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琯溪蜜柚黄龙病病原的克隆及序列分析 总被引:1,自引:2,他引:1
Guan溪蜜油是中国大陆柚类中的优质品种。近年来,在福建省的产地发现Guan溪蜜油叶片表现斑驳的病树,其叶片斑驳与柑桔黄龙病的叶片病状十分相似。据实验结果证明:该病能通过病梢嫁接传染到柚和柑桔的健苗;在电镜下观察到病株韧皮部寄生着大量BLOs,其形态和构造均与柑桔黄龙病病原(Liberobacter asiaticum)相似,经PCR扩增与Southern Blot分子杂交测定,表明该病原DNA PCR产物与柑桔黄龙病病原PCR产物之间具有很高的同源性。初步认为该病很可能是柑桔黄龙病引起的。为了进一步明确该病与柑桔黄龙病的关系,对病原DNA片段进行扩增、克隆和序列分析,并与柑桔黄龙病病基因相应序列进行比较,结果表明该病原与亚洲柑桔黄龙病病原(Lasiaticum)相应基因序列的同源率达94.2%,而与非洲柑桔黄龙病病原(L.africa num)的同源率仅为75.0%。进一步证明Guan溪蜜油叶片斑驳是柑桔黄龙病引起的,其病原是L.asiaticum中的一个成员。 相似文献
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柑桔黄龙病病原物提纯方法和血清学的初步研究 总被引:6,自引:0,他引:6
从感染柑桔黄龙病的长春花中,用0.1mol/L MgCl_2—0.5mol/L甘露醇-0.6mol/L甘氨酸的混合溶液作黄龙病病原物(YSO yellow sbootO rgancism)分离溶液(pH7.4),然后用纤维素酶酶解法和差速离心相结合的提纯程序,反复试验结果表明该提纯方法重复性稳定,黄龙病病原物(YSO)的提纯产量较高,完整性较好,内外结构清晰。用提纯液备制小鼠腹水抗体,得到微量沉淀反应效价为1:640,环状界凝集反应效性为1:8,免疫电镜效价1:320,琼脂双扩散反应阴性,对照为阴性反应,从而认为YSO具有特异抗原性。 相似文献
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柑桔黄龙病(国际上称为柑桔青果病)的诊断,目前还是主要依靠症状和电镜超薄切片法,前者易引起误诊,后者操作复杂,费时,并且由于在病株中病原细菌(或称类细菌、类立克次氏体等)浓度低,分布不均匀,造成检出率低,故十分需要寻找一种快速可靠的诊断方法,借鉴于植物病毒成功地利用血清学方法作诊断。我们试图也用血清学方法对本病进行早期快速诊断。利用血清学作诊断首先必须解决病原提纯问题,这就是本试验的目的。 相似文献
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应用多聚酶链式反应(PCR)技术检测和定量分析柑桔黄龙病病原 总被引:37,自引:2,他引:37
应用多聚酶链式反应(PCR)技术对柑桔黄龙病病原进行检测和定量分析。研究结果表明:PCR技术能准确、快速地检测出田间和温室内罹病的柑桔、长春花以及带菌柑桔木虱样本中的柑桔黄龙病病原(BLO),而健康植株和柑桔木虱样本则呈阴性反应。采用的PCR引物(Primers)是根据柑桔黄龙病病原亚洲株系的DNA序列(In-2.6,基因库号码:M9491)设计的。应用竞争性定量多聚酶链式反应(Q-PCR)方法能测定病原在不同样品中的含量。该技术关键在于:病原DNA和浓度系列稀释后的竞争物DNA,在同一试管中进行DNA扩增反应时,共用相同的引物。由于彼此互相竞争反应引物的结果,病原的PCR产物和竞争物的PCR产物在数量上呈反向线性相关。因竞争物的浓度为已知,便可从线性关系中推算出病原的含量。 相似文献
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