葛根素对脑缺血再灌注大鼠海马组织P-STAT3、P53表达的影响

目的 探讨葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织磷酸化的转录激活蛋白3（STAT3）、凋亡因子P53表达的影响及其保护机制。方法 采用线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,利用葛根素干预,分别于缺血2 h再灌注6 h、24 h、72 h 3个不同时间点采用Longa评分法进行神经功能缺损评分、TUNEL法检测凋亡细胞数,免疫组织化学法检测海马组织磷酸化的STAT3（P-STAT3）及细胞凋亡因子P53的表达。结果 与假手术组比较,葛根素组与缺血再灌注组的神经功能缺损加重,凋亡细胞数增多,P-STAT3和P53表达增高,差异均具有统计学意义（P<0.05）;与缺血再灌注组比较,葛根素组神经功能缺损评分明显下降,凋亡阳性细胞数均见明显减少,P-STAT3和P53表达显著降低,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 脑缺血再灌注损伤后STAT3被异常激活,其磷酸化水平显著增高;葛根素可能是通过抑制STAT3的磷酸化水平,降低P53的表达起到抗神经细胞凋亡作用,从而改善大鼠脑组织的缺血性损伤。     

葛根素的分离与鉴定

[目的]筛选出适于工业化生产葛根素的提取、分离、纯化工艺路线。[方法]用熔点、红外光谱、核磁氢谱和紫外分光光度法分析鉴定提取的葛根素精品。[结果]葛根素精品的熔点为327～328℃,与葛根素标准品的熔点基本相同;在薄层色谱上,精品与标准品的斑点在紫外灯下均显蓝色荧光,Rf值均为0．31;精品的红外数据为IRUMax^Kbc（cm^-1）：3398、1630、1584、1515、1443、1384、1257、1178、1118、1081、10141,标准品的红外数据为IRUmax^KBr（cm^-1）：3370、1631、1607、1514、1447、1396、1273、1210、1103、1059、1008;精品的核磁氢谱数据与文献报道相符;在250nm处测定精品的吸光度,由回归方程计算出精品的葛根素含量为97％,液-液萃取法的葛根素精品的产率为1．41％。[结论]液-液萃取法分离纯化葛根素成本低,操作简单,可用于工业化生产。     

荧光法测定注射液中葛根素的含量

[目的]建立一种测定葛根素含量的新方法。[方法]以葛根素为材料,用无水乙醇将其稀释至所需浓度,用荧光分光光度计测定溶液中葛根素的荧光强度,建立葛根素浓度与其荧光强度之间的关系曲线。并考察乙醇浓度及常见干扰物质对葛根素荧光强度的影响。比较荧光法和紫外吸收分光光度法对葛根素制剂中葛根素含量的测定结果。[结果]在1.0×10^-7-1.0×10^-5mol/L范围内,葛根素的荧光强度与其浓度具有良好的线性关系,线性方程为If=6.714 31×10^-6C＋2.703 99,检出限可达2.02×10^-8mol/L;葛根素溶液中乙醇含量小于5%时,乙醇浓度对葛根素的荧光强度无明显影响;在相对误差为±5%范围内,常见干扰物质对葛根素荧光强度的干扰均较小。[结论]用荧光法测定葛根素制剂中葛根素的含量,具有操作简便、稳定性好、灵敏度高等特点。     

Plackett-Burman联用响应面法优化酶法-超声波提取葛根中葛根素工艺

为优化酶法-超声波提取葛根中葛根素的工艺条件,以单因素试验为基础,采用Plackett-Burman试验得出液料比、乙醇体积分数、超声时间、超声温度为葛根素提取的4个影响显著的因素;利用最陡爬坡试验,使结果接近最大响应值;最后运用Box-Behnken试验对葛根素提取工艺进行响应面优化。结果表明,葛根中葛根素提取的最佳工艺条件为:纤维素酶添加量0.4%,酶解时间70 min,液料比30∶1(mL/g),乙醇体积分数52%,超声时间31 min,超声温度64℃;在此工艺条件下葛根素得率为8.78 mg/g。以上结果说明,Plackett-Burman试验联合Box-Behnken分析能较好地优化酶法-超声波提取葛根中葛根素的工艺条件。     

不同水平葛根素对肉牛瘤胃体外发酵指标及养分降解率的影响

[目的]试验旨在研究不同水平的葛根素对肉牛瘤胃体外发酵特性及养分降解率的影响.[方法]采集4头瘤胃瘘管牛瘤胃液,采用体外培养法,分别在基础日粮中添加0、0.01％、0.02％、0.04％、0.08％和0.16％的葛根素,检测体外培养24 h后瘤胃发酵指标和养分降解率的变化.[结果]葛根素各添加水平组的瘤胃液pH跟对照组相比无显著变化(P>0.05),菌体蛋白(MCP)浓度显著升高(P<0.05),0.02％、0.04％、0.08％和0.16％处理组的氨氮(NH3-N)含量和乙酸/丙酸均显著降低(P<0.05);各试验组的乙酸含量比对照组显著降低(P<0.05),丁酸和总酸含量均无显著变化(P>0.05);0.04％处理组的丙酸含量显著升高(P<0.05),其他处理组的丙酸含量无显著变化(P>0.05);此外,各试验组的干物质(DM)降解率均显著升高(P<0.05),0.04％、0.16％处理组的中性洗涤纤维(NDF)降解率以及0.04％、0.08％、0.16％处理组的粗蛋白(CP)降解率显著高于对照组(P<0.05).[结论]添加葛根素后可促进瘤胃MCP的合成,提高瘤胃对饲料养分的降解率,调控瘤胃发酵模式.其中,以0.04％的剂量效果最好.     

