油茶优良无性系的RAPD分子鉴别

油茶优良无性系是当前生产上的主要良种.通过采用RAPD分子标记方法,从180多个引物中筛选出22个具有多态性的随机引物进行扩增,得到141个位点,其中有91个是多态位点,以此为基础建立油茶优良无性系的RAPD分子鉴别体系.同时还探索出油茶叶片总DNA的分离技术和建立了RAPD反应体系,为油茶分子技术育种积累了相关的知识并奠定了DNA技术基础.     

不同营养液对水培桉树采穗条生长发育的影响

桉树(Eucalyptus)已经成为我国南方发展速生丰产林的战略性树种(谢耀坚,2003).据不完全统计我国现有桉树人工林总面积已经达到190万hm2,每年新造林面积达几十万公顷,需要培育大量的优质苗木以满足桉树生产的需要(谢耀坚,2006).目前桉树造林70%以上采用扦插苗,少量用组培苗,极少用种子苗.传统的大田采穗圃是将优良无性系组培苗(生产上叫母苗)种植在大田上土壤中,不断地修剪和采穗,以繁殖扦插苗.     

油茶优良无性系ISSR分子鉴别

采用ISSR分子标记,以1个普通油茶实生苗作为对照,对我国南方10个油茶优良无性系进行了遗传多样性分析.实验从99条引物中筛选出多态性较高的16条ISSR引物进行PCR扩增,共扩增出135个位点,其中多态性位点数为114个,多态性位点比率为84.44%.基因型间的平均遗传距离(GD)为0.419,其中优良无性系与对照之间的GD值相对较大,平均为0.58.聚类结果表明,油茶优良无性系与普通油茶实生苗存在较大的遗传差异,同时也较准确地进行了各优良无性系的分子鉴别,为油茶的良种选育提供了理论依据.     

油茶离体培养诱导再生植株的研究

采用普通油茶Camelliaoleifera优良无性系湘林4号为实验材料,研究了离体条件下带芽的茎段、幼胚、子叶的愈伤组织的形成和植株再生技术。茎段离体培养以MS为基本培养基,附加6-BA3.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1对芽进行诱导,诱导率达到83.33%;继续在此培养基上继代得到丛生芽,增殖比例为1∶20。对于幼胚和子叶,附加2,4-D2.0mg·L-1+KT1.0mg·L-1诱导愈伤组织得到很好的效果,将愈伤组织转到附加6-BA3.0mg·L-1+NAA0.05mg·L-1和6-BA2.5mg·L-1+IAA1.5mg·L-1的培养基上诱导出不定芽,诱导率达到90%以上。芽苗增殖以MS+6-BA2.5mg·L-1+IAA1.5mg·L-1的培养基为好。将无菌苗在MS培养基(附加NAA7mg·L-1)上诱导生根,生根率达93%。     

李品种的RAPD分析

从96条S系列RAPD引物中筛选出能稳定扩增并具有多态性的13条引物,对25个李品种进行了RAPD分析.结果表明,只用S17、S459和S1169等3条引物就能鉴别出所供试的25个李品种.利用PopGene软件中的UPGMA方法对供试25个李品种进行分子聚类分析,取LD=0.45,可将这25个李品种分为8类.     

中国砂梨7个自交不亲和新基因的分离与测序

S-RNase是配子体自交不亲和植物雌蕊的基因产物,它降解具有相同基因型的花粉mRNA或rRNA,导致植物的自交不亲和.借鉴日本梨S-RNase基因的分析方法,对中国砂梨5个品种的基因组DNA进行PCR-RFLP系统检测和DNA序列分析,从中发现了7个新的S-RNase等位基因,分别命名为S11-RNase、S12-RNase、S13-RNase、S14-RNase、S15-RNase、S16-RNase和S25-RNase基因,其部分序列已登录到GenBank.     

美国山核桃主要栽培品种的RAPD鉴定

以叶片为材料,采用改良CTAB法和16种Operon引物对从原产地美国引进的30个美国山核桃主要栽培品种进行RAPD分子分析。结果表明：参试品种问存在明显的基因带型差异,多态型比率高达78．1％;根据RAPD特异分离谱带确定了各品种的标记基因型．以此可实现对美国山核桃无性系品种DNA水平上的鉴别;以标记基因型对30个美国山核桃品种进行系统聚类,结果与传统形态学及Marquard等人的同工酶分类基本吻合。     

胡萝卜抗冻蛋白的快速大量突变及原核表达

胡萝卜抗冻(DcAFP)具有典型的LRR特征,由约24个氨基酸残基组成重复单元,其中的保守基序是:P×××××L××L××L×LS×N×L×G×I,其中的保守天冬酰胺在与冰晶表面结合中起着关键的作用．为了探明该关键氨基酸对DcAFP重要性,需要对其进行一系列突变,以检测这些突变体的热滞可能发生的变化,而这需要构建大量的突变体．基于此,采用定点突变技术对该基序中保守的天冬酰胺进行了一系列的疏水性缬氨酸突变和亲水性的谷氨酰胺突变,并将这一系列突变体克隆至原核表达载体pET-11a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了高效表达与初步纯化,为后续测定其热滞活性的变化和验证天冬酰胺的重要性打下了基础．     

山茶属植物RAPD分析中琼脂糖凝胶电泳条件的研究

为了摸索适宜于山茶属植物ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳分析,分析了电压,缓冲液,琼脂糖密度、ＥＢ（Ｅｔｈｙｌｅ Ｂｒｏｍｉｄｅ）密度染色时间及操作方法对山茶属植物ＲＡＰＤ分析中琼脂糖凝胶电泳实验结果的影响。结果表明,适宜于山茶属植物ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳条件是：琼脂糖凝胶密度为１８ｇ／Ｌ,电泳缓冲液为ＴＢＥ,电压为６￣９Ｖ／ｃｍ,电泳时间为溴酚兰和二甲苯青之间跑出约５ｃｍ,电泳开始时先让缓冲液与凝胶保持水平电     

油茶优良无性系幼胚和子叶高效再生体系的建立

以油茶(Camellia oleifera Abel.)优良无性系的幼胚和子叶为外植体,采用正交试验设计方法,研究了基本培养基、IBA、6-BA和NAA等植物激素共4个因素的不同组合对其幼胚再生体系及子叶胚性愈伤组织诱导的影响,并进一步研究了不同植物激素对体细胞胚再生体系的影响。结果表明,植物激素的选择对幼胚再生体系的建立起着关键作用,NAA促进了幼胚再生苗的形成,IBA的添加反而阻碍了该体系的建立;由数据分析综合评定法,得出幼胚再生植株诱导最适培养基的理论值为WPM+2.0mg/L 6-BA+1.5 mg/L NAA;子叶胚性愈伤组织诱导的最适培养基为WPM+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA;子叶胚性愈伤组织的最适分化培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.01mg/L NAA。