正交设计优化青蒿SRAP-PCR反应体系及引物筛选

为了建立青蒿的SRAP最佳扩增体系,并筛选出SRAP多态性引物,本研究以青蒿叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg^2+、dNTP Mix、Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板5种因素5个水平,对青蒿SRAP反应体系进行研究。结果表明,青蒿SRAP-PCR最佳反应体系为:引物0.6μmol/L、Mg^2+2.0 mmol/L、模板DNA 5.1 ng、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs 0.25 mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应均有不同影响,其中引物浓度的影响最大,dNTPs的影响最小。运用该体系对不同种质资源的青蒿进行验证,证明该体系稳定可靠,并在30个引物组合中筛选出了25对扩增条带清晰,多态性丰富的引物组合。这一结论为今后利用SRAP标记技术进行青蒿分子遗传学研究提供了科学依据。     

鸡Prnp基因原核表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

试验旨在构建鸡Prnp基因原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达,为制备鸡朊蛋白单克隆抗体提供材料。根据GenBank已报道的鸡Prnp基因组序列和pET-28a质粒多克隆位点设计引物,以健康的鸡全血基因组DNA为材料,采用PCR的方法扩增鸡的Prnp基因,将目的基因片段与pET-28a载体连接,构建重组原核表达载体。重组菌转化到E. coli BL21(DE3)感受态细胞中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达的重组蛋白。结果表明,重组蛋白在诱导剂的终浓度为0.08 mmol·L^-1,16 ℃,220 r·min^-1诱导7 h,蛋白表达量最高。综上所述,本研究成功构建了pET-28a-ChPrnp重组表达菌株,为Prnp朊蛋白的结构、生理功能和致病机制研究提供方法。     

问题式学习教学模式在动物组织学与胚胎学课程的初步探索

PBL(problem-based learning)也称问题式学习,即把学习设置于复杂的、有意义的问题情境中,通过让学生以小组的形式合作解决实际问题。动物组织学与胚胎学作为重要的专业基础课程,将PBL教学模式初步应用于教学环节,取得了一定效果,也带来了一些挑战。本文旨在探讨PBL教学法在形态学教学中的优越性及现阶段存在的问题。     

新生与成年牦牛咽扁桃体的组织学和免疫组织化学比较

咽扁桃体(pharyngeal tonsil,Pha T)属于粘膜相关淋巴组织,在呼吸道的粘膜免疫中起重要作用,免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)和免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)是粘膜免疫的两个重要效应分子,具有广泛的免疫学功能。为了研究牦牛(Bos grunniens)咽扁桃体发育过程中组织学结构的变化,以及IgA与IgG抗体分泌细胞(antibody secreting cells,ASCs)在其内部的分布特征和变化规律,本研究采用组织学方法对新生与成年牦牛咽扁桃体的组织学结构进行观察比较;免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测IgA和IgG在新生与成年牦牛咽扁桃体内的表达情况。组织学结果显示,牦牛咽扁桃体上皮由非网状上皮和网状上皮构成,实质由淋巴滤泡和弥散淋巴组织组成,弥散淋巴组织中分布有大量的高内皮静脉和淋巴管。新生牦牛咽扁桃体内仅观察到少数的初级淋巴滤泡,而成年牦牛咽扁桃内以次级淋巴滤泡为主,且成年组淋巴滤泡数量远高于新生组(P0.01)。免疫组织化学结果显示,两个年龄段IgA和IgG ASCs在非网状上皮下区域、网状上皮区域、滤泡间区、淋巴滤泡和腺体间均有分布,且均在非网状上皮下区域分布最高;单位面积内,两个年龄段IgG ASCs的平均数目均高于IgA ASCs,且成年组两者之间差异极显著(P0.01),而新生组两者差异不显著(P0.05)。结果表明,牦牛咽扁桃体在新生阶段已形成初级淋巴滤泡;IgA和IgGASCs主要通过非网状上皮下区域到达粘膜外表面发挥免疫保护作用;两年龄段IgG ASCs在数量上均占优势,说明IgG可能在牦牛咽扁桃体免疫防御作用中处于主导地位。本研究为牛呼吸道粘膜免疫及相关疫病的发病机理提供了形态学和免疫学资料。     

塞内卡病毒和口蹄疫病毒二重实时荧光RT-PCR鉴别检测方法的建立

为了建立一种快速、敏感、特异的能够鉴别诊断口蹄疫病毒(FMDV)和塞内卡病毒(SVV)二重实时荧光RT-PCR方法,根据FMDV及SVV的保守基因序列,设计了2套特异性引物和不同荧光素标记的MGB探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了FMDV和SVV二重实时荧光RT-PCR检测方法,并对二重实时荧光RT-PCR检测方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对98份疑似FMDV和SVV感染的临床样品进行了检测。结果显示,成功建立的FMDV及SVV二重实时荧光RT-PCR检测方法,模板在10~1～10~7拷贝/μL有很好的线性关系;对pGEM-T/FMDV和pGEM-T/SVV重组质粒出现阳性扩增信号,但对正常细胞培养物对照和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线,方法特异性较好;最低检测模板浓度为10拷贝/μL;自98份疑似FMDV和SVV感染样品中检出9份FMDV阳性,10份SVV阳性,2份FMDV和SVV双阳性,并且和克隆测序结果一致。本研究建立的FMDV及SVV二重实时荧光RT-PCR检测方法,可用于FMDV和SVV的快速鉴别检测,为FMDV和SVV的鉴别诊断提供特异、敏感和高通量的方法。     

