解淀粉芽孢杆菌TS-1203生防制剂中助剂和载体的筛选及配方优化

为研发高效低毒的苹果树腐烂病生防制剂,采用菌丝生长速率法分别研究了不同表面活性剂、防腐剂、紫外保护剂和载体在不同浓度下对解淀粉芽孢杆菌TS-1203菌株生长及其抑菌活性的影响。助剂筛选结果表明:TS-1203的最适表面活性剂为吐温-80,其质量分数为0.50%、培养48 h时,对苹果树腐烂病菌的抑制率为88.90%,与对照无显著差异;最适防腐剂为柠檬酸三钠,其质量分数为0.10%、培养48 h时,对苹果树腐烂病菌的抑制率为93.39%,显著高于对照;最适紫外保护剂为木质素磺酸钠,其质量分数为0.50%、培养48 h时,对苹果树腐烂病菌的抑制率为84.18%,显著高于对照。采用响应面法对TS-1203生防制剂的最佳助剂条件进行了优化,得其最佳配比为:65 mL发酵液中分别加入650 μL吐温-80、164.58 mg柠檬酸钠及308.12 mg木质素磺酸钠,在此条件下,TS-1203菌剂对苹果树腐烂病菌的抑制率最高,达84.78%。载体筛选结果表明,硅藻土对TS-1203菌株生长促进作用最强,但易分层;海藻酸钠对该菌株生长抑制作用最强;有机膨润土为最佳载体。     

抗逆转录因子在百脉根中的功能分析

为提高豆科牧草百脉根抗旱方面的能力,从沙生植物胡杨和铃铛刺中克隆了4个抗逆转录因子基因并进行功能分析,从中筛选了2个具有抗旱特性的基因PeDREB2a和HhERF2,构建了以磷酸甘露糖异构酶为筛选标记的单、双价植物表达载体,转化百脉根Leo品种,结果表明,转录因子基因明显改善了百脉根的抗旱特性,经过抗旱复水试验证明转基因百脉根成活率达到100%。     

甘肃省白菜型冬油菜霜霉病发生规律

引起甘肃省白菜型冬油菜霜霉病的病原菌为十字花科寄生叉霜霉菌Peronospora parasitica (Pers.) Fr.该病菌可为害叶片、茎秆和角果,病部出现白色霜状霉层。据调查,2009年-2011年间,油菜收获期霜霉病发病最严重,平均发病率和病情指数达32.80%和28.40。冬油菜霜霉病田间孢子囊4月上旬始见,5月22日左右达到高峰,平均为71个/100cm2;温度、相对湿度分别为16℃、95%时,接种72h后冬油菜霜霉病即可发生;当5d内平均温度为10.3℃、平均相对湿度为61.0%和5d内降雨量累计值为1.6mm时,田间孢子囊数目达最大,为76个/100cm2。陇油9号发病率和病情指数比其它品种显著高。小麦-冬油菜轮作可减轻霜霉病的发生。     

裸仁美洲南瓜ISSR-PCR反应体系的正交优化

利用正交试验设计L16(44)对美洲南瓜ISSR-PCR反应体系的4因素(Mg2+,dNTPs,引物,Taq酶)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用SPSS16.0统计软件分析,结果表明,各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著影响,其中引物浓度的影响最大;本研究还筛选出各反应因素的最佳水平,建立美洲南瓜IS-SR-PCR反应的最佳体系(25μL)为:0.75 U Taq酶,2.0 mmol.L-1Mg2+,300μmol.L-1dNTPs,10μmol.L-1引物和DNA模板30 ng,2.5μL 10×buffer。     

苹果树腐烂病拮抗细菌鉴定及其抑菌作用效果测定

为了开发一种高效低毒的苹果树腐烂病生防制剂,通过对峙培养法、形态学及分子生物学的方法进行了苹果树腐烂病菌拮抗菌的分离筛选及鉴定,采用离体枝条法测定了拮抗菌对苹果树腐烂病的防效,并采用显微观察和液体培养法分别研究了拮抗菌对苹果树腐烂病菌的抑菌机理和无菌滤液对苹果树腐烂病菌生长的影响。分离筛选结果表明,从甘肃省各苹果产区果园土壤和苹果树枝条上分离得到23株细菌,2株对苹果树腐烂病菌具有较好拮抗作用,分别为LZ-1201和TS-1203,其对苹果树腐烂病菌菌丝生长抑制率分别为79.00%和85.00%。鉴定结果表明,菌株LZ-1201和TS-1203分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。离体枝条防效测定表明,拮抗菌无菌滤液对苹果树腐烂病的防效随着稀释倍数增大而降低,原液防效最高,分别为74.43%和77.07%。抑菌作用机理结果表明,两株拮抗菌均可导致苹果树腐烂病菌丝膨大畸形、原生质浓缩、释放及溶解。拮抗菌无菌滤液对腐烂病菌生长的影响测定结果表明,无菌滤液对腐烂病菌分生孢子萌发和菌丝生长量均有显著抑制作用(P0.05),其无菌滤液稀释40倍时对腐烂病菌分生孢子萌发和菌丝生长量的抑制率均高于60%,表明该拮抗菌具有很好的生防潜力。     

