基于RT-RAA的禽流感H5亚型核酸CRISPR-Cas13a检测方法的建立

采用逆转录-重组酶介导等温核酸扩增技术(RT-RAA)和成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)检测系统，建立一种快速、高灵敏度和高特异性的禽流感病毒(AIV)H5亚型核酸检测新方法。通过分析342条禽流感病毒H5亚型的HA基因序列，选取保守性区域设计具有强特异性的CRISPR RNA(crRNA)序列以及RT-RAA引物，并对检测体系中的主要成分LwaCas13a蛋白、crRNA、TaqMan探针、T7 RNA Polymerase、NTP Buffer Mix含量进行优化，建立了基于RT-RAA的AIV H5亚型核酸CRISPR-Cas13a检测方法。取10⁵～1 copies·μL^-1含有目的基因的质粒标准品和其他亚型禽流感病毒以及其他禽病病毒分别验证和评价该方法的灵敏性和特异性。结果表明，本文设计的RT-RAA引物与crRNA特异且灵敏，其最佳反应体系中主要成分用量分别为LwaCas13a蛋白(60μg·mL^-1)2.0μL、crRNA(100μmol·L^-1)3.2μL、TaqMan...     

农杆菌介导法鉴定NTHK1基因功能与遗传转化分析

NTHK1基因是一种乙烯受体基因,由烟草中克隆而来。NTHK1能被Na Cl和PEG诱导,也能被机械损伤,说明其可能在盐和干旱的信号传递中有一定作用。所以,NTHK1可能与多种逆境胁迫有一定的关联。由于NTHK1基因在大豆中的作用还不明确,为了让其在大豆转基因育种中得到更好地应用,需要在大豆的种植中验证其功能。本文将以农杆菌介导法为基础,以大豆为实验对象,对NTHK1基因的功能及其遗传转化进行研究分析。     

论生态景观吸引力空间异化模型的应用——以江苏环太湖国际旅游区规划为例

以江苏环太湖国际旅游区规划为实验对象,重点探讨生态景观吸引力空间异化过程,即从要素磁场分化开始,经由同质景观间的引力异化,导致同类景观片区间的引力空间异化,最终推导出另一种"同质相斥、异质相吸"的新型生态景观吸引力空间结构。     

螺旋状交替环剥促进泡核桃早实丰产方法

早实丰产栽培技术一直是制约泡核桃(Juglans sigillata Dode)产业集约化经营发展的瓶颈。通过试验总结形成的螺旋状交替环剥促进泡核桃早实丰产方法,与无规则砍伤、横向环剥与环切、纵向刻伤、普通螺旋状环剥等造伤促产技术比较,具有安全性高、稳定性好、工作效率高、操作简便、容易被种植农户掌握、树势强旺反弹率低、早实丰产效果明显等优势,有效解决了泡核桃产业化连片种植营养生长与生殖生长的矛盾,在生产中具有广阔的应用前景。该技术发明为泡核桃早实丰产栽培提供了一种重要的技术手段。     

SSR分子标记实验操作注意事项

SSR分子标记已经得到普遍应用,初学者如不能很好地掌握实验操作要点,就难以在较短时间内成功地获得试验结果.本文分别介绍了DNA提取、PCR扩增和电泳检测PCR扩增产物等实验过程中容易被忽视的注意事项,以期为普及SSR分子标记实验技术服务.     

应用LAMP检测方法检测乳制品中的单核细胞增生李斯特氏菌（英文）

[目的]考察LAMP方法检测乳制品中单核细胞增生李斯特氏菌的可靠性。[方法]使用恒温环介导技术,以单核细胞增生李斯特氏菌编码的李氏溶血素O的hly A基因为研究对象设计引物,建立单核细胞增生李斯特氏菌的LAMP快速检测方法。[结果]LAMP法特异性强,灵敏度与荧光定量PCR相当。使用LAMP方法检测各种乳制品中的单核细胞增生李斯特氏菌结果与细菌分离方法检测结果完全一致。[结论]LAMP检测结果可以通过肉眼直接加以鉴别,适合乳制品突发事件情况中的检测。     

花粉介导的花青素调节基因NtAn2转化玉米研究

利用超声波辅助花粉介导法将花青素基因Nt An2导入玉米自交系郑58,并优化超声波辅助花粉介导基因转化方法的遗传转化体系。以新鲜的郑58玉米花粉为试验材料,检测其在不同浓度的蔗糖溶液中的体外萌发率;通过正交试验设计,对超声波处理功率、处理时间、处理次数3个因素进行优化,以确定最优转化组合;对收获的籽粒进行PCR检测。结果表明,玉米自交系郑58的花粉最适宜的蔗糖溶液浓度为20%;超声波处理最佳参数为:处理功率150 W,处理时间5 s/次,处理次数6次;PCR分子检测表明,其中有3粒含有阳性条带,且这3粒中有2粒呈紫色,初步证实,Nt An2已被整合到玉米基因组中,并且可以被用于对转化子的直观筛选。研究确立了超声波辅助花粉介导法遗传转化的最佳体系,为提高该植物基因转化方法的效率奠定了基础。     

调环酸钙25%悬浮剂对直播稻抗倒伏和产量性状的影响

为了研究新型植物生长调节剂调环酸钙在直播稻上的应用效果,本研究设计了调环酸钙25%悬浮剂在直播稻武运粳8号上的田间试验,用来了解其对直播稻的抗倒伏性状和产量性状的影响。试验结果表明:在直播稻武运粳8号的分蘖期使用调环酸钙25%悬浮剂12~15g/667m2均能够显著降低水稻的株高,缩短茎基部节间长度,提高水稻的抗倒伏能力,同时也能显著提高水稻产量。     

金属工艺学的教学多样化探究

<正>1利用实物、模型、实验教学各种不同的金属,其性能相差很大,比如铁丝和钢丝,它们一个柔软而另一个坚硬。其根本原因在于物质的化学成分、内部结构的差异所决定。微小的含碳量的区别导致了铁丝和钢丝在力学性能上的不同。所有金属在固态下都是晶体,而有些非金属物质在固态下是非晶体。怎样才能使学生们在课堂上理解晶体和非晶体的区别,课堂上老师向同学们展示出晶体与非晶体百宝箱:石英、云母、明矾、食盐、糖、味精;玻璃、蜂蜡、松香、沥     

金银花中戊唑醇、苯醚甲环唑的残留分析

为解决金银花种植过程中农药的使用问题,以金银花为试验对象,选用广谱杀菌剂戊唑醇和苯醚甲环唑,采用常量、倍量、二次和三次灌根处理,对最终的残留含量进行分析。头茬花各处理中苯醚甲环唑均未检出,而二茬花中戊唑醇的残留量为0.14~0.22 mg/kg,存在残留超标风险。建议使用10%苯醚甲环唑4000倍液灌根处理,防治金银花土传病害,灌根2~3次,安全间隔期15天。