸡群常继发感染新城疫、大肠杆菌病、球虫病、白痢病等。2006年1月宣化区某鸡场发生了鸡传染性法氏囊病及白痢病混合感染,现将诊治情况报告如下。1发病情况春光乡大北街村某户饲养肉仔鸡1500只,从2006年1月份起,鸡群开始发病,发病率85%,死亡率40%。以后经法氏囊苗免疫的鸡群仍然有很大一部分发病,发病率3…