长枝木霉T6生防菌剂发酵条件优化及其对辣椒立枯病的防治效果

为优化拮抗菌长枝木霉Trichoderma longibrachiatum T6生防菌剂的固体发酵条件，本研究以生产中的废弃物草炭、蛭石、牛粪为主要培养基成分，采用单因素试验和响应面法，对长枝木霉T6生防菌剂在不同发酵条件下的产孢量进行测定并优化，分析了含水量、接种量、透气性等因子对该菌株生长的影响，并通过盆栽试验研究了该木霉菌剂对辣椒植株生长的影响及其对辣椒立枯病防治效果。单因素试验表明：长枝木霉T6生防菌剂产孢量的最优发酵条件为含水量60%、接种量30%、透气性9层纱布、温度28℃、pH 5.6，通过试验分析，并确定含水量、接种量、透气性为影响产孢量的3个重要因素；响应面分析得到最佳发酵条件：含水量64%、接种量27%、透气性9层纱布，在此优化条件下产孢量高达8.4×10⁸ cfu/g。从促生效果来看，土壤与木霉菌剂50：1的处理表现出较强的促生作用，与对照1（不施任何肥料）相比，其株高、地上鲜重、根系鲜重、基部茎粗、根系长度的相对增长率分别为54.90%、82.46%、89.19%、56.41%和46.62%；盆栽试验表现为施入木霉菌剂的辣椒粗壮、高大，叶片深绿，根系发达。在病害防治试验中发现，长枝木霉T6生防菌剂对辣椒立枯病具有良好的防治效果，可有效控制病害的蔓延，防效达到54.8%，与化学农药多菌灵相比，相对防效提高了12.5%。     

盐生草根际耐盐性木霉菌分离鉴定及其耐盐性评价

为获得耐盐性较强的木霉菌株,本试验采用平板分离法从采集的盐生草(Halogeton arachnoideus)根际土壤中分离鉴定了耐盐性较好的木霉菌株,并设置了不同浓度NaCl溶液模拟盐胁迫条件以评价其耐盐性。结果表明:经分离纯化共获得4株木霉菌株,其中获得1株耐盐性较好的木霉T-B菌株。结合形态学和分子生物学方法将分离获得的木霉T-B菌株鉴定为长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)。同时,利用不同浓度NaCl溶液模拟盐胁迫条件,发现当NaCl溶液浓度为100 mmol·L~(-1)时,在培养时间段(3～7 d)内长枝木霉菌株的生长速率与对照相比无显著差异(P0.05),而其产孢量显著高于对照(P 0.05),较对照增加了9.17%,表现出较强的耐盐性。该研究结果为利用木霉菌治理土壤盐碱化提供了一定的理论依据。     

12C6+重离子辐射下彩色马蹄莲生理生化和抗病性的变化及ISSR多态性分析

采用12C6+重离子辐射彩色马蹄莲,研究12C6+重离子辐射下彩色马蹄莲发生变异的生理生化机制.结果表明:辐射剂量与球茎萌发率、株高之间均呈极显著负相关,与丙二醛(MDA)含量呈极显著正相关,叶片组织内过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性和植株抗病性随着辐射剂量的增加均呈现先升高后降低的趋势,辐射的适宜剂量为10 ～ 20Gy.同时应用ISSR技术对彩色马蹄莲进行检测分析,发现22条ISSR引物能扩增出121条谱带,其中55条为多态性谱带,多态性比率为45％,辐射后球茎与对照差异表现为增加或减少了扩增片段.分析表明:12C6+重离子辐射彩色马蹄莲表现的影响主要为损伤和抑制效应,但适宜剂量范围内12C6+重离子辐射可作为彩色马蹄莲育种的手段之一.     

甘肃省苹果病虫害发生情况初探

采用抽样调查和定点调查相结合的方法,在2010-2011年对甘肃省苹果病虫害种类、分布范围和危害程度进行了系统调查。结果表明:甘肃省危害苹果的病害共22种,虫害40种,主要病虫害有苹果树腐烂病、斑点落叶病、褐斑病、锈病、山楂叶螨、金纹细蛾、绣线菊蚜、康氏粉蚧、桃小食心虫等;其中苹果树腐烂病在全省各市(州)均有发生,天水、平凉、庆阳、陇南为中度偏重发生,平均发病率达30%,斑点落叶病和褐斑病在兰州、白银、天水、平凉、庆阳、陇南、定西普遍发生,庆阳、平凉中度发生,山楂叶螨在天水、平凉、武威、庆阳中度发生,苹果绵蚜在平凉、定西轻度发生,庆阳中度偏重发生,检疫性害虫苹果蠹蛾在酒泉、嘉峪关、张掖轻度发生。     

水杨酸和壳聚糖诱导苹果叶片对斑点落叶病抗性的研究

采用喷雾接种的方法测定了不同浓度的水杨酸和壳聚糖对苹果斑点落叶病菌(Alternaria mali Roberts)的室内抑菌作用、诱导抗病效果及诱导苹果叶片后各种抗病性物质含量的变化.结果表明,不同浓度的水杨酸和壳聚糖对A.mali均无明显的抑制作用,其中100μ g/mL的水杨酸和500 μg/mL的壳聚糖对A.mali的抑制率较低,仅为5.33％和4.73％,但诱导抗病效果较显著,分别达到70.90％和77.77％.两种药剂诱导叶片后,叶片中POD、PAL活性以及木质素积累量明显高于对照,且随时间的增长,POD和PAL酶活性先升高后降低,在第3天,POD和PAL酶活性均达到峰值;而壳聚糖诱导后PPO活性随时间的增长呈升高的趋势,但水杨酸对PPO酶活性变化的影响较小.