外源H2O2对沙打旺抗黄矮根腐病的影响

本研究以沙打旺抗病和感病品种为材料,接种埃里砖格孢孢子悬浮液后分别施加外源H₂O₂及其清除剂AsA,通过统计发病率、病情指数及测定POD、PPO、CAT、SOD、Glu和Cht六种病程相关蛋白酶活性,研究H₂O₂对沙打旺抗黄矮根腐病的影响。结果表明,接种埃里砖格孢后2种沙打旺H₂O₂含量高于未接种植株,且感病品种在38 h H₂O₂含量最高,为929 μmol/g,抗病品种最高值出现在24 h,为986 μmol/g。抗病、感病沙打旺发病率、病情指数在H₂O₂处理后最低,施加AsA最高。H₂O₂处理各种酶活性都有不同程度的增加,且对抗病品种酶活性提高大于感病品种,表明外施H₂O₂可以减缓沙打旺黄矮根腐病的发生和侵染。表明H₂O₂与沙打旺抗病性紧密相关,并通过调节病程相关酶活性来增强沙打旺对黄矮根腐病的抗性,减少侵染率。     

大蒜蒜头黑腐病病原菌鉴定

在陕西关中大蒜产区发现了一种大蒜新病害——蒜头黑腐病,依据柯赫氏证病律进行了病原菌鉴定。由发病蒜瓣分离到一种国内未报道的病原真菌Embellisiaallii(Campanile)Simmons。该菌在PDA平板上菌落灰黑色,边缘整齐;分生孢子梗屈膝状弯曲,有分枝,孢痕明显;分生孢子单生,暗色,椭圆形或近圆柱形,正直,少数弯曲,呈S形或Y形,有暗褐色横膈4～10个,纵膈或斜膈0～2个。孢子大小(30～56)μm×(10～17)μm,表面光滑或微粗糙。用分离菌接种蒜瓣,引起黑腐症状,与自然发病相同。该菌为中国新记录种。     

沙打旺黄矮根腐病在我国北方5省区的分布与危害

对5省(区)沙打旺主产区进行了病害调查,除辽宁建平之外,沙打旺黄矮根腐病在甘肃环县、宁夏盐池、陕西横山、内蒙松山和敖汉均有发生,发病率为5.7％～82.6％,病情指数为2.7~53.7。各级严重度的植株在病株中的比例因调查地点而异。与健康植株比较,病株枝条数增加16.7％～63.7％,但单株干重下降8.5％～32.9％。各地的植株密度、牧草产量、平均枝条数和单株干重均存在一定差异,其中在发病率最高的甘肃环县,植株密度、牧草产量分别与发病率和严重度均呈显著负相关(P<0.01)。对影响发病率的因素进行了分析讨论,提出了防治该病的建议。     

棘豆蠕孢菌发酵液中次级活性产物分离纯化初探

[目的]为寻找具有合成与宿主植物相同或相似活性成分能力的内生真菌奠定理论基础。[方法]利用布氏漏斗抽滤将菌丝体和发酵液分开,通过预处理除去发酵液中的杂蛋白、色素、高价金属离子和多糖,然后用大孔树脂分离发酵产物并利用硅胶柱层析进行纯化,最后通过红外光谱检测确定样品与宿主植物成分为同一类生物碱。[结果]样品在改良碘化铋钾的作用下呈橘红色斑点,在Ehrli-ch’s显色剂作用下呈紫红色斑点,两者的Rf值均为0.78。水洗脱段对3种沉淀试剂均呈阴性反应;醇水混合段对碘化铋钾呈阴性反应,对苦味酸和鞣酸呈阳性反应;醇洗脱段对3种沉淀试剂均呈阳性反应。鉴定结果表明所分离的样品为羟基取代吲哚里西啶类生物碱。[结论]内生真菌棘豆蠕孢菌具有合成与其宿主植物甘肃棘豆相同或相似活性成分的能力。     