鸡传染性法氏囊病的预防及治疗

近年来,随着集约化、半集约化养殖鸡业的迅速发展,鸡传染性法氏囊病(IBD)严重危害了养鸡业的发展,如今本病作为危害养禽业的三大主要疫病之一,呈世界性分布。本文就一起鸡传染性法氏囊病的典型病例,根据临床症状、病理学检查、病毒分离鉴定、血清学诊断、动物接种试验,对该病进行了确诊,并运用中兽医和西药结合的治疗原则,免疫接种高免卵黄液的防制措施。     

中西医结合治疗羔羊痢疾

羔羊痢疾是新生绵羊羔的一种急性接触性毒血症,由B型魏氏梭菌引起的一类具有传染性的疾病。特征为病程短促,下痢,在小肠上形成溃疡。农户对羔羊痢疾病统称为＂羔羊痢疾＂,对有血便的病例叫做＂血肠子＂,对便中无血的腹泻病例称为＂拉稀病＂。在防治本病时针对不同的病因采取中西医结合治疗措施,才能得到好的治疗效果。     

栀子、龙胆、茵陈水煎剂对獭兔胆汁分泌和胆囊平滑肌运动调节研究

为了研究栀子、龙胆、茵陈水煎剂对獭兔胆汁分泌和离体胆囊平滑肌肌条运动的影响，通过对獭兔实施胆管插管术，建立胆汁引流模型，应用 BL-420E 生物机能实验系统观察记录上述中药对胆汁分泌的影响；并取獭兔胆囊平滑肌，应用 HW-400S 恒温平滑肌槽和 BL-420E 生物机能实验系统，观察记录上述中药对胆囊平滑肌运动的影响。结果显示，栀子水煎剂可显著增加胆汁的分泌（P ＜0．05）和胆囊平滑肌收缩张力（P ＜0．05）；龙胆和茵陈水煎剂可显著增加胆汁的分泌（P ＜0．05），但对胆囊平滑肌收缩张力作用不显著（P ＞0．05）。说明栀子、龙胆、茵陈水煎剂均可促进獭兔胆汁分泌，且栀子可提高胆囊平滑肌收缩张力，但龙胆、茵陈水煎剂对胆囊平滑肌收缩张力影响不显著。     

柴达木盆地剖检牦牛体内寄生虫检查

<正>德令哈市位于柴达木盆地东北边缘,平均海拔2 980 m。东与天竣、乌兰县相邻.西与大柴旦镇接壤,北与甘肃省肃北县毗邻,南与都兰县相连。总面积为32 401 km2,辖有蓄集、宗务隆、怀头他拉、戈壁、郭里木5个乡。辖区还有德令哈、尕海、怀头他拉、巴音河4个州属国有农场。该市畜牧业寄托上述乡(镇)和农牧场"绿洲"的半荒漠草场放牧和饲养特色。由于德令哈市的特殊地理位置对青海省牦牛寄生虫调查研究有重要意义,所以对该市牦牛寄生虫感染情况进行了调查,报告如下。     

阿拉善驼妊娠前后卵巢差异蛋白质组学分析

为了比较阿拉善双峰驼妊娠前后卵巢中差异表达的蛋白质,采集非繁殖季节未妊娠和妊娠期阿拉善驼卵巢,运用双向电泳技术构建双峰驼卵巢蛋白质凝胶电泳图谱,凝胶经考马斯亮蓝染色后,用PDQuest 8.0软件检测3倍以上的表达变化的蛋白点。结果表明在两组样品中共检测到10个差异蛋白点,这些蛋白点经MALDI-TOF/TOF-MS鉴定为8种蛋白质,包括谷胱甘肽S-转移酶、过氧化物酶-6、丙酮酸激酶同工酶M1/M2异构体1、纤维蛋白原β链前体、核纤层蛋白A/C转录物变异体1、视黄醛脱氢酶1和一种未命名的蛋白质。其中核纤层蛋白A/C转录物变异体1仅在未妊娠卵巢中表达,视黄醛脱氢酶1在双峰驼妊娠卵巢组织中表达量下降,而其他蛋白质在妊娠卵巢中表达量增加。这些差异表达蛋白质的发现为了解双峰驼妊娠期卵巢的生理机制奠定了基础。