猪丹毒丝菌CbpB基因的克隆表达及其间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

利用表达纯化的猪丹毒丝菌(ER)胆碱结合蛋白B(CbpB)建立一种检测ER抗体的间接ELISA方法。克隆扩增ER的CbpB基因并与原核表达载体pGEx-6P-1连接,经PCR、双酶切及测序鉴定,将阳性重组质粒转入E.coil BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot鉴定产物。以纯化重组CbpB蛋白作为包被抗原,通过一系列反应条件优化,建立检测ER抗体的间接ELISA方法(CbpB-ELISA),并用于临床猪血清样品检测。建立该方法的最适条件:包被抗原浓度为1.0 μg·mL^-1,4 ℃过夜;5%脱脂奶粉于37 ℃封闭2 h;血清稀释度为1:100,37 ℃孵育60 min;酶标二抗稀释度为1∶1 000,37 ℃作用45 min;显色时间为37 ℃作用10 min。该方法可特异性地检测ER抗体,与其他猪病原阳性血清均无交叉反应性;阳性血清稀释至1:12 800时仍可检出;批内及批间变异系数均小于10.00%;与全菌体-ELISA、SpaA-ELISA、商品化ELISA试剂盒及Western-blot比较,该方法总符合率分别为91.67%、93.33%、86.67%和90.00%,其中阳性符合率分别为92.45%、94.55%、88.89%、90.91%,阴性符合率分别为85.71%、80.00%、66.67%、80.00%。对进行和未进行ER免疫的猪血清样品检测,免疫抗体阳性率为86.67%,感染抗体阳性率为30.50%。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性以及临床应用的可靠性,为ER的免疫监测和流行病学调查提供了技术手段。     

水产养殖学专业实验教学体系的构建与应用

水产养殖学专业在深化实验教学体系的构建、规划实验模块和建立实验教学体系与学科发展及人才培养需求相适应的基础上,通过实验教学、实验室与教学基地建设、实验教学方法和手段的改革,开设综合性大实验培养学生动手能力和综合判断能力,注重培养学生解决和分析问题的能力。以培育学生创造能力为根本点,提高学生创新技能;以实验教学改革为基础,推动水产养殖学实验教学改革的发展,对全面培养水产养殖学的学生创新能力和实践能力起到较好的效果。     

猪繁殖与呼吸综合征发病猪群猪链球菌的分离与2型链球菌的鉴定

应用常规方法和PCR技术,对2006—2010年安徽不同地区猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒检测为阳性的病料（肺脏）进行链球菌的分离及2型链球菌的鉴定。结果显示,136份病料中分离鉴定出19株链球菌,分离率为14.0%。利用链球菌2型特异性引物对19株分离菌进行PCR鉴定,结果显示,5株分离菌扩增出675 bp的特异性条带,表明安徽省猪高热病的发生与猪繁殖与呼吸综合征引起的继发或混合感染链球菌密切相关。     

某猪场腹泻仔猪沙门氏菌的分离鉴定与药敏试验

针对安徽某猪场腹泻仔猪,分别采集5头不同窝的肛拭子和肠道内容物样品,利用常规法结合PCR技术进行沙门氏菌的分离鉴定,玻片凝集试验和ERIC-PCR技术确定分离株的血清型与基因型,标准K-B纸片法进行20种抗生素敏感试验。结果显示,4头腹泻仔猪(4份肠道内容物样品、1份肛拭子样品)均分离到沙门氏菌,阳性检出率为80%,涉及明斯特沙门氏菌、纽兰沙门氏菌、新斯托夫沙门氏菌和乌干达沙门氏菌4种血清型,其中1头同时检出4种血清型沙门氏菌;8株沙门氏菌分离株为同一基因群,分属2个基因型,亲缘关系较近,对20种抗生素均敏感。结果表明,该猪场仔猪腹泻与不同血清型沙门氏菌的混合感染有一定的关系,母猪的清洁卫生与猪舍的消毒到位不容忽视,临床上常用抗生素可用于防治或减缓仔猪腹泻的发生。     

家蝇在动物疫病传播中的作用研究概况

家蝇体内外携带有成千上万种微生物,这些微生物包括致病性微生物和非致病性微生物,诸多研究发现家蝇携带的病原微生物包括细菌、病毒、支原体、衣原体、寄生虫等,数量可达百种;这些病原微生物对家蝇本身并无危害,但是对人和动物却危害严重,甚至可以引起畜禽的死亡。论文通过概述家蝇的特性、体内外携带病原体种类与数量、传播病原的方式及引起的疾病类型等方面,了解家蝇在动物疫病传播过程中的地位,明确家蝇在动物疫病传播过程中起到不容忽视的作用,同时揭示了在畜禽饲养过程中消灭苍蝇是非常重要的一项举措,也是减少动物疫病传播的重要手段之一。     

鸭产蛋下降-死亡综合征的临床诊断与病原的初步鉴定

2010年3～11月间,安徽省部分规模养鸭场流行以产蛋下降和死亡为特征的急性、热性鸭传染病,主要感染成年种鸭或蛋鸭,病理变化则以心肌出血、卵巢肿大、出血和坏死为特征.通过鸡胚接种、传代培养和RT-PCR鉴定,从发病鸭体内分离1株黄病毒.对其NS1基因扩增并测序,发现其与坦布苏病毒亲缘关系非常近,核苷酸同源性达94.2％...     

源自合肥地区表观健康鸡的沙门氏菌耐药性与血清型、基因型相关性分析

为了解源自合肥地区表观健康鸡的沙门氏菌耐药性及其与血清型、基因型的相关性,在前期已鉴定血清型和ERIC基因型的基础上,采用K-B纸片法对21株沙门氏菌分离株进行21种抗生素药物敏感试验,利用PCR技术对耐药菌株进行32种耐药基因检测。结果显示,总耐药率为100%(21/21),耐2种以上抗生素的菌株占76.19%(16/21),多重耐药谱为青霉素-氨苄西林-阿莫西林-链霉素-复方新诺明,其中耐受β-内酰胺类抗生素的类别最多,耐药率最高达100%(21/21)。21株沙门氏菌均检出耐药基因,涉及blaPSE、sul1、strA、blaTEM、sul2、tetA、tetB、aph3-Ⅱa和catⅠ9种,其中blaPSE基因的检出率最高,为85.7%(8/21)。可见源自合肥地区表观健康鸡的沙门氏菌对β-内酰胺类抗生素耐药性最强,与其携带blaPSE基因有关;耐药表型测定结果与耐药基因检测结果基本一致;耐药性与具有相同来源的同一血清型、基因型相关。     

致病性沙门菌的耐药表型分析及其耐药基因检测

采用K-B法测定自雏鸡分离的致病性沙门菌对四环素等20种抗生素的耐药情况,并应用PCR方法检测相应的耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE和tetG.结果显示,受试4株菌株全部对四环素、强力霉素高度耐受,在染色体上均有tetA基因存在,其中3株在质粒上还存在tetB基因,耐药表型与耐药基因的检测结果完全相符.表明tetA和tetB基因是决定本试验中临床分离沙门菌株对四环素类抗菌药物耐药的主要原因.