苦马豆素-HSA对小鼠免疫原性研究

【目的】研究苦马豆素-HSA(SW-HSA)对小鼠的免疫原性,为构建SW噬菌体单链抗体库奠定基础。【方法】将12只健康Balb/c小鼠随机分为小剂量免疫组(A组)、大剂量免疫组(B组)和对照组(C组)3组,每组4只。免疫组用SW-HSA加入佐剂后进行了4次免疫,首免和第2次免疫间隔30 d,抗原剂量相同,分别为A组0.05mg/只,B组0.10 mg/只;第3,4次免疫分别在第50,70天进行,第3次免疫各组抗原量分别是首免的1.5倍,第4次免疫抗原量分别是首免的2.5倍。第3,4次免疫后第10天采血,用间接血凝试验与间接酶联免疫吸附试验检测血清中的SW抗体效价。【结果】第4次免疫后,间接血凝试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达26和25;间接酶联免疫吸附试验检测显示,A、B两组小鼠血清中的抗体效价分别达29和28。【结论】用SW-HSA免疫Balb/c小鼠,可获得高抗体效价的免疫小鼠。     

鸭H9亚型禽流感油乳剂灭活疫苗的免疫原性

对从发病雏鸭体内分离到的H9亚型禽流感病毒NJ01株[A/Duck/Nan jing/01/1999(H9N2)]进行了免疫原性研究。以含有108.0ELD50和108.5ELD50的NJ01进行静脉注射攻击无H9亚型禽流感抗体的26日龄、44日龄和140日龄鸭,结果显示,对小于44日龄和大于44日龄鸭分别以108.0ELD50和108.5ELD50病毒含量的NJ01株静脉攻击,攻毒后1~2 d的喉拭子病毒分离率均为80%以上。将病毒含量为107.9ELD50的NJ01株油乳剂灭活苗,肌肉途径免疫8日龄和28日龄鸭,在免疫后的第7 d、14 d和21 d用含108.0ELD50和108.5ELD50的NJ01静脉注射攻击,攻毒后取1~2 d喉拭子进行病毒重分离,结果表明,免疫后7 d产生抗体,14 d产生坚强免疫力,21 d相对保护率达100%。     

猪流行性腹泻病毒COE蛋白的原核表达及免疫原性分析

为表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)中和抗原表位COE蛋白,分析其免疫原性,为PEDV的检测和亚单位疫苗的开发奠定基础.参考GenBank中PEDV COE基因序列,人工合成并经生物信息学综合分析后,将合成的基因片段插入原核表达载体pET-32a(+),构建...     

鲤疱疹病毒Ⅱ型主要免疫原性蛋白的鉴定

为了鉴定CyHV-2的主要免疫原性蛋白,本研究用分离的CyHV-2-YC-1分离株(下简称CyHV-2)感染异育银鲫尾鳍细胞系(GiCF),用蔗糖密度梯度超速离心法对细胞感染液中的CyHV-2进行纯化,纯化后的CyHV-2病毒免疫小鼠制备抗CyHV-2多克隆抗体。纯化的病毒颗粒经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和考马斯亮蓝染色后,用抗CyHV-2多克隆抗体进行Western blotting分析和质谱鉴定。结果显示,透射电镜下观察发现50%～66%的蔗糖梯度多见完整囊膜包裹的CyHV-2病毒颗粒,也有少量囊膜破损的病毒颗粒。Western blotting结果显示,抗CyHV-2多克隆抗体与多种病毒蛋白具有特异性免疫反应,质谱鉴定显示,其中8种主要免疫原性蛋白分别是ORF92、ORF115、ORF25、ORF57、ORF66、ORF72、ORF131和ORF132。研究表明,通过蔗糖密度梯度超速离心法提纯CyHV-2病毒颗粒后,本研究制备的抗CyHV-2多克隆抗体能够特异性识别CyHV-2病毒的主要免疫原性蛋白。本研究将为CyHV-2免疫学检测方法的建立以及疫苗的研制提供更多的候选抗原。     

羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株的制备与鉴定

为研究羊链球菌CVCC55001、CVCC55002株的菌种特性,制备了新的菌种批并对其形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性等进行鉴定,对其适宜培养基进行了筛选。试验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定。在免疫原性鉴定中,未免疫羊的最小致死剂量:CVCC55001为1.2×104 CFU,CVCC55002为2.6×104 CFU,免疫组能够被有效保护。使用不同培养基对该菌进行培养比对,证实血清为该菌必需成分。本研究可为羊链球菌的制备和鉴定提供参考,也为该菌的稳定培养和疫苗工艺改进提供了研究基础。     

猪伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株，传代细胞源）生产用毒种不同代次生物学特性的研究

将猪伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株，传代细胞源）基础毒种F7传至F13，并将PRV F8～PRV F13六个代次毒种接种仔猪进行安全性检验，PRV F8、PRV F10、PRV F13三个代次毒种接种仔猪进行免疫原性检验，用以研究猪伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株，传代细胞源）生产用毒种不同代次生物学特性。安全性检验结果显示，各代次毒种经颈部肌肉接种仔猪，观察期内仔猪精神、食欲、体温均正常；免疫原性检验结果显示，免疫组仔猪攻毒后精神、食欲、体温均正常，对照组仔猪攻毒后体温升高，全部发病并死亡。以上结果表明，猪伪狂犬病活疫苗（Bartha-K61株，传代细胞源）不同代次的生产毒种对仔猪均安全且保持良好的免疫原性。     

非洲猪瘟病毒MGF300-1L蛋白的生物学特性分析

为了解非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)编码的未知功能蛋白MGF300-1L的基本生物学特性，利用生物信息学手段分析了该蛋白的保守性、理化性质，并对其翻译后修饰、结构与功能进行预测；通过实时荧光定量PCR分析在病毒感染条件下MGF300-1L的表达特性；最后，利用MGF300-1L的真核表达质粒，通过激光共聚焦试验分析其亚细胞定位，并采用间接免疫荧光试验(IFA)分析其免疫原性。结果显示，MGF300-1L蛋白在基因Ⅱ型ASFV中高度保守，为碱性疏水膜蛋白，具有糖基化和磷酸化修饰，与G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(GIT2)结构的同源性为21%;MGF300-1L为ASFV的早期基因，其编码蛋白主要定位于细胞质；IFA未检测到ASFV感染猪的阳性血清中存在针对MGF300-1L蛋白的抗体。本研究发现，MGF300-1L为ASFV高度保守的非必需早期基因，其编码蛋白具有跨膜区及糖基化、磷酸化修饰，并定位于细胞质，免疫原性较差，为进一步探究MGF300-1L蛋白在ASFV复制周期中的功能奠定了基础。     

猪伪狂犬病病毒gB、gC和gD蛋白的表达及诊断抗原筛选

为研发猪伪狂犬病的免疫学诊断试剂，利用杆状病毒表达系统表达了猪伪狂犬病病毒(PRV)gB、gC和gD蛋白，并对蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定；将纯化后的3种蛋白分别制备成不同蛋白类型的疫苗免疫健康仔猪，比较蛋白的免疫原性；将3种蛋白分别作为包被抗原建立间接ELISA方法，检测从不同地区收集的临床血清，与PRV中和试验检测结果进行了比较。结果显示，成功拯救出重组杆状病毒rPRV-gB-His株、rPRV-gC-His株和rPRV-gD-His株，经IFA鉴定，均可与猪伪狂犬病病毒阳性血清发生特异性反应；表达出的蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定，可见大小分别约为120 ku、65 ku和50 ku的蛋白条带；3种蛋白免疫原性比较结果显示gD蛋白疫苗免疫组猪血清中和效价最高(1∶22.4～1∶32.0);3种蛋白建立的间接ELISA方法检测30份临床血清，结果gD蛋白作为包被抗原建立的ELISA方法与PRV中和试验的符合率最高(100.0%)。表明gD蛋白是更好的诊断抗原，可用于PRV抗体检测试剂盒的开发。