酵母单杂交技术的原理及应用

酵母单杂交技术是一种体外分析DNA与蛋白质相互作用的技术。文章就酵母单杂交技术的原理、操作步骤、应用及其优缺点作了简要概括。     

浅白隐球酵母产油工程菌液体深层发酵技术研究

为优化浅白隐球酵母液体深层发酵技术,采用已优化的培养基配比,设置不同的搅拌速率、通气量和pH值,在发酵过程中检测了溶氧消耗、pH值、生物量等指标,对影响浅白隐球酵母转基因工程菌株发酵主要工艺参数进行了研究。结果表明:优化后的发酵培养基(g/L)配方为葡萄糖30,(NH4)2SO43、酵母粉2,KH2PO41,MgSO4.7H2O 0.5;装液量7.5 L、接种量10%(v/v)、罐压0.03～0.05 MPa、培养温度28℃和搅拌速度250 r/min;通气量初始为1∶0.6,进入对数生长期后调为1∶0.85,初始pH值为6,进入对数生长期后调节为4。在以上优化条件下,进行了10 L发酵罐放大试验,培养时间为60 h时,浅白隐球酵母丝体生物量达到最大值,生物转化率达到12.34%。气相色谱检测结果表明,该菌株油脂的油酸组分较高、硬脂酸组分较低。     

奶牛真菌性乳房炎敏感药物的筛选

以引起奶牛乳房炎的5株酵母样真菌作为研究对象,选用制霉菌素等5种抗真菌用药物、痢菌净等10种常用抗生素和黄连等8味中草药制剂,进行体外敏感药物的筛选。结果显示:5株酵母样真菌对制霉菌素、痢菌净、黄连制剂均高度敏感,对氟康唑、氟苯尼考等多种药物不敏感。     

酵母硒和茶多酚及其互作对绿壳蛋鸡生产性能及抗氧化能力的影响

为探讨酵母硒和茶多酚及其互作对绿壳蛋鸡生产性能以及血清抗氧化能力的影响,选用810只44周龄健康江西东乡黑羽绿壳蛋鸡,随机分成9个处理组,每组5个重复,每个重复18只鸡,采用二因素三水平试验设计,在基础日粮中分别添加不同质量浓度的酵母硒和茶多酚构成试验日粮,酵母硒设0、0.25、0.50 mg/kg共3个添加水平(按硒计),茶多酚设0、200、400 mg/kg共3个添加水平,预试期7 d,正试期28 d。结果表明:日粮中添加酵母硒和茶多酚均有提高平均蛋质量和产蛋率的趋势(P>0.05),显著降低料蛋比(P<0.05);日粮中添加0.25、0.50 mg/kg酵母硒能显著提高血清中GSH–Px活性、总抗氧化能力(P<0.01)和极显著降低MDA含量(P<0.01),且有增加T–SOD活性的趋势(P>0.05),日粮中添加200、400 mg/kg茶多酚能显著增强血清中T–SOD活性(P<0.01)和总抗氧化能力(P<0.05),有升高GSH–Px活性的趋势(P>0.05),能极显著降低MDA含量(P<0.01);酵母硒和茶多酚的互作效应对蛋鸡生产性能无显著影响(P>0.05),但对血清中抗氧化指标均有显著影响(P<0.01或P<0.05),在基础日粮中添加0.25 mg/kg酵母硒和400 mg/kg茶多酚的添加组合对蛋鸡生产性能不会产生拮抗作用,对提高蛋鸡抗氧化能力有一定的协同作用。     

