人源H3N2亚型猪流感重组病毒的分离鉴定及全基因序列分析

本研究由疑似猪流感病料样品中分离一株病毒,通过HA、HI、电镜观察、生物学特性测定及全基因序列测定表明,分离病毒株为H3N2亚型人流感病毒和H1N1亚型古典猪流感病毒(SIV)的重组体,命名为A/Swine/Fujian/F2/07(H3N2).该分离株含有8个基因片段,共13 442 bp,与GenBank中登录的H3N2亚型人流感病毒、H1N1亚型古典SIV和H3N2亚型SIV进行比较分析显示:分离株的HA、NS、NA基因与H3N2亚型人流感病毒株的同源性分别为84.7 ％～98.1％、94.4 ％～99.5％和88.6 ％～97.6％;与H3N2亚型SIV的核苷酸同源性分别为87.7％～98.5％、82.5 ％～99.9％和87.6 ％～98.4％;M基因与H3N2亚型人流感病毒和SIV的同源性均在90.1％以下,而与H1N1亚型古典SIV的同源性在97.6％以上.基因型分析表明分离株的PB2、PBI、PA、HA、NP、NA和NS基因片段来源于1975年～1982年的人流感病毒,而M基因来源于H1N1亚型古典SIV,充分证明猪作为流感病毒“混合器”的作用.     

猪圆环病毒2型ORF2基因在PcDNA3.1中的表达效果

[目的]构建猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)ORF2 DNA核酸疫苗,并评价其免疫效果和安全性.[方法]设计一对特异性引物,扩增PCV2-ORF2,利用T载体对其进行克隆,与真核表达载体PcDNA3.1在同等条件下进行双酶切,并进行连接,转化感受态细菌DH5a并克隆,经双酶切鉴定筛选...     

猪流行性腹泻病毒FJ-11A株的分离与ORF3基因序列分析

从福建省某疑似流行性腹泻病毒感染的猪场采集腹泻粪便样品和小肠组织,利用Vero细胞连续传代后,分离到猪流行性腹泻病毒福建株(FJ-11A株).根据GenBank中登录的猪流行性腹泻病毒ORF3基因特征设计特异性引物,采用RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒福建株ORF3基因进行扩增,将扩增目的片段经胶回收后进行克隆测序....     

串联表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5表位蛋白间接ELISA方法的建立

利用猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）GP5抗原表位串联表达重组蛋白作为包被抗原,建立检测PPRSV抗体的间接ELISA方法。重组蛋白最佳包被浓度为7.5 μg/mL,最佳封闭液为5%脱脂奶粉,37 ℃封闭2 h;血清最适稀释度为1∶100,37 ℃作用2 h;兔抗猪IgG/辣根酶（HRP）（1∶3000）,37 ℃作用2 h;37 ℃避光显色15 min读取D_{450 nm}值。结果经统计学分析得出,S/P值≥0.254为阳性,S/P值≤0.212为阴性。所建立的ELISA方法检测其他5种猪常见病原阳性血清,其D_{450 nm}值均小于0.212。利用建立的ELISA方法对临床免疫勃林格殷格翰猪繁殖与呼吸综合征活疫苗4周后的猪血清70份进行检测,其D_{450 nm}值均大于0.85,表明本研究建立的重组GP5表位蛋白间接ELISA方法可用于临床样品的监测。     

福建省鸡源大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

为探究福建地区鸡致病性大肠杆菌分离株的耐药情况。通过采集疑似大肠杆病死鸡的肝、脾、肺等脏器病料,并结合流行病学、临床学、病理学、生物化学和实验室PCR方法进行分离与鉴定,最终确诊为鸡大肠杆菌病。挑选分离的12株鸡大肠杆菌进行药敏试验,明确大肠杆菌耐药谱,为筛选敏感药物用于治疗与预防该病提供参考。     

鸭出血症血凝及血凝抑制试验的建立和应用

鸭出血症是由不同于鸭瘟病毒的鸭新型疱疹病毒引起的鸭的一种传染性疾病。根据该病毒可凝集Balh／c小鼠红细胞的特性，我们建立了鸭出血症血凝及血凝抑制试验，经试验表明该方法是一种快速、实用、特异性强的检测方法。     

福建省规模猪场伪狂犬病流行病学调查与分析

作者分别应用血清中和试验（SNT）和PCR方法,对福建省近3年来56个规模猪场收集的1470份血清和71个规模猪场采集的136份病料进行了猪伪狂犬病的血清学调查和病原检测。结果表明：在2005年、2006年和2007年,猪伪狂犬病病毒中和抗体合格率：母猪分别为91.5％、89.2%和94.8%;6周龄前猪群分别为75.3%、56.6%和75.5%;6周龄后猪群分别为38%、33.9%和30.7%;被检病料中猪伪狂犬病病毒野毒阳性检出率分别为12.5%、17.4%和16.0%。由此可见,猪伪狂犬病在福建省规模猪场仍未得到完全控制,应加强防控。     

单克隆抗体与免疫荧光染色技术

自从Kohla和Milstein于1975年首创杂交瘤技术以来,单克隆抗体已应用于免疫学、生理生化、药理学、组织学、肿瘤学、微生物学等不同的学科,其应用之广、发展之快,促使医学、生物学领域起着巨大的变革.单克隆抗体是利用细胞融合技术,在体外大量培养融合细胞,由融合细胞产生大量的抗体.由于单克隆抗体只识别某一特定的抗原决定簇,所以它具有特异性强、成分均一、灵敏度高、产量大、容易标准化生产等优点而明显优于多克隆抗体.目前世界上己建立的单克隆抗体品种数以万计,其中数千种已经上市.     

生物技术在国内禽病诊治中的应用

1 生物技术在禽病病原学研究上的应用1.1 单克隆抗体在病毒蛋白结构及功能检测中的应用单克隆抗体是针对单一抗原决定族的同质性抗体，所以，可以将其作为探针用于病毒的抗原表位的定位、抗原表位的数量及相互关系的研究。由于单克隆抗体与相应的抗原决定族相结合能抑制抗原的功能，因此，单克隆抗体也可以用于抗原性蛋白生物性功能的研究。如单克隆抗体用于NDV的HN蛋白抗原定位和F蛋白空间结构和抗原性的研究。1.2 单克隆抗体技术用于病毒变异分析及毒株分型单克隆抗体仅仅识别一个抗原位点，用抗病毒蛋白的单克隆抗体就可以检测出各种…     

鸡减蛋综合征和新城疫二联油佐剂灭活苗的制备及应用

将减蛋综合征(EDS-76)H株和新城疫(ND)La Sota弱毒株分别接种鸭胚和鸡胚,收获胚液(HA价分别达2~(15)和2~(11)以上),福尔马林灭活后配制成EDS-ND二联油佐剂灭活苗。经无菌与安全性检验,免疫效力测定和田间应用结果表明,该苗安全性良好,于蛋鸡开产前1个月左右皮下或肌肉注射0.5ml/羽,免疫后21天HI抗体效价均达1:2~(10)以上,免疫期达6个月以上。