温敏型核雄性不育系番茄T4育性的研究

以温敏型核雄性不育系番茄T4及对照First为试材,通过调查花粉发芽率、自交结实率、果实种子数以及采用Tricine-SDS-PAGE电泳方法分析叶片及花药蛋白质的变化,研究T4的育性转化,并分析其在可育和不育条件下花粉发芽率、自交结实率、果实种子数、叶片及花药蛋白质的差异。结果表明：28 ℃/18 ℃（昼/夜）处理的T4花粉发芽率、自交结实率最高,果实种子数最多,与对照First差异不显著,表明此时T4恢复部分育性|28 ℃/24 ℃和28 ℃/12 ℃处理的T4花粉发芽率、自交结实率和果实种子数与对照差异均达到极显著水平,表现为不育。不同温度处理的T4花药蛋白质与叶片蛋白质差异均达到显著水平|28 ℃/24 ℃和28 ℃/12 ℃处理的T4叶片蛋白质与对照差异显著,但28 ℃/18 ℃处理的差异不明显。     

油松毛虫幼虫抗菌物质及其抗菌活性研究

采用体内注射法,对油松毛虫Dendrolimus tabulaeformisTsaietLiu3龄幼虫注射浓度为1.0×108孢子/mL的大肠杆菌Escherichia coli菌悬液,诱导其产生抗菌物质,12h后收集制备血淋巴粗提液。分别测定对4种细菌和4种真菌的抗菌活性,并检测温度、pH值变化和反复冻融对抗菌活性的影响。采用Tricine-SDS-PAGE电泳法确定抗菌物质的分子量大小。结果发现,诱导后的油松毛虫3龄幼虫血淋巴粗提液对试验的细菌和真菌均有不同程度的抑制作用,其中对革兰氏阴性细菌大肠杆菌E.coli和变形杆菌Proteus species的抑制作用强于革兰氏阳性细菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。血淋巴粗提液的的抗菌活性在50℃水浴处理和4~9的pH值条件下保持稳定,反复冻融1~5次抗菌物质的活性降低4.3%~14.9%。电泳结果显示,诱导组血淋巴粗提液在23.2kD和15.0kD处分别出现一条特异性条带,在60.4kD处蛋白带变浅。由此推测从油松毛虫幼虫体内诱导产生的抗菌物质分子量可能是23.2kD和15.0kD。     

Tricine-SDS-PAGE鉴定不同品质饲料蛋白质的组成

[目的]探讨Tricine-SDS-PAGE技术应用于饲料蛋白质的分析与品质鉴定的可行性。[方法]采用Tricine-SDS-PAGE对菜籽饼粕、棉籽饼粕、菜籽浸出粕、热带假丝酵母固态发酵棉籽粕以及黑曲霉固态发酵棉籽粕分别进行凝胶成像分析,鉴定5种不同品质饲料的蛋白质组成。[结果]采用4.0%C、16.5%T的分离胶,可以取得较好的分离效果。菜籽蛋白和棉籽蛋白样本的凝胶成像结果表明,菜籽饼粕中的蛋白质主要集中在泳道中部,为14.4~60.0 kD,而棉籽饼粕中的蛋白则在泳道顶端(约90 kD)含量较高,2种饲料蛋白得到了有效区分。同一种样本相同处理方法间的凝胶成像结果表明,用黑曲霉对棉籽饼粕进行固态发酵效果优于热带假丝酵母。[结论]5种饲料之间蛋白成像差异显著、直观,Tricine-SDS-PAGE可以作为饲料蛋白品质鉴定的一种有效方法。     

改进Tricine-SDS-PAGE法分析重组牛乳铁蛋白肽

为了有效分离3.1kDa乳铁蛋白肽,试验调整分离胶中聚丙烯酰胺浓度及凝胶的交联度,并加入适量甘油,改进了传统的Tricine-SDS-PAGE方法。结果表明,该方法与常规的SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE相比较,改进的凝胶不仅可以有效分离3.1kDa的肽,而且对分子量为212kDa的大分子量蛋白也有很好的分离效果,明显优于常规的SDS-PAGE和现有的Tricine-SDS-PAGE方法。     

pH值对巴西橡胶树胶乳β-1,3-葡聚糖酶结合黄色体膜的影响

基于黄色体内含物中的多种可溶性蛋白质以及黄色体膜在胶乳凝固中所起到的重要作用,已提出了多种阐明胶乳凝固机制的假说,但有关β-1,3-葡聚糖酶在胶乳凝固中的作用尚无报导.通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和免疫印迹技术(western bloning),对不同pH值条件下破裂收集的黄色体内含物和膜组分中的蛋白质进行研究.结果表明,在pH5.5左右的酸性环境中,β-1,3-葡聚糖酶主要表现为可溶性蛋白质,很少结合黄色体膜;但在pH6.9左右的中性及偏碱性的环境下,大量β-1,3-葡聚糖酶结合到黄色体膜上,可溶性蛋白所占的比例很低.首次发现了β-1,3-葡聚糖酶可以结合黄色体膜,二者结合的程度明显受环境pH值的影响.该结果对于认识β-1,3-葡聚糖酶的生物功能,完善黄色体在胶乳凝固中的作用及阐明乳管堵塞机制具有重要意义.     

