明串珠菌（Leuconostoc）在乳制品中的应用

本文综述了Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ和其它菌的共生抑制关系，培养基的选择和生长影响因素（温度，ＰＨ，柠檬酸盐等），概述了Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ产生细菌素的种类和特征，并扼要说明了它在乳制品中的应用（风味平衡作用，延长贮存期，生成葡萄糖，改善干酪的质地等）。     

益唯哚与丹彤防治马铃薯晚疫病试验研究

【目的】通过试验明确试验药剂益唯哚（660克/升氟嘧菌酯?百菌清悬浮剂）对马铃薯晚疫病的防治效果,与丹彤混用的增效作用,以及对作物的安全性影响,为生产应用提供参考依据。【方法】以益唯哚与丹彤为试验药剂,采取不同施用次数、不同施用组合设计处理并随机区组排列,调查对马铃薯晚疫病的防治效果及对作物的产量影响和安全性。【结果】于马铃薯晚疫病零星发生期用益唯哚1200mL/hm2兑水喷施1次平均防效达61.39%,折合亩产达1917.63Kg;间隔10天连续喷施益唯哚1200mL/hm22次平均防效达71.11%,折合亩产达2008.77Kg;用益唯哚1200mL/hm2+丹彤1200mL/hm2兑水喷施1次平均防效达64.12%,折合亩产达2054.36Kg;间隔10天连续喷施益唯哚1200mL/hm2+丹彤1200mL/hm22次,平均防效达76.55%,折合亩产达2654.66Kg。【结论】间隔10天连续喷施2次益唯哚1200mL/hm2对马铃薯晚疫病的防治效果良好,混用丹彤1200mL/hm2一定程度上提高了防治效果,马铃薯的产量及商品性也有一定提高。两种药剂对马铃薯植株生长安全。     

稻瘟菌糖原合成酶激酶MoGSK3功能探究

【目的】观测稻瘟菌（Magnaporthe oryzae）糖原合成酶激酶基因MoGSK3敲除突变体表型,明确MoGSK3在稻瘟菌中的潜在生物学功能,为挖掘防治稻瘟菌新型药剂的潜在靶标提供参考。【方法】基于同源重组原理,用split-PCR方法获得稻瘟菌MoGSK3敲除突变体菌株,将MoGSK3基因克隆到pFL2载体上得到MoGSK3-C融合载体,并将其通过PEG介导的原生质体转化法导入MoGSK3突变体中得到回补菌株。培养观察野生型菌株Guy11、突变体菌株G3-9及回补菌株GC-1的菌落形态和生长状况,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测稻瘟菌产孢相关基因的表达量;观察稻瘟菌不同菌株的分生孢子形态,通过附着胞洋葱表皮穿透试验及接种水稻叶片,研究其致病力;通过KI-I-2染色对野生型菌株Guy11及突变体菌株G3-9分生孢子和附着胞中的糖原运输能力进行观测。【结果】稻瘟菌MoGSK3突变体存在多个表型缺陷,与野生型菌株Guy11相比,MoGSK3突变体菌株G3-9菌落直径显著变小,生长缓慢,产孢相关基因表达量下降且分生孢子出现末端伸长畸形的状态。MoGSK3基因缺失还会导致稻瘟菌菌丝末端无法形成正常的分生孢子梗,附着胞无法穿透洋葱表皮形成侵染菌丝,接种划伤水稻叶片也无法形成褐色病斑。对MoGSK3突变体菌株G3-9分生孢子及附着胞进行糖原染色后发现,突变体菌株G3-9在糖原转运能力方面存在明显缺陷。【结论】MoGSK3基因参与稻瘟菌的生长、分生孢子形成及形态建成、侵染、糖原转运等过程,是稻瘟菌重要的毒力因子。     

植物病毒类病害的介体传播及其控制

植物病毒和类菌质体能造成多种农林作物的病害 ,其主要传播介体为昆虫 ,但也不可忽视其他介体传播的可能性。现以 3个典型病例来说明介体传播的复杂性和为害的严重性 ,并提出了控制介体传播的有效措施和方法。     

灰树花菌株的比较试验

通过固体斜面培养、平板培养和液体培养等方法,对4个灰树花菌株进行比较试验。结果表明,YtGf-4在菌丝长势、抗霉能力、耐高温能力、菌种间拮抗能力以及不同C/N比菌丝生长状况等方面表现出优良性状。     

7.2%甲硫·酮防治苹果轮纹病和提高果品品质的试验示范

葫芦岛市连山区的老官堡,杨郊、寺儿堡、白马石等乡镇,是葫芦岛市重点苹果产区,其产值在农业种植业中占40%以上。苹果轮纹病是该地区苹果生产上的最主要病害之一。以往生产上为了减少经济损失,从3月下旬至9月中旬轮纹病发生时就不断喷药,一直防治到采收前的20 d左右,在病害大发生期往往五六天就喷1次药,喷药时选用二三种杀菌剂混用,既浪费农药又容易出现药害。为寻求有效的防病药剂,2003—2004年选用7.2%甲硫.酮(由3.2%甲基硫菌灵和4%三唑酮合成的含有高效助剂、成膜剂、生物活性剂的一种高效、低毒、低残留、无公害新型果树杀菌剂)防治苹果轮纹病药效试验,并于2005年进行了生产防治试验示范,收到很好的防治效果。     

