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本研究自2018-2019年从疑似感染新城疫的家禽病料分离鉴定出13株新城疫病毒(Newcastle disease viruses,NDV),采用RT-PCR方法对这13株NDV分离株的F基因进行扩增,产物经TA克隆并测序后与GenBank数据库中的参考毒株进行遗传进化分析。结果显示,其中的7株属于基因Ⅱ型,5株属于基因VI型,1株属于ClassⅠ亚型。F基因相似性分析结果显示,7株基因Ⅱ型毒株与疫苗株La Sota.Bl sClone 30的核昔酸相似性在9&1%-100%之间,氨基酸的相似性在97.6%~100%之间。5株基因VI型分离株与Ⅱ、Ⅶ型疫苗株及VIb亚型代表株之间的核昔酸相似性在79.7%-98.4%之间,氨基酸的相似性在76.6%-97.6%之间。1株基因Ⅰ型的分离株与Ⅱ,Ⅶ型疫苗株及Class Ⅰ代表毒株的核昔酸相似性在52.1%-97.3%之间,氨基酸的相似性在68.5%-96.8%之间,表明当前部分地区的NDV分离株与传统疫苗株之间存在较明显的遗传特征差异。 相似文献
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为了研究粗提的禽霍乱荚膜抗原对SPF鸡的免疫保护效果,试验选取了禽多杀性巴氏杆菌C48-1株,制备了粗提的荚膜抗原,将荚膜抗原和铝胶生理盐水按4∶1的比例混合,制备了两批疫苗(批号分别为2017001、2017002),在制备过程中检验了菌液的活菌数及荚膜抗原的蛋白质、SDS含量,并进行无菌检验。将制备的两批疫苗分别免疫21日龄SPF鸡,并于免疫后第21天用C48-1株进行攻菌,攻菌后连续观察7 d,每天记录鸡只死亡及发病情况。结果表明:经检验,两批疫苗蛋白质含量均在2. 0 mg/m L以上,SDS含量均为0. 03%,符合疫苗的质量标准。两批疫苗对42日龄SPF鸡的保护率为70%~80%。说明该疫苗对预防禽霍乱具有较好的效果。 相似文献
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单核细胞增生性李斯特菌iap基因的原核表达 总被引:1,自引:0,他引:1
该研究利用自行设计的引物通过PCR方法扩增出单核细胞增生性李斯特菌 Listeria monocytogenes C5305 株的iap基因,在iap基因的5'端和3'端分别引入EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ 2 个酶切位点并将其克隆到pET-28a表达载体上,经PCR鉴定、酶切鉴定和核苷酸序列测定后获得重组质粒 pET-28a-iap,将该重组质粒转化人大肠杆菌BL21 (DE3)pLysS,经1 mmol/LIPTG诱导4~6 h后,通过SDS-PAGE及Western-blotting鉴定,证明该基因得到表达,表达产物相对分子质量约为60 000,以可溶形式存在. 相似文献
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本研究对猪流感病毒A/Swine/Guangdong/3/2003(H1N1)株(SIV-GD03株)的HA基因序列进行了遗传演化分析,结果表明SIV-GD03株与GenBank中登录的全部192株H1亚型SIV中的151株核苷酸序列相似性达到85%以上,表明该毒株具有作为疫苗候选株的分子特征.将SIV-GD03的HA基因克隆到腺病毒穿梭载体pAd-CMV5-IRES-GFP中,将得到的重组穿梭质粒pAd-H1-IRES-GFP电转化至BJ5183感受态细胞中,与人5型腺病毒骨架质粒同源重组获得重组腺病毒质粒prAd-H1-IRES-GFP,该质粒线性化后转染AD-293细胞.包装出的重组腺病毒rAd-H1HA-GFP通过荧光显微镜观察、PCR和western blot鉴定,证明HA基因和GFP基因在重组腺病毒中得到高效表达,该毒株在AD-293细胞上连续传12代后表现出较好的整合稳定性及传代稳定性. 相似文献
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通过对分离毒株的传代、HA效价的测定、特异性的检验、毒力的测定及动物回归试验,证明分离毒为新城疫强毒。该毒株有血凝性,且能被抗NDV血清所抑制,而不被禽流感病毒(H5、H7、H9亚型)及EDSV76标准阳性血清所抑制;动物回归实验中所有试验鸽精神沉郁,有典型神经症状,下痢、排绿色粪便;剖检可见肌胃、腺胃出血,肠道充满黄色黏液,黏膜出血,脑部轻微出血;组织病理学检查见脑膜充血出血、血管周围间隙增宽,淋巴细胞浸润;脾脏瘀血,大量浆细胞聚集;肝脏瘀血;肠道固有层大量浆细胞浸润;气管分泌旺盛,固有层瘀血,炎症细胞浸润。 相似文献
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H9N2亚型禽流感病毒(AIV)h9.4.2.5分支近年在我国广泛流行,为了解其分子特征及变异特点和进化规律,对从2017年我国不同地区分离到的10株H9N2亚型AIV进行了全基因序列测定及分析。结果表明:10株H9N2亚型AIVHA裂解位点均没有连续的碱性氨基酸插入,属于低致病性。遗传进化分析表明:10个分离株的HA基因均属于h9.4.2.5分支,NA基因均处于Y280-like分支;6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、NS、M)与H5、H7亚型高致病性AIV处于同一分支,有可能发生不同程度的基因重配。 相似文献
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利用H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株进行灭活疫苗的研制,并对疫苗的免疫效果进行评价,为家禽H7N9亚型流感的防控提供科学数据及手段。将AIV-rGD76株用灭菌生理盐水作104倍稀释后,接种11日龄非免疫鸡胚,37℃孵育72h后收获感染鸡胚尿囊液,经甲醛灭活后,加矿物油佐剂乳化制成油乳剂灭活疫苗,对制备疫苗的性状、安全性、免疫效力等进行检验。结果显示,制备的3批重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株)均为油包水型,黏度均在50cP以内,对3批疫苗取样,样品经3000r/min离心15min,管底无水相析出。安全性试验结果显示,将疫苗按1mL/只超剂量接种3周龄SPF鸡,试验鸡在观察期内全部健活,未出现局部或全身不良反应,表明疫苗对SPF鸡具有良好的安全性;免疫效力及攻毒保护试验结果显示,用疫苗按0.3mL/只的剂量免疫接种3周龄SPF鸡1次,免疫接种后21d试验鸡血清中rGD76株的HI抗体平均效价可达8log2以上,使用H7N9亚型高致病性禽流感病毒GD16株滴鼻接种0.2mL/只(含100LD50)对免疫鸡进行攻毒,疫苗对免疫鸡的保护率均为100%。在实验室条件下研制出重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株),疫苗的各项指标均符合标准。 相似文献
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细菌耐药性的产生机理及其控制对策 总被引:6,自引:2,他引:4
随着抗菌药的广泛应用,细菌的耐药性越来越高,给临床治疗带来诸多困难,因此了解细菌耐药性的产生机理具有重要意义。抗菌药主要以细菌4个必要的细胞内途径为靶位,包括细胞壁的合成、蛋白质的合成、核酸(DNA或RNA)的合成以及细菌的代谢过程。细菌耐药性产生包括生化机理和基因机理,重要的生化机理包括抗菌药破坏酶的产生、靶位的改变和主动外排系统的出现。细菌耐药性的基因机理主要包括基因的突变和外源抗性基因的获得。近年来,喹诺酮类药物耐药性机理成为了研究的热点,并且已经证明由质粒pMG252介导的耐药性具有重要的意义。 相似文献