硅藻土吸附固定化Bacillus sp.DL-2胞内蛋白酶拆分制备(S)-乙酸苏合香酯

[目的](S)-乙酸苏合香酯是手性药物合成的关键手性砌块,其在多种手性化合物的合成及医药、香料的工业生产中具有重要的作用.传统的化学合成手性化合物的方法需要有毒有机溶剂及重金属的参与,对环境及人类具有严重的危害,同时得到的手性化合物的光学纯度较低.与传统的化学合成相比,酶法选择性拆分消旋体化合物,具有高立体专一性和区域选择性、副反应少、产率高、产物光学纯度好以及反应条件温和的优点,是一种被广泛认可的拆分方法.实验表明,Bacillus sp.DL-2胞内蛋白游离酶可拆分制备(S)-乙酸苏合香酯,然而游离酶不易回收且稳定性差,将Bacillus sp.DL-2胞内蛋白游离酶制备成固定化制剂,克服了游离酶对环境敏感,稳定性不高的缺点,为工业化生产(S)-乙酸苏合香酯奠定了基础.[方法]酶的固定化方法主要有物理吸附法、离子结合法、共价结合法、交联法和包埋法.以吸附法固定酶,酶的构象很少改变,因此,酶的催化活力损失较少;且吸附法固定化操作过程简单,因此吸附法在经济上是最具吸引力的固定化方法.硅藻土由硅藻的细胞壁沉积而成,硅藻土表面的多孔性与负电性使其呈现明显表面吸附性,因而被常用做吸附载体.以硅藻土作为固定化载体,对Bacillus sp.DL-2胞内蛋白酶进行固定化,用以拆分制备高光学纯的(S)-乙酸苏合香酯.利用单因素实验优化,确定制备固定化酶的最佳固定化条件及制备(S)-乙酸苏合香酯的最佳拆分条件,并测定了制备的固定化酶对金属离子的敏感度及储存稳定性.[结果]最佳固定化条件为:温度40℃,pH为7,固定化时间10 h,载体添加量100 g/L.在最佳固定化条件下制备了固定化酶,优化确定了制备(S)-乙酸苏合香酯的最佳拆分条件为:固定化酶用量为160 mg/mL,拆分时间7 h,拆分温度30℃,缓冲液pH为7.[结论]在最佳固定化及拆分条件下,制备的(S)-乙酸苏合香酯e.e.值可达到96.8％,转化率为73.9％,且固定化酶对金属离子敏感度较低,对反应环境要求较低,适用于工业化生产.固定化酶在4℃条件下储存,随保存周数的增加,e.e.值及转化率均逐渐降低,但4周后e.e.值仍能达到90.1％,转化率保持在66.6％左右,具备较高的储存稳定性,为工业化生产(S)-乙酸苏合香酯提供了参考.     

三河马血液遗传标记的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对25匹三河马血清中白蛋白（ALB）、酯酶（Es)、α1-B糖蛋白（A1B）和维生素D结合蛋白（GC）进行了检测，结果发现：在4个位点中，白蛋白（ALB）和酯酶（Es)位点呈现多态性，其中在白蛋白（ALB）位点发现3个基因型，即AA、AB和BB，由等位基因ALB^A和ALB^B控制，其基因频率分别为0．40和0．60；在酯酶（Es)位点发现4个基因型，即FF、II、FI和IS，由等位基因Es^f,Es^I和Es^S控制，其基因频率分别为0．40，0．56和0．04，而α1-B糖蛋白（A1B）、维生素D结合蛋白（GC）2个位点均呈现单态性。     

漆树酶在漆酚树脂上的固定化研究

介绍了漆酚树脂吸附金属离子后对漆树酶的固定化方法，比较了Ｆｅ＾３＋和Ａｌ＾３＋、漆酚树脂和漆酚－水杨酸接枝树脂对漆树酶的固定化结果显示，漆酚－水杨酸－Ａｌ螯合树脂对漆树酶的固定化活力最高，测定了溶液ＰＨ，环境温度对固定化漆树酶活性的航固定化漆酶的重作用性。另外，测定了固定化漆树酶的米氏常数，Ｋｍ＝４．９×１０＾－３，并讨论了Ｋｍ小于天然漆树酶的米氏常数的原因。     

草菇杂交菌株的遗传分析与同工酶测定

在杂交菌株１２ｃｈ的９８９个后代单孢分离株中，Ⅲ型和Ⅳ型分别占总数的１／１６，Ａ型与Ｂ型的比例为１：１，气生型与非气生型的比例为１：１，正常菌丝类型占总数的１／４。综合比较亲本、配对的单孢菌株以及杂交菌株的酯酶、过氧化物酶和多酚氧化酶的同工酶，结果表明，单孢菌株不一定继承亲本的所有酶带，还可出现亲本所没有的酶带；杂交菌株的酶谱不同两亲本或两配对单孢菌株酶带的简单相加，它会出现新的酶带，这在一定程度     

利用酯酶染色对羊传染性脓疱皮炎病羊和免疫羊T淋巴细胞值的测定

淋巴细胞是机体重要的免疫细胞,按其免疫功能和细胞膜受体可分为 T 细胞和 B 细胞,而 T 细胞是细胞免疫的基础。T 细胞内有非特异性酯酶,在酸性条件下能将α-醋酸萘酯水解,产生醋酸离子和α-萘酚,α-萘酚与六偶氮斟品红偶联,在 T淋巴细胞浆中酯酶存在的部位生成不溶性红褐色沉淀物,在普通显微镜下将 T、B 细胞加以区别。羊患传染性脓疱皮炎时,抗体水平低下,各种凝集反     

白僵菌优良菌株筛选及其酯酶同工酶测定研究

球孢白僵菌孢子经二氧化碳激光器激光照射后,从其长出的31个单个菌落中筛选出11号强毒力菌株,经全省白僵菌厂生产应用证明,它具有提高产孢量25～33%,生产期短、林地杀虫效果比原株提高20%等优点。经测定11号强毒菌株的酯酶同工酶谱为9条酶带,其中强带、次强带、弱带各3条。激光照射菌株与出发菌株相比。其酯酶同工酶谱不同,有的酶带增多,酶活性增强,也有的酶带减少,酶活性减弱,或酶活性不变,而Rf值不同。     

桑蚕卵中酯酶A_4的研究

取产后两天内25℃保存的桑蚕卵为材料,精制酯酶A_4。将滞育卵中精制的酶液置5℃下冷藏,冷藏初期酶活性极低,大致在12～13日达最大值。以后迅速降低,体外保存的温度条件与酯酶A_4活性有关,较高的保存温度能促使酶活性峰提早出现:而低温保护能延缓酶的活化进程。酯酶A_4精制过程中,通过Sephadex G-25凝胶过滤,将大部分物质分段与酶分离排除,在5℃条件下,酶活性峰出现以前的任何时候加入排除分段物质,都可以停止酶的活性化,只有当重新除去所加的排除分段物质时,酶的活性化进程才得以继续。