淡水鱼类主要过敏原的模拟肠胃液消化

采用Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)方法,通过模拟肠胃液消化实验分析淡水鱼类肌肉中主要过敏原小清蛋白(parvalbumin,PV)的消化特性。Tricine-SDS-PAGE结果显示,纯化的鲫、鲢PV在模拟胃液消化实验中反应5～30min明显分解,而在模拟肠液消化实验中4h仍未见明显分解。鲫、鲢肌浆蛋白在模拟胃液消化实验中,肌浆蛋白中的PV比纯化PV的分解时间明显延长,消化30～60min仍未被完全分解,而其它肌浆蛋白消化10～30min就完全分解。采用抗PV多克隆抗体的Western-blot显示,该抗体能特异识别PV及其降解产物。研究结果表明,淡水鱼类PV相对于非过敏蛋白具有较高的消化稳定性,而胃蛋白酶能较好地分解该过敏原。     

羊和猪胎盘肽的制备及其生物活性的初步研究

利用超滤法从羊和猪胎盘中提取出了胎盘肽,采用改良的加脲Tricine-SDS-PAGE电泳法测定羊胎盘肽的分子量为4,386Da;利用紫外光扫描得其最大吸收峰分别为225.4 nm和209.6 nm;并通过建立体外抑制兔淋巴细胞模型,利用MTT比色法测定所提取胎盘肽的免疫调节作用,结果显示:羊和猪胎盘肽均可使顺铂抑制的兔外周血T淋巴细胞的转化率显著提高,其中羊胎盘肽以1:102、1:103和1:104三组效果最为明显(P<0.01);而猪胎盘肽以1:102、1:103两组效果最为明显(P<0.01)。     

大豆糖蜜上清液中胰蛋白酶抑制剂的去除

胰蛋白酶抑制剂是广泛存在于大豆及大豆制品中的抗营养剂,主要有Kuntiz型和Bowman-Birk型两种,为了得到高品质的产品,需要在加工过程中将其灭活或去除。通过研究大豆糖蜜上清液中胰蛋白酶抑制剂的活性、鉴定抑制剂的种类,采用超滤法将其去除。经测定,固形物含量约10%的大豆糖蜜上清液中胰蛋白酶抑制剂活性约为5.05×105TIA·g-1蛋白,约为鲜豆奶的5倍。用截留分子量3 k Da的超滤膜将大豆糖蜜上清液中的大分子蛋白富集,通过还原-Tricine-SDS-PAGE分析,截留部分在图谱上显示为分子量约10 k Da的模糊的条带。通过用2%巯基乙醇还原再用NEM封闭游离巯基的方式处理样品,使得截留部分在电泳图上显示为分子量约7~8 k Da的两条清晰的条带。综合判断,大豆糖蜜上清液中主要含有Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂。通过对比超滤效果,选择用截留分子量10k Da的超滤膜截留胰蛋白酶抑制剂,能够得到无抑制活性的透过液。     

三步法分离纯化副干酪乳杆菌细菌素的初步研究

为了提高副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)HD wy-1细菌素的分离纯化得率和活性。本研究主要利用三步法从副干酪乳杆菌HD wy-1发酵液中分离纯化得到抑菌物质副干酪乳杆菌细菌素,分别采用硫酸铵沉淀、CM Sepharose Fast Flow阳离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶层析分离技术对副干酪乳杆菌HD wy-1产生的细菌素进行纯化。结果表明：细菌素得率为39.93%,比活为1.56×103 AU/mg,是纯化前的2.87倍,得到的细菌素样品经Tricine-SDS-PAGE电泳出现清晰条带,大小约为72 KDa。通过该方法可以较好的对副干酪乳杆菌的细菌素进行回收。该工作为研究菌体内细菌素的理化性质及其开发应用提供了理论基础。     

光裸星虫体腔液蛋白质图谱分析与含量测定

采用Tricine-SDS-PGAE及葡聚糖凝胶柱层析法对光裸星虫30个个体(雌雄各15个)体腔液中可溶性蛋白质成分进行初步分离,并用福林酚试剂法测定其含量.研究结果表明,光裸星虫个体的体腔液中可能含有的可溶性蛋白质或亚基分子量分别为29.97、28.57、27.10、12.67、11.69、6.20、5.72、5.04、4.06、3.73 kU,蛋白成分较简单.此外,光裸星虫体腔液中蛋白质的含量较高,平均高达4.012(±1.067)mg/mL.