不同水平葛根素对肉牛瘤胃体外发酵指标及养分降解率的影响

[目的]试验旨在研究不同水平的葛根素对肉牛瘤胃体外发酵特性及养分降解率的影响.[方法]采集4头瘤胃瘘管牛瘤胃液,采用体外培养法,分别在基础日粮中添加0、0.01％、0.02％、0.04％、0.08％和0.16％的葛根素,检测体外培养24 h后瘤胃发酵指标和养分降解率的变化.[结果]葛根素各添加水平组的瘤胃液pH跟对照组相比无显著变化(P>0.05),菌体蛋白(MCP)浓度显著升高(P<0.05),0.02％、0.04％、0.08％和0.16％处理组的氨氮(NH3-N)含量和乙酸/丙酸均显著降低(P<0.05);各试验组的乙酸含量比对照组显著降低(P<0.05),丁酸和总酸含量均无显著变化(P>0.05);0.04％处理组的丙酸含量显著升高(P<0.05),其他处理组的丙酸含量无显著变化(P>0.05);此外,各试验组的干物质(DM)降解率均显著升高(P<0.05),0.04％、0.16％处理组的中性洗涤纤维(NDF)降解率以及0.04％、0.08％、0.16％处理组的粗蛋白(CP)降解率显著高于对照组(P<0.05).[结论]添加葛根素后可促进瘤胃MCP的合成,提高瘤胃对饲料养分的降解率,调控瘤胃发酵模式.其中,以0.04％的剂量效果最好.     

葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱对肠毒素大肠杆菌(ETEC)生长及毒力相关基因mRNA表达的影响

为了研究葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱对肠毒素大肠杆菌(ETEC)生长及分泌毒素的影响,在ETEC菌液中加入终浓度为200μg/mL的葛根素,终浓度为1μg/mL的黄芩苷,以及终浓度为100μg/mL的盐酸小檗碱,检测葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱对ETEC生长情况、菌毛亚基蛋白FaeG以及毒力因子(STa、STb和LT) mRNA表达的影响,结果发现,葛根素、黄芩苷和盐酸小檗碱对ETEC的生长有一定的抑制作用,其中黄芩苷可显著抑制ETEC分泌外毒素。     

葛根素对草鱼非特异性免疫机能和肝胰脏组织结构的影响

为研究葛根提取物葛根素对草鱼非特异性免疫指标和肝胰脏组织结构的影响,在基础饲料(对照组)中分别添加10、50、250、1250 mg/kg的葛根素,饲养平均体重(4.52±0.22)g的草鱼。经28天的饲养,结果表明,与对照组比较,10 mg/kg葛根素添加组碱性磷酸酶活性显著高于对照组(P0.05),10、50 mg/kg葛根素添加组超氧化物歧化酶显著高于对照组(P0.05),溶菌酶各组间无显著差异。肝胰脏指数各试验组与对照组无显著差异。对照组和各试验组之间肝胰脏组织结构差异也不显著。饲喂结束后,利用嗜水气单胞菌人工感染草鱼,各试验组的相对免疫保护率都提高,但10 mg/kg葛根素添加组对草鱼的保护率显著高于对照组(P0.05),免疫保护率达73.33%。试验表明,在饲料中添加一定量的葛根素(10 mg/kg)能提高草鱼的非特异性免疫机能,且不会造成肝胰脏组织结构的损伤。     

葛根人工栽培技术和病虫防治

葛根为豆科多年生全草落叶藤本攀缘植物,喜温暖湿润的气候,在海拔2500多m以下的地区均有生长,以海拔1600～2100m之间居多,特别喜好在年平均气温12～16℃、相对湿度60%以上的背阴温凉潮湿坡地生长,但也耐寒,耐干旱,不耐涝。葛为速生、质优、产量高的植物,淀粉含量高达20%～28%,葛根素含量达1.5%～2.3%,     

超高效液相色谱双波长法同时测定黄地安消胶囊中5种成分的含量

目的 采用超高效液相色谱双波长法同时测定黄地安消胶囊中葛根素、大豆苷、大豆苷元、掌叶防己碱、小檗碱的含量。方法 采用Waters ACQUITY UPLC系统,BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液为流动相,梯度洗脱;双波长检测(λ1=250 nm,λ2=354 nm);流速:0.20 m L·min-1;温度:30℃。结果 葛根素、大豆苷、大豆苷元、掌叶防已碱、小檗碱的进样量与峰面积分别在0.022~0.176μg(r=0.999 9)、0.004 3~0.034 4μg(r=0.999 9)、0.000 61~0.004 9μg(r=0.999 7)、0.002 3~0.018 4μg(r=0.999 7)、0.008 6~0.066 8μg(r=0.999 6)内呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为97.70%、96.81%、99.36%、99.60%和98.67%,RSD值均小于2.7%。结论 所建立的超高效液相色谱双波长法操作简便,结果准确,重复性好,回收率高,可为黄地安消胶囊的质量评价提供研究基础。