T-RFLP指纹图谱技术分析细菌型微生物肥料菌种稳定性

[目的]建立一种分析微生物肥料菌种稳定性的T-RFLP指纹图谱技术。[方法]采用T-RFLP指纹图谱技术对进口细菌型微生物肥料菌种的稳定性进行分析。[结果]样品中优势菌的T-RFs片段主要是87、246、247、330 bp,其中330 bp为主要片段,Shannon多样性指数和均一性指数测定结果表明,不同批次产品间差异性较小,微生物群落结构较稳定。[结论]建立了微生物肥料菌种稳定性分析的T-RFLP指纹图谱技术,为进出口微生物肥料产品提供了一种快速分析方法。     

基于多重串联式PCR的基因碟片技术检测转基因作物

【目的】建立基于多重串联式PCR（multiplexed tandem PCR,MT-PCR）的基因碟片技术,并使之应用于转基因作物的大量、快速和稳定地检测。【方法】以转基因作物研究中常用的调控序列NOS终止子、FMV35S启动子及外源基因NPTⅡ、Cry1Ab、Cry1Ab/Ac、CP4-EPSPS、PAT和玉米内源基因IVR、棉花内源基因sad1、菜籽粕内源基因PEP为检测对象,针对每个基因设计内外2对引物,先进行一次循环数较少（10-20 cycles）的高通量多重PCR,以便在均匀地扩增各基因和调控序列的同时避免引物之间的竞争,然后利用巢式荧光定量PCR检测各个基因和调控序列,最后根据扩增曲线和熔融曲线分析结果。【结果】该方法能够快速（＜2 h）、高通量、准确地（＞0.000292 ng）检测出棉花、玉米、大米、菜籽粕中的多种转基因成分,可以分辨出3种转基因物种,适合大批量检测。【结论】该方法适合转基因作物的高通量、定量检测,具有较好的应用前景。     

基于DPO引物的实时荧光PCR检测微生物肥料中的鼠李糖乳杆菌

【目的】建立一种快速、准确的鼠李糖乳杆菌检测方法。【方法】根据已报道的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)的gyr B基因保守序列,设计用于检测鼠李糖乳杆菌的特异性DPO引物,结合SYBR Green I实时荧光PCR技术,建立鼠李糖乳杆菌的实时荧光PCR检测方法,评价其特异性和灵敏度,并将建立的检测方法用于实际样品的检测中。【结果】该方法对2株鼠李糖乳杆菌能得到阳性扩增,而其余10种乳酸菌及阴性对照没有扩增曲线,而且在退火温度为50~60℃不影响其特异性;该实时荧光PCR检测灵敏度比农业部标准中普通PCR检测高10倍;用10种微生物肥料及其它益生菌产品进行了验证,检出情况与产品标识一致。【结论】研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR能够准确、高效的检测微生物肥料及其他益生菌产品中的鼠李糖乳杆菌。     

金桔罐头加工工艺的优化

以新鲜桂林金桔为原料,通过单因素和正交试验进行了金桔罐头配方和工艺优化研究。结果表明,金桔在清洗、去蒂后,从蒂节周围刺进4个1.5 cm深的小孔,在沸水中热烫5 min,能较好的去酸、防止果实破裂。选取氯化钙、柠檬黄、柠檬酸、糖液浓度做正交试验,对正交试验结果进行方差分析和多重比较。结果表明,0.40%氯化钙、0.15%柠檬黄、0.20%柠檬酸和18%糖液加工的金桔罐头色泽光鲜、风味较好、酸甜可口。     

基因编辑作物的发展及检测监管现状

随着以ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9技术为代表的基因编辑技术的不断发展,越来越多的基因编辑作物不断问世,围绕着基因编辑作物的监管态度和检测技术将成为新的问题。笔者简要介绍了目前运用基因编辑技术培育的基因修饰作物的现状,并以ZFN技术为代表,分析了世界上有关国家对基因编辑作物的监管态度,并针对基因编辑作物检测可能存在的问题进行了分析。旨在为我国未来可能出现的基因编辑作物进出口的监管和检测工作提供参考。     