MoHRD3基因参与调控稻瘟病菌的生长发育和致病力

 稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)作为主要的农业病原微生物,其引起的稻瘟病严重威胁着水稻等谷类作物的生产安全。内质网相关蛋白质降解途径(Endoplasmic reticulum-associated protein degradation, ERAD)是生物体应答内质网压力的主要方式之一,其在机体生长发育过程中具有重要作用。而HRD(HMG-CoA reductase degradation)复合物作为ERAD的关键组分,主要由Hrd1、Hrd3、以及凝集素Yos9等蛋白组成,负责内质网中错误折叠蛋白的识别、转运以及泛素化过程,最终由蛋白酶体降解,从而有效缓解内质网压力,保证细胞的正常生理活动。有研究表明,Hrd3属于单次跨膜蛋白,在内质网腔中与Hrd1、Yos9相结合,负责底物的识别并起着稳定Hrd1的作用。目前Hrd3在稻瘟病菌中的生物学功能尚不清楚。本研究通过基因敲除及互补试验获得了稻瘟病菌的ΔMohrd3突变体和ΔMohrd3-C回补菌株,并以野生型为对照,对突变体的生物学表型进行了分析。结果显示,ΔMohrd3突变体的生长速率、产孢量明显下降;对大麦和水稻的致病力显著减弱。进一步胁迫试验表明,MoHRD3的缺失导致稻瘟病菌对外界盐胁迫、渗透压胁迫的耐受性增强,对内质网胁迫耐受性减弱,而对细胞壁胁迫无明显变化。同时,MoHRD3基因的缺失激活了未折叠蛋白响应途径(Unfolded protein response, UPR)。上述结果表明,MoHRD3参与调控稻瘟病菌的营养生长、无性繁殖、致病及对不同环境胁迫的响应过程。     

尖孢镰刀菌番茄专化型中SNARE蛋白FolSso1的功能分析

 SNARE(Soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor)蛋白保守存在于丝状真菌中,在膜泡转运的过程中起着关键的作用。番茄枯萎病是由尖孢镰刀菌番茄专化型(Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici,Fol)引起的,严重威胁着番茄的生产。我们使用反向遗传学的方法来研究番茄枯萎病菌中SNARE蛋白FolSso1的功能,实验结果发现FolSSO1的基因缺失突变体菌丝生长速率降低,且产孢数量减少。另外,FolSSO1基因的缺失导致突变体相较于野生型菌株对细胞壁压力与细胞膜压力更加敏感。然后,在番茄果实和番茄植株的致病性实验中,我们发现FolSSO1的缺失并没有引起Fol致病性显著的变化。综上所述,本研究发现FolSSO1可以调控Fol营养生长,繁殖和对环境压力的响应过程,然而对Fol的致病过程并没有显著的调控作用。     

莲腐败病菌遗传转化体系的构建

由共享镰刀菌Fusarium commune引起的莲腐败病是我国莲生产上的主要病害之一。本研究以强致病力菌株FCN23为供试菌株,通过PEG介导的遗传转化法研究了菌龄、酶解时间和渗透压稳定剂等对原生质体制备的影响。结果表明,分生孢子在YPD液体培养基培养24 h获得新鲜菌丝,在酶解时间为2.5 h,渗透压稳定剂为0.7 mol/L NaCl溶液时原生质体制备效率最高。进而将遗传霉素的抗性基因和绿色荧光蛋白基因转入莲腐败病菌原生质体中,获得了稳定表达的转化子,能够稳定遗传gfp基因,说明莲腐败病菌的遗传转化体系构建成功。该体系的建立为莲腐败病菌的侵染过程及基因功能研究奠定了基础。     

拟南芥转录因子IDD4不同突变体对灰葡萄孢菌的抗性分析

为明确IDD家族IDD4基因在拟南芥Arabidopsis thaliana抵抗灰葡萄孢菌Botrytis cinerea侵染过程中的作用,通过统计病情指数检测拟南芥野生型（wild type,WT）植株、过表达植株IDD4-OE和缺失突变体idd4植株感染灰葡萄孢菌情况,利用组织染色检测叶片细胞死亡和H₂O₂的积累情况,采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative-PT-PCR,qRT-PCR）技术分析灰葡萄孢菌肌动蛋白基因Bc. ACTIN在3种植株叶片中的表达情况,并施加0.1 mmol/L外源水杨酸（salicylic acid,SA）后测定IDD4-OE植株的病情指数。结果显示,不同株系对灰葡萄孢菌的抗性由高到低依次为idd4＞WT＞IDD4-OE,IDD4-OE植株中病原菌感染部位的寄主细胞死亡程度比idd4植株严重。染色结果表明,病原菌侵染拟南芥后4 h,接种部位已有H₂O₂积累。qRT-PCR反应结果显示,Bc. ACTIN在IDD4-OE中比在idd4植株中的表达水平更高,表明灰葡萄孢菌在IDD4-OE植株中的繁殖速率更快。对IDD4-OE植株外源施加SA后,其病情指数、Bc. ACTIN表达量与WT植株间均无显著差异,说明SA能将感病植株的抗性提高至WT植株的水平,表明IDD4作为负调控因子参与了拟南芥对灰葡萄孢菌的抗性调控,SA在其中发挥着重要作用。