意大利地中海奶水牛引种观察初报

为加快我国南方河流型水牛品种改良,提高我国河流型水牛的乳用和肉用性能,从意大利引进1~2岁高产意大利地中海奶水牛59头,其中公水牛10头,母水牛49头,进行近3年的适应性观察和生产性能测定。结果表明:引进地中海奶水牛成年公牛体重平均为814.1 kg,母水牛体重平均为601.8 kg。公牛采精平均精子密度为12.25亿/m L,平均精子活力为0.54;母牛人工授精平均情期受胎率35.16%,平均初产日龄为1 299.8 d,平均怀孕天数为310.44 d;泌乳期平均产奶量为2 011.3 kg,优秀个体第1胎泌乳300 d,产奶量达到2 818.3 kg。由此表明,引进的地中海水牛很好地适应了我国南方的亚热带气侯环境,各项生产性能和指标与引进地基本相同,应加快推广应用。     

水牛SOX2基因5'调控序列的克隆与功能分析

为探讨水牛SOX2基因的转录调控机制,本试验克隆获得其长2555 bp 的5'调控序列片段,结合生物信息分析设计了-2263、-1816、-1275、-660和-407 bp 5个缺失体,并分别构建其EGFP表达报告载体,通过生产转基因早期胚胎和转染水牛胎儿成纤维细胞分析各缺失体片段的转录活性。结果发现,除-407 bp以外的各缺失体在猪4.5 d早期胚胎细胞中均能成功启动下游EGFP的表达,且随着片段缩短,其转录活性呈极显著递减趋势(P<0.01);而转染水牛成纤维细胞48 h后,除p-407-EGFP以外的各缺失体报告载体转染组均观察到少数细胞发光,转录活性两两之间差异均极显著(P<0.01),转录活性从高到底排布分别为-2263、-660、-1275和-1816 bp。p-407-EGFP载体在胚胎水平和细胞水平均未观察到荧光。以上结果表明,-660~-407 bp是构成水牛SOX2基因表达不可缺失的部分,-2263~-1816 bp中有非多能细胞特异性的增强子元件存在,而-1816~-1275 bp和-1275~-660 bp均含有多能性细胞特异性的增强子元件。     

慢病毒法生产转基因鸡的初步研究

[目的]探索利用慢病毒生产转基因鸡的适宜方法。[方法]以增强型绿色荧光蛋白为报告基因构建慢病毒载体,包装病毒后感染鸡早期受精卵,并检测不同注射操作和不同接种滴度对鸡胚存活率的影响,同时对接种病毒鸡胚的GFP表达情况进行检测。[结果]采用105、106和107IU/ml的慢病毒滴度,鸡胚孵化率分别为87%、72%和66.7%。以雏鸡血液基因组为模板PCR鉴定转基因阳性率为45.5%;冰冻切片技术发现GFP基因在鸡体内不同组织的表达强度差异显著,免疫系统内表达最强,生殖系统和肌肉组织中GFP基因无表达。[结论]试验初步筛选出较适宜的慢病毒感染滴度,该结果为研制蛋鸡生物反应器和转基因鸡抗病新品系奠定了基础。     

广西大学胚胎细胞克隆兔研究获得成功

广西大学动物繁殖研究所兔胚胎细胞核移植课题研究获得突破性进展 ,我区首例胚胎细胞克隆兔于 2 0 0 2年 5月 1 3日顺利诞生。目前 ,胚胎细胞克隆兔生长发育良好。该课题研究是在博士生导师石德顺研究员指导下 ,硕士研究生崔奎青等具体操作完成的。研究始于2 0 0 1年 5月 ,经过近一年的不懈努力 ,研究人员攻克了兔细胞核移植中的显微操作、激活、融合、体外培养、胚胎移植等技术难关 ,最终获得了胚胎细胞克隆兔的诞生。此项科研成果是继 1 995年该所成功诞生胚胎细胞克隆牛以来 ,获得的第二头克隆动物 ,胚胎细胞克隆牛是与华南师范大学合作…     

多胺与哺乳动物的孕体发育

多胺是一类含有2个或更多氨基的低分子质量脂肪族化合物,包括腐胺、亚精胺和精胺等。多胺广泛分布于生物体中,对动物的生长发育起着重要调控作用。本文从早期胚胎发育、胚胎着床、胎盘形成及着床后胚胎发育等方面,对多胺在哺乳动物孕体发育过程中的调控作用进行综述。     

水牛β-酪蛋白5′启动区的克隆和序列分析

水牛β-酪蛋白是水牛奶中最重要的蛋白质之一。本实验参照奶牛、绵羊、山羊的β-酪蛋白结构基因序列设计了一对引物P1、P2，以本地水牛基因组为模板，采用高保真Ex Taq酶，LA—PCR扩增得到水牛β-酪蛋白基因的5′启动区序列，克隆到pMD18一T上，测序后得到长4．4kb的序列。与牛、山羊和绵羊同区段基因序列进行多重序列比较，并根据多重序列比较结果预测了该区中包含的核心启动子序列TATA盒、5′-LUTR(非翻译区)、乳腺组织特异性转录因子(MGF)等重要元件。以该区序列构建的部分反刍动物的进化树与实际的进化关系保持了很好的一致。     

第三代慢病毒高效率包装系统的建立

慢病毒介导法是最有前途的转基因动物生产方法之一,高滴度慢病毒颗粒的包装是慢病毒转基因动物技术的关键。本研究应用含有增强型绿色荧光蛋白基因（eGFP）的第3代慢病毒载体系统,用脂质体转染法将慢病毒系统4质粒共转染293T包装细胞,培养48-72h收集病毒上清液,通过超速离心进行浓缩,采用批量快速测定法（LaSRT）定病毒滴度。结果显示,用脂质体转染法包装的慢病毒能成功地感染293T细胞,经检测病毒滴度达到5×10^8IU／mL以上,初步建成了高滴度慢病毒包装平台,为慢病毒介导制作转基因动物奠定了良好的研究基础。     

人TPO基因定点整合荷斯坦牛αs1-酪蛋白基因打靶载体构建

应用LA-PCR的方法,从荷斯坦牛基因组中成功地扩增获得6.0 kb和1.78 kb两个基因片段,其中6.0 kb包括αs1-酪蛋白基因5′调控序列到第三内含子部分,1.78 kb包括αs1-酪蛋白基因第十二内含子到第十四内含子之间序列,作为打靶载体的同源臂;从新生儿血液基因组中扩增获得5.5 kb的血小板生成素（thrombopoietin,TPO）基因组序列,包括第一内含子部分序列到3′终止子后的序列。以水牛β-酪蛋白基因的5′调控区4.4 kb片段为启动子,以pLoxp质粒为打靶载体骨架,加上同源臂片段和目的基因TPO的片段,经多步酶切-连接-转化-筛选-鉴定基因重组过程,最终建成长达25 kb的人TPO基因定点整合荷斯坦牛αs1-酪蛋白基因打靶载体,PCR和酶切分析表明载体构建正确,为研制定点整合荷斯坦牛乳腺生物反应器奠定了基础。     

盐城农业文化旅游开发的思考

针对盐城旅游开发的现状与存在问题,分析了当地农业文化,并结合其适宜开发的条件,提出5点开发农业文化旅游的构想。