基因工程抗菌肽表达条件的优化及生物活性试验

探讨表达条件对重组抗菌肽表达量和抗菌活性的影响.选用SMD1168毕赤酵母菌株表达cecropinB及其串联体基因和cecA-mag(cecropin A前8个碱基和magainin的第9个碱基)的3个突变体基因抗菌肽.对6种重组酵母菌的摇瓶发酵条件,如pH、发酵温度、甲醇的添加量等进行了优化,结果优化后的表达条件可提高重组抗菌肽的表达量和抗菌活性.并从抑菌试验、酸碱稳定性试验、热稳定性试验、体外稳定性试验探讨了其生物学活性.     

抗菌肽基因在毕赤酵母中分泌表达及其条件优化

用化学合成法合成了以酵母偏爱密码子编码的抗菌肽cecropinA(1-8)-melittin(1-18)基因片段,合成片段与酵母表达载体pPIC9K重组,构建胞外分泌表达载体pPIC9K-came,电击法转化毕赤酵母(Pichiapastoris)SMD1168宿主菌,对CAME抗菌肽重组酵母菌的摇瓶发酵条件进行了优化。结果表明,酵母表达抗菌肽具有抗菌活性且溶血活性显著降低;重组酵母在含2%葡萄糖pH7.0的YPD培养液中,250r/min震荡培养24h后,重组酵母菌的A600为6.0时,经0.5%甲醇在28℃条件下诱导48h能够诱导产生较高抗菌活性的抗菌肽。     

斯达氏油脂酵母高产油发酵培养条件的优化

【目的】通过摇瓶发酵,对斯达氏油脂酵母的产油发酵条件进行优化。【方法】利用单因素试验,确定最佳碳源、氮源、初始pH值、无机盐的质量浓度;利用4因素3水平正交试验,优化碳源质量浓度、氮源质量浓度、接种量、培养温度等参数;同时考察发酵时间对斯达氏油脂酵母生长及油脂产量的影响。【结果】单因素试验结果表明,以葡萄糖为碳源时,斯达氏油脂酵母发酵生物量及油脂产量明显高于其他碳源;以(NH4)2SO4为氮源时,则生物量、油脂产量均最高;最佳初始pH值为6.0~6.5;无机盐离子的最适添加质量浓度为:MgSO4.7H2O 1.5 g/L,KH2PO43.0 g/L。碳源质量浓度、氮源质量浓度、接种量、培养温度4因素3水平正交试验的极差分析结果表明,培养温度对斯达氏油脂酵母的生物量和油脂产量的影响最大。斯达氏油脂酵母发酵培养基的最优组合为:葡萄糖90g/L,(NH4)2SO43.5 g/L,接种量10%,培养温度28℃。在摇瓶发酵过程中,发酵培养144 h时菌体生物量、油脂产量均最高,OD600值也较高。【结论】在优化条件下对斯达氏油脂酵母进行摇瓶发酵,获得的菌体生物量最高可达16.35g/L,较优化前提高了25.19%;油脂产量为4.94 g/L,较优化前提高了97.84%;菌体含油率最高可达302.1 g/kg。     

L-丝氨酸摇瓶条件的优化

以基因工程菌株Brevibacterium flavm C-11A 为L-丝氨酸产生菌,研究L-丝氨酸的摇瓶发酵条件,确定了菌体活化方式,并通过单因素确定了摇瓶发酵条件为:酵母膏浓度为14 g/L, 缓冲剂为KH2PO4,碳氮比为10:3.     

钾细菌K906培养特征及液体深层发酵研究

本文对分离的钾细菌K906的一般固体培养和液体深层发酵特性及配方进行了研究.表明K906菌株在无氮培养基上形成荚膜.在有氮培养基上不形成荚膜.而形成许多短小杆菌和孢子,且生长大大快于无氮培养基.达10倍以上.K906菌株利用可溶性淀粉作碳源.在培养基中加入酵母能大大促进钾细菌的生长;3-4d摇瓶培养高峰菌数达10×108个/ml.1000L发酵罐淀粉氨溶液深层培养8批次.发酵周期40-60h.放罐菌数平均达18,9×108个/n1l.适合工业化生产.