利用SUMO系统高效表达可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白

利用pCold-SUMO可溶性原核表达载体,构建表达猪圆环病毒2型缺失核定位信号肽的Cap基因的重组表达载体pCold-SUMO-dCap,并将其转入Arctic-Express表达菌株中15℃低温诱导表达.表达产物经SDS-PAGE分析,结果表明SUMO-dCap融合蛋白获得了高效表达,可溶性SUMO-dCap融合蛋白约占总融合蛋白的50%;用NI-NTA树脂纯化可溶性的融合蛋白,然后利用SUMO蛋白酶特异性去除SUMO标签,从而得到不含任何标签的dCap蛋白,进一步的Western-blot分析表明,表达的dCap蛋白具有良好的反应原性.     

2009年我国禽流感的流行特点及趋势分析

<正>2009年我国对禽流感继续采取"免疫+生物安全措施+扑杀"的综合防疫策略,取得了较好的效果。全年的疫情形势较为平稳,未出现大规模的高致病性禽流感突发疫情。但各地的零星病例仍不时出现,其临床表现更为复杂,为诊断和防控都带来新的难题。     

现代禽病防治技术专题（二）——禽病的综合预防措施（下）

现代禽病防治技术专题（二）禽病的综合预防措施（下）廖明任涛罗开建（华南农业大学动物医学系广州５１０６４２）冯元璋（广东省仲恺农业技术学院广州５１０２２５）李万猛秦云钟伟奇（英特威有限公司香港）５防止用具、设备及活体媒介物传播疾病进入养禽场，特别是生产...     

雏鸭病毒性肝炎的诊断及防治

鸭病毒性肝炎(duck virushepatitis,DV H)是由鸭肝炎病毒(duck hepatitisvirus,DH V)引起的雏鸭急性败血性、高度致死性传染病,其特征是患鸭呈现沉郁、转圈、抽搐、角弓反张等神经症状,并具有肝脏肿胀、出血,胆囊充盈,胆汁颜色变淡等病理变化。鸭肝炎呈世界分布,其病原具有三个     

抗体信号肽基因的克隆和序列测定及真核表达载体的构建

根据抗体重链与轻链基因的核苷酸序列设计并合成了1对引物,以猪外周血淋巴细胞基因组mRNA为模板,通过RT_PCR方法获得了一大小约85bp的DNA片段,并将其克隆到pGEM_T载体上进行序列测定,测序结果显示,猪抗体信号肽基因核苷酸序列长度为57bp,编码19个氨基酸,核苷酸及推导的氨基酸序列与已发表的抗体信号肽基因序列一致,同时在信号肽基因3’端下游提供可供肽酶切割的窗口和外源基因的克隆位点。然后将信号肽基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )中,成功构建了一含信号肽序列的真核表达载体3.1_SFc,为外源基因在pcDNA3.1( )中的表达与分泌提供了一有效的信号肽,也为研究基因的功能奠定了基础。     

免疫鹅感染H5N1AIV后组织中抗氧化功能的研究

对经禽流感灭活疫苗免疫后具不同H5亚型AIHI抗体水平的50日龄马冈鹅,人工感染H5N1亚型HPAIV,采取发病死亡及扑杀鹅的脑、肝、脾、胰等器官,测定各组织中抗氧化酶如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性和脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量的变化.结果表明,H5亚型AI疫苗免疫后,抗体水平在1:0～1:32之间时,人工感染H5N1亚型HPAIV后,SOD、POD活性明显低于未感染的鹅(P<0.05或P<0.01),MDA的含量明显高于未感染的鹅(P<0.05或P<0.01);抗体水平在1:64～1:128之间时,鹅的SOD、POD和MDA值则接近来感染的鹅,说明脑、肝、脾、胰的组织中各种抗氧化酶参与了抵御H5N1亚型HPAIV的过程.     

Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据Genebank中I型鸭病毒性肝炎病毒的基因序列,设计合成了2对引物,以山东、江苏、广东、河南等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,均得到预期大小的目的片段,两对引物的检测结果一致。并对其中一种方法的敏感性、特异性进行了检测,结果表明本试验建立的用于I型鸭病毒性肝炎病毒诊断的RT-PCR方法具有较高的敏感性和特异性,最低RNA模板检出量为100pg,只能特异的检测出I型DHV,不能检出NDV、IBDV、DPV和GPV。因此,所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于鸭病毒性肝炎病毒的快速鉴别诊断。     

应用寡核苷酸芯片检测猪口蹄疫病毒的初步研究

本研究根据口蹄疫病毒(FM DV)基因组序列保守区,设计合成2对引物,通过RT-PCR方法筛选出特异引物,用Cy3标记下游引物5′端;针对这个基因片段,设计合成4条寡核苷酸探针,开展靶基因扩增和克隆、阳性质粒构建、芯片杂交与反应条件优化以及芯片灵敏度和特异性分析等试验研究,建立FM DV的基因芯片检测方法,同时应用该芯片检测了现地标本39份,证明该芯片的灵敏度高、特异性好,可以准确检测出猪口蹄疫病毒,为建立猪病基因芯片诊断技术平台奠定基础。     

H5亚型禽流感病毒间接免疫荧光快速诊断方法的建立

本研究以当前严重威胁我国养禽业的高致病性禽流感H5亚型病毒为研究对象，病毒在犬肾细胞（MDCK）上培养增殖，经蔗糖梯度离心对病毒进行纯化，免疫清洁级的新西兰公兔，高免血清经辛酸-硫酸铵法和葡聚糖G50柱纯化，制得第一抗体。以FITC标记的山羊抗兔IgG为第二抗体，通过反应条件的优化，建立了间接免疫荧光快速诊断方法。本法的最佳检测组织为心肌和胰腺，检测时间只需3小时，本法可检出人工感染后36小时尚未表现出临床症状鸡只中的病毒，对禽流感H7亚型、H9亚型病、新城疫、传染性支气管炎和传染性喉气管炎禽出败等病料进行特异性检验结果均为阴性。运用本方法对69个禽场的临床病料进行了检测，检测结果与鸡胚分离法进行比对，9个阳性场（广东省2004年9个原疫点的病料）的9份病料中，检出8份阳性；而鸡胚分离法阴性样品，本法检测结果与之完全相符。本法用于禽流感H5亚型病毒的快速诊断具有快速、简便、敏感、特异、费用低廉和不存在交叉污染等优点，在当前流行的H5亚型高致病性禽流感快速诊断中具有良好的应用前景。     

试谈高校档案的集中管理

高等学校档案是国家全部档案的组成部分,是高等学校的宝贵财富.由于高等学校形成档案的单位很多,存放分散,利用不便。如何进行集中管理,充分发挥档案的作用,值得探讨.1.集中管理的必要性高等学校的档案,就其种类而言,有文书档案、科技档案、教学档案、基建档案、设备