黑曲霉分泌表达载体的构建以及绿色荧光蛋白的表达

采用PCR扩增得到糖化酶基因启动子（PglaA-g）、色氨酸合成酶基因终止子（TtrpC）和潮霉素抗性筛选标记基因,依次连接这些基因元件,获得黑曲 Aspergillus niger 分泌表达载体pPHT. EGFP 基因与黑曲霉表达载体pPHT连接,得到重组表达载体pPHT-EGFP.pPHT-EGFP表达载体通过原生质体转化法转化黑曲霉,经潮霉素抗性筛选、基因组PCR鉴定阳性重组转化子.荧光显微镜观察表明,绿色荧光蛋白成功表达,而且荧光的分布具有一定的规律,主要集中在菌丝顶端、膈膜以及培养基中;固体培养基发出绿色荧光,表明绿色荧光蛋白分泌到培养基中,属于分泌性表达,蛋白分泌的部位主要位于菌丝顶端.     

口蹄疫病毒P1-2A和3C蛋白重组腺病毒的构建及其免疫原性研究

为研制口蹄疫病毒(FMDV)的新型重组腺病毒疫苗,本研究通过RT-PCR扩增FMDV GD株3C、P1、P1-2A、L-P1和L-2A基因,分别构建重组腺病毒穿梭质粒,并在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183E.coli中同源重组获得腺病毒重组质粒pAd-3C、pAd-P1、pAd-P1-2A、pAd-L-P1、pAd-L-2A,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得含有目的基因的重组腺病毒。将具有感染能力的复制缺陷型重组腺病毒rAd-3C分别与rAd-P1、rAd-P1-2A、rAd-L-P1、rAd-L-2A共感染Vero细胞,裂解细胞收集细胞上清液并进行小鼠免疫试验。经ELISA检测表明,重组腺病毒rAd-3C分别与rAd-P1-2A、rAd-L-2A共感染Vero细胞上清液能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。     

舍饲情况下耐盐优质牧草的适口性对比试验

近年来,随着养殖模式向舍饲集约化方向的转变,人工牧草得以大面积推广。西大滩为宁夏回族自治区银北典型盐渍化区,生态环境脆弱,植被差。试验区经多年综合治理,农业基本生产条件得到一定改善,为了充分利用西大滩闲置荒地资源,在改善生态环境的同时发展节粮型草食家畜[1],充分发挥耐盐牧草的经济效益,在西大滩种植耐盐碱、抗性强的牧草,通过种草养畜,就地转化,进而提高牧草综合利用效率。     

构建猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆的研究进展

cDNA感染性克隆的成功构建是进行反向遗传操作的关键,而反向遗传操作的成功构建使得在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒（Poreine Reproducti Veand ResPiratory Syndrome virus,PRRSV）进行操作变成了现实。通过反向遗传操作手段,可以在DNA水平上通过突变、缺失、插入和互补等手...     

重组抗菌肽Cecropin P1在毕赤酵母X-33中的表达以及纯化后的生物活性分析

为了在毕赤酵母 Pichia pastoris 表达系统中表达猪源Cecropin P1并分析其生物活性,根据Cecropin P1的氨基酸序列和毕赤酵母的密码子偏嗜性设计引物,通过SOEing法合成全基因片段载入到PpicZαA质粒中,酶切线性化重组质粒PpicZαA-cecropin P1后电穿孔导入毕赤酵母X-33中进行整合,经Zection筛选和PCR检测获得高拷贝的转化子.发酵表达后将表达产物经加热预处理和Sephadex G-25层析及冻干浓缩后,Tricine-SDS-PAGE显示明亮单一条带.采用琼脂扩散法对纯化后的抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性、耐胰酶和胃蛋白酶稳定性进行了生物活性分析,结果表明Cecropin P1具有较强的热稳定性、酸稳定性及胃蛋白酶稳定性,但是在碱性环境下和胰酶作用下抑菌活性明显下降.     

猪流行性腹泻病毒结构蛋白及疫苗的研究进展

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)由冠状病毒引起,患病仔猪以呕吐、腹泻、脱水为特征,具有较高的致死率,给生猪的发展带来了巨大的经济损失,故防制PED非常重要。PEDV S、E、M、N蛋白是病毒粒子的结构蛋白,在体外能自我装配成病毒样颗粒(VLPs),并能刺激机体产生抗PED中和抗体,所以研究PED结构蛋白对PED新型疫苗研制至关重要。本文对PEDV结构蛋白分析及疫苗研究进行了综述,为PEDV的深入研究提供参考。