中国油菜内生真菌一新记录种—垣孢埃里砖隔孢

报道了一个中国新记录种—垣孢埃里砖隔孢(EmbellisiachlamydosporaSimmons),该种为从油菜(BrassicanapusL.)中分离到的一种内生真菌。文中对垣孢埃里砖隔孢的形态特征作了描述,并附有形态图。     

药用植物提取液对沙打旺黄矮根腐病菌的抑菌活性及对其种子萌发的影响

为给植物源杀菌剂防治沙打旺黄矮根腐病菌(Embellisia astragli)提供理论依据,采用生长速率法和凹玻片法测试15种药用植物以及大蒜(Allium sativum)、变绿马铃薯(Solanum tuberosum)和核桃青皮 (Juglans regia)3种植物提取液对沙打旺(Astragalus adsurgens)黄矮根腐病菌的离体抑菌活性的影响,并测定抑制效果最好的植物提取液对沙打旺种子萌发活性的影响.结果表明:防风(Saposhnikovia divaricate)、大蒜、核桃青皮3种植物提取液对沙打旺黄矮根腐病原菌具有显著的抑菌作用(P <0.05),抑菌率均达100%,对病原菌孢子萌发抑制力较强, 孢子萌发抑制率均达85%.防风、大蒜、核桃青皮3种植物提取液原液对沙打旺种子萌发具有显著抑制作用(P <0.05),种子的发芽势和发芽率均在50%以下.说明防风、大蒜和核桃青皮的提取液对沙打旺黄矮根腐病田间防治有一定应用前景,但在沙打旺播种时不宜使用其提取液进行药剂拌种.     

西藏3种疯草中合成苦马豆素内生真菌的鉴定

 【目的】从西藏毛瓣棘豆、冰川棘豆、茎直黄芪中分离内生真菌。【方法】应用薄层色谱法、气相色谱、气相色谱-质谱联用法检测内生真菌中的苦马豆素（swainsonine,SW）,筛选可生成SW的内生真菌;应用聚合酶链反应对真菌的ITS序列和IGS序列进行扩增,并根据ITS序列信息构建系统发育树,确定其种属分类;对IGS序列进行限制性酶切,并分析酶切产物。【结果】从3种疯草中分离到可以产生SW的4株内生真菌,各菌的形态、ITS序列的同源性与埃里格孢属真菌较为接近,系统发育分析表明4株真菌均为棘豆埃里格孢菌。ITS序列和IGS序列的限制性片段的分析表明,4株真菌遗传距离较近,但仍存在种间变异,可能为棘豆埃里格孢菌的不同亚种。【结论】本研究结果为探讨内生真菌合成SW机理研究奠定了基础,为动物疯草中毒病的防除和疯草资源的合理利用提供了新思路。     