绿豆芽保鲜与细胞壁自溶机理分析

为探究绿豆芽保鲜与细胞壁自溶的关系,通过不同温度贮藏、阿魏酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液(质量浓度均为0.1 g·L~(-1))分别处理后贮藏,分析绿豆芽相关理化指标及保鲜效果的差异。结果表明:不同温度贮藏时,绿豆芽的新鲜状态与温度密切相关,其中,4℃和10℃贮藏的绿豆芽前60 h均维持较好的新鲜状态,20℃和25℃贮藏的绿豆芽前24 h较新鲜,30℃贮藏的绿豆芽在24 h时新鲜状态不可接受;绿豆芽下胚轴横切面随着贮藏时间的延长会出现明显的中空结构,且新鲜状态越差,中空面积越大;绿豆芽中纤维素和果胶质量浓度分别与纤维素酶及果胶酶活性高度相关(P0.01),纤维素酶和果胶酶活性的变化是影响绿豆芽细胞壁自溶的重要因素。阿魏酸及EDTA处理均能抑制绿豆芽中纤维素酶和果胶酶的活性,延迟绿豆芽下胚轴中空结构的形成,缓解细胞壁自溶,有助于绿豆芽保鲜;与对照组相比,EDTA及阿魏酸处理的绿豆芽25℃贮藏保鲜期可分别延长12 h、24 h。绿豆芽新鲜度下降时伴随着细胞壁自溶,通过抑制细胞壁水解酶活性,能有效延长贮藏保鲜期。     

酵母菌发酵半干罗非鱼挥发性成分分析

采用顶空-固相微萃取(HS-SPME)技术结合气相色谱-质谱(GC-MS)技术对未发酵半干罗非鱼和经酵母菌发酵半干罗非鱼中的挥发性物质进行研究,优化了固相微萃取的条件.结果显示:样品在50℃条件下.采用聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯(PDMS/DVB)涂层的萃取头萃取50 min,可得到较好谱图.通过气相色谱-质谱分析,在未发酵罗非鱼与酵母菌发酵罗非鱼中分别检测出74,59种挥发性物质.酵母发酵半干罗非鱼与未发酵半干罗非鱼的挥发性物质有显著差异.酵母发酵半干罗非鱼中苯乙醉相对含量明显高于未发酵半干罗非鱼.     

高铜、高锌饲养对仔猪肠道菌重金属耐受性的研究

本实验利用EMB和MRS培养基从饲喂高铜、高锌饲料的仔猪粪便中筛选耐受重金属铜、锌的大肠杆菌和乳酸杆菌,分别通过生理生化和16S rDNA测序方法进行菌株鉴定,同时测定硫酸铜和硫酸锌对抗性菌株的最低抑菌浓度(MIC)。实验结果表明,喂养高铜高锌饲料的仔猪生长状况优于对照组,粪便中铜锌的排泄量是正常喂养对照组的5～10倍。最终筛选到66株抗铜、44株抗锌大肠杆菌和8株同时对铜、锌高耐受性的乳酸杆菌。其中抗性大肠杆菌中对铜的MIC为9 mmol/L,对锌的MIC为6 mmol/L;8株乳酸杆菌中对铜的MIC为25 mmol/L,对锌的MIC达到150 mmol/L。     

二重荧光定量PCR检测转基因大豆DAS81419

本文针对大豆内源基因Lectin和转基因大豆DAS81419品系的5′端插入位点序列,设计特异性引物及探针,建立了同时检测转基因大豆DAS81419品系和大豆内源基因Lectin的二重荧光定量PCR方法,运用15种转基因大豆、3种转基因玉米、1种转基因油菜、1种转基因水稻和非转基因大豆对该方法进行了特异性评价,并分析了该方法的灵敏度和稳定性。结果显示,该方法能准确从20种转基因样品和1种非转基因样品中检出靶目标,检测结果与待检样品信息一致,表明本方法具有良好的特异性;灵敏度高达0.01%;并具有良好的重复性。该方法特异性强、灵敏度高、稳定性强,适用于各口岸实验室进行转基因大豆DAS81419的快速、准确的检测。     

多重PCR检测转基因菜籽粕中的转基因成分

以油菜内源基因PEP、抗除草剂基因(BAR、PAT)、筛选基因NPTII、常见启动子(CaMV35S、FMV35S)和终止子NOS为检测对象,通过研究不同引物终浓度的配比以及退火温度对转基因菜籽粕多重PCR检测的影响,建立了菜籽粕转基因成分7重PCR检测体系。结果表明,本研究所建立的检测体系能有效检测出菜籽粕以及其他作物(大豆、玉米、大米、棉花籽)中的转基因成分,检测过程简便、准确,值得推广应用。