利用PTVA法提高超氧化物歧化酶基因在毕赤酵母中的表达

为得到高表达超氧化物歧化酶毕赤酵母工程菌株,促进SOD的产业化生产,将来源于蜡样芽孢杆菌M22菌株的Mn-SOD-2基因转入毕赤酵母GS115中,构建了表达工程菌株YS 1～100。采用PTVA法(Posttransformational vector amplification)进行拷贝数扩增处理。建立了SOD重组菌株MMH(Minimal Methanol+Histidine)平板简易检测法,使用该法对转化子进行初筛,并用荧光定量PCR(Fluorescence quantitative PCR)法检测部分重组酵母工程菌中外源SOD基因的拷贝数。结果表明:试验中得到80株高抗Zeocin的菌株YSP 1～80,经MMH平板法筛选得到菌株YSP14、YSP30、YSP48和YSP54的SOD酶活性明显高于处理前;菌株YSP54的SOD基因的拷贝数达到8个拷贝,而处理前仅为1个拷贝;Native-Page分析与NBT酶活性测定显示菌株YSP54发酵上清液中的SOD酶活性达到150U/mL,为处理前的2倍。提高毕赤酵母中外源SOD基因的拷贝数可以相应提高SOD的酶活。     

苹果‘国光’花柱中与S-RNase互作的钙调素结合蛋白研究

通过酵母双杂交的方法寻找苹果‘国光’花柱中与S-RNase互作的非S因子。以苹果‘国光’花柱为试材,构建了酵母cDNA文库,检测插入片段大小在300～2 000bp之间,符合库容要求。将S1-RNase成熟区cDNA序列S1-mat构建到pGBKT7载体上作为诱饵,筛选‘国光’花柱酵母cDNA文库。经文库筛选,获得一个大小为371bp的片段,与苹果全基因组序列比对后发现,该片段位于第9号染色体,其全长序列为552bp。NCBI BLAST比对及蛋白结构域分析显示其与拟南芥钙调素结合蛋白的同源性最高,且具有钙调素结合蛋白特有的磷酸二酯酶结构域。同时,酵母互作实验显示其与‘国光’花柱钙调素(CaM)有强烈互作,故认为此基因是苹果钙调素结合蛋白基因,命名为MdCaMBP。半定量RT-PCR结果显示其在‘国光’叶片及花的各组织中均有表达,与苹果花柱S1-、S2-、S9-RNase成熟多肽区均有互作且作用强烈。推测MdCaMBP可能作为一种S-RNase辅助因子参与了自交不亲和反应。     

抗冻酵母及保护剂的筛选及在冷冻面团中的应用研究

冷冻面团,尽管可以让面团的保鲜时间更长,但是其中的酵母却可能因为低温而导致活力丧失,失去发酵的功能,从而影响面团的发酵质量,冷冻面团一般体积小。口感差,结构粗糙,因此不利于生产活动。目前,针对冷冻面团所存在的这种问题,经过深入研究后,发现了一种抗冻酵母,通过添加合适的保护剂,冷冻面团馒头的质量有了较为明显的提高,从而扩大的冷冻面团的适用范围。     

喉癌细胞酵母双杂交cDNA文库的构建

目的构建喉癌(Hep-2)细胞的酵母双杂交cDNA文库,为筛选包涵体膜蛋白分子的作用配体提供前期工作基础.方法从Hep-2细胞中提取总RNA,应用SMARTTM技术,构建以pGADT7-Rec为载体的Hep-2细胞酵母GAL4AD融合cDNA文库.结果所构建的文库展现出良好的多态性.结论可用于酵母双杂交系统的筛选.     

酵母在饲料工业中的研究与应用

<正>酵母是一类单细胞微生物,为真菌类,圆形、卵圆形或圆柱形,其细胞大小约为[(1～5)×(5～30)]μm,最长可达100μm。由于酵母具有个体大,蛋白质含量高,杂食性强,易分离,易培养,代谢产物多,综合利用广等特点,     

喀麦隆棕榈酒酵母分离物的酒精和糖的耐量？…

在８７个科隆棕榈酒酵母分离物中，和２个分离物对乙醇（１６％～１７％，ｖ／ｖ）和糖类具有高的耐量，可生长于含有高达５０％（ｗ／ｖ）葡萄糖的培养基中，而且具有较高的蔗糖活性。在以糖蜜发酵乙醇的生产中具有潜在的价值。按形态学和生理特性推断，Ｙａ２属中间假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）而Ｙａｏ４为啤酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ。）