基于gpd基因的大蒜黑腐病菌实时荧光定量PCR鉴定技术

【目的】大蒜黑腐病菌（Embellisia allii (Campanile) Simmons）的检疫鉴定主要采用形态鉴定方法。不仅耗时长,而且大蒜黑腐病菌与本属其他种以及其他属的分生孢子非常相似,极难分辨,需要建立快速、有效的分子诊断方法。研究旨在建立实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)体系以准确、灵敏地鉴定大蒜黑腐病菌。【方法】从NCBI的GenBank数据库中,选取大蒜黑腐病菌和其他大蒜病害以及近似种的3-磷酸甘油脱氢酶（gpd）基因核酸序列数据15种,应用引物设计软件Primer express,根据探针设计原则从理论上选出1条探针和3对引物。根据试验结果对上述引物进行筛选,筛选出能够鉴定出大蒜黑腐病菌的特异性引物对和TaqMan探针。同时对反应体系中复性-延伸温度的反应参数进行优化,设计56、58、60℃ 3个温度梯度;将大蒜黑腐病菌基因组DNA在紫外核酸分析仪上进行定量后进行10倍的梯度稀释,对探针灵敏性进行测试,从而建立大蒜黑腐病菌TaqMan水解探针法qPCR检测体系。【结果】从基于GenBank上的15种gpd基因核酸序列设计的引物和探针中,筛选出能够鉴定大蒜黑腐病菌的特异性引物对Emb21/Emb32和TaqMan探针Emb。在供试的6种菌株中,只有靶标菌大蒜黑腐病菌利用该引物对和探针能够被特异性的检测到阳性,空白对照和其他参试菌均没有荧光信号的增加,检测为阴性。复性-延伸温度反应参数优化中,△Rn荧光信号增加值在58℃时达最大,56、60℃荧光信号增加值降低,经过多次重复试验,确定最佳的复性-延伸温度为58℃。灵敏度测试中,大蒜黑腐病菌DNA浓度稀释到140 pg时,所得的图形较好;当体系中模板浓度稀释到14 pg时,所得的图形较差。最终DNA检测灵敏度为140 pg。应用该引物和探针建立的qPCR检测方法能够从供试的菌株中特异性地检出大蒜黑腐病菌。【结论】建立了大蒜黑腐病菌TaqMan探针法qPCR检测体系,该检测技术能够从供试的6种病原菌中特异性检测出大蒜黑腐病菌,检测灵敏度可达140 pg。建立的基于gpd基因的大蒜黑腐病菌qPCR方法具有高度的特异性和灵敏度,适合口岸大蒜黑腐病菌的快速检测。     

埃里砖格孢属真菌的研究进展及展望

埃里砖格孢属设立于1971年,由于具有重要经济价值的菌种不多,而研究较少。但随着一些重要病原菌和内生真菌在该属中的相继发现,近年来越来越多地受到重视。为便于今后开展相关研究,本研究就其形态学、生物学、生理学、生态学及经济意义等方面的研究进展进行了综述,并对将来可能进行的研究进行了展望。埃里砖格孢属真菌的形态特征与蠕形菌类(长蠕孢属、弯孢菌属、凹脐蠕孢属等)和暗色丝分砖格孢子类真菌(匍柄霉属、密格孢属、假格孢属、顶格孢属、链格孢属和单格孢属等)具有很多相似之处,但分生孢子具有宽而厚的隔膜是其最主要的鉴定依据。目前报道23个种,分布在各式各样的生境下,其中21个种分布在13个科的植物根际、根部或茎叶上,我国有5个种。本属中具有重要经济意义的种有2类,一类为植物病原菌,影响大蒜、风信子等作物产量和品质,或引起沙打旺草地早衰;另一类为疯草内生真菌,增加疯草(Astragalusspp.,Oxytropisspp.)毒性,导致家畜中毒。疯草内生真菌可产生的具有重要医用价值的苦马豆素。分子生物学技术已证明埃里砖格孢具有多态性,与匍柄霉亲缘关系比与假格孢属、链格孢和单格孢的亲缘关系远。控制疯草内生真菌的毒害是畜牧业生产中亟待解决的问题。埃里砖格孢的遗传多样性分析、新种寻找和有性态研究,以及苦马豆素的产生机制等研究将是近期主要的研究方向。     

沙打旺黄矮根腐病菌钙调素基因的克隆

沙打旺埃里砖格孢(Embellisia astragali)引起的黄矮根腐病是造成沙打旺(Astragalus adsurgens)草地退化最严重的病害之一。钙调素是Ca2+介导的信号通路中重要的分子。本研究旨在从沙打旺埃里砖格孢中克隆钙调素编码基因序列。以基因组DNA为模板,采用简并引物CAL-228F和CAL-737R扩增得539bp的同源片段;采用Hi-TAIL PCR分别获得344bp的5′侧翼序列和729bp的3′侧翼序列,拼接获得基因的1 290bp的全长DNA序列;利用全长引物CaMF和CaMR,得到840bp的DNA全长序列和450bp的cDNA全长序列,DNA全长序列中有4个内含子,均具有典型的AT-AG特征,cDNA全长序列翻译出149氨基